氨基酸的薄層層析-分離鑒定氨基酸混合液ppt課件

1、如何分離鑒定氨基酸混合液？如何分離鑒定氨基酸混合液？生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心氨基酸的薄層層析氨基酸的薄層層析(Thin layer chromatography of amino acids)生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康膌掌握薄層層析法的一般原理。掌握薄層層析法的一般原理。l掌握氨基酸薄層層析法的基本操作技術(shù)。掌握氨基酸薄層層析法的基本操作技術(shù)。l掌握如何根據(jù)移動速率掌握如何根據(jù)移動速率Rf值來鑒定被分離值來鑒定被分離的物質(zhì)即氨基酸混合液）。的物質(zhì)即氨基酸混合液）。層析技術(shù)層析技術(shù)l概念：是利用化合物中

2、各組分的物理性質(zhì)的差概念：是利用化合物中各組分的物理性質(zhì)的差別如溶解度、吸附能力、分子形狀和大小、別如溶解度、吸附能力、分子形狀和大小、分子極性等使各組分在兩相中的分布不同，分子極性等使各組分在兩相中的分布不同，從而使各組分以不同速度隨流動相向前移動而從而使各組分以不同速度隨流動相向前移動而達(dá)到分離的目的。達(dá)到分離的目的。l特點(diǎn)：分離效率高，能分離各種性質(zhì)相類似的特點(diǎn)：分離效率高，能分離各種性質(zhì)相類似的物質(zhì)。不僅可用于少量物質(zhì)的分離純分，也可物質(zhì)。不僅可用于少量物質(zhì)的分離純分，也可用于大量物質(zhì)的分離純化和制備。用于大量物質(zhì)的分離純化和制備。層析的基本過程層析的基本過程 組分組分A A組分組分B

3、 B+ + 流動相流動相固定相固定相吸附吸附溶解溶解結(jié)合等結(jié)合等解除上解除上述作用述作用反反復(fù)復(fù)進(jìn)進(jìn)行行組分組分A A組分組分B B移動速度不同移動速度不同層析法的分類層析法的分類l氣相層析以氣體為流動相的層析法）氣相層析以氣體為流動相的層析法）l液相層析以液體為流動相的層析法，此為生液相層析以液體為流動相的層析法，此為生物化學(xué)領(lǐng)域里常用的方法）物化學(xué)領(lǐng)域里常用的方法）l 1.吸附層析：薄層吸附層析、吸附柱層析吸附層析：薄層吸附層析、吸附柱層析l 2.分配層析：紙層析、柱層析、薄層層析分配層析：紙層析、柱層析、薄層層析l 3.離子交換層析離子交換層析l 4.凝膠層析：柱層析、薄膜層析凝膠層析：

4、柱層析、薄膜層析l 5.親和層析親和層析l 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理茚三酮反應(yīng)茚三酮反應(yīng)(ninhydrin reaction)實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料l吸附劑：硅膠吸附劑：硅膠l粘合劑：粘合劑： 0.5%的羧甲基纖維素鈉的羧甲基纖維素鈉l氨基酸的異丙醇溶液氨基酸的異丙醇溶液l 丙氨酸、精氨酸、甘氨酸丙氨酸、精氨酸、甘氨酸l展開展開-顯色劑正丁醇、乙酸、茚三酮溶液）顯色劑正丁醇、乙酸、茚三酮溶液）l分析樣品：氨基酸混合液分析樣品：氨基酸混合液器材器材l層析板、尺子、鉛筆層析板、尺子、鉛筆l燒杯、量筒燒杯、量筒l噴霧器、吹風(fēng)機(jī)噴霧器、吹風(fēng)機(jī)l毛細(xì)管、層析缸毛細(xì)管、層析缸l藥匙藥匙l烘烤箱烘烤箱2cm1cm Ala Arg Gly MixAla Arg Gly Mix本卷須知本卷須知Rf =斑點(diǎn)至原點(diǎn)距離斑點(diǎn)至原點(diǎn)距離溶劑前緣至原點(diǎn)距離溶劑前緣至原點(diǎn)距離結(jié)果計(jì)算結(jié)果計(jì)算 小心量出斑點(diǎn)中心至原點(diǎn)中心距離，小心量出斑點(diǎn)中心至原點(diǎn)中心距離，再量出原點(diǎn)中心至溶劑前沿的距離，計(jì)算再量出原點(diǎn)中心至溶劑前沿的距離，計(jì)算出它們的出它們的 值。值。 根據(jù)值，鑒定出混合樣品中氨基根據(jù)值，鑒定出混合樣品中氨基酸的種類，并繪出層析圖譜。酸的種類，并繪出層析圖譜。復(fù)習(xí)思考題復(fù)習(xí)思考題l氨基酸薄層層析的基本原理是什么？氨基酸薄層層析的基本原理是什么？