腫瘤基因突變檢測(cè)標(biāo)本要求

1、腫瘤基因突變檢測(cè)標(biāo)本病理評(píng)估合格的標(biāo)本適用于EGFR基因突變檢測(cè)建議采用靈敏度高的ARMS檢測(cè)方法用于突變檢測(cè)的標(biāo)本用于突變檢測(cè)的標(biāo)本1. Dacic S. Adv Anat Pathol 2008; 15(4):241-247.2. Sequist LV, et al. Clin Cancer Res 2006; 12(14S):4403s-4406s.3. Bai H, et al. J Clin Oncol 2009; 27(16):2653-2659.腫瘤基因腫瘤基因突變檢測(cè)突變檢測(cè)標(biāo)本類型標(biāo)本類型冰凍組織冰凍組織外科手術(shù)標(biāo)本：最好標(biāo)本，可得高質(zhì)量腫瘤DNA支氣管鏡、穿刺活檢測(cè)標(biāo)本：量

2、少，但腫瘤DNA質(zhì)量仍好固定包埋組織固定包埋組織外科手術(shù)標(biāo)本：可得足量腫瘤DNA，但DNA片段化支氣管鏡、穿刺活檢測(cè)標(biāo)本：可得腫瘤DNA量少且片段化細(xì)胞學(xué)標(biāo)本細(xì)胞學(xué)標(biāo)本胸水、肺泡沖洗液和痰液標(biāo)本：腫瘤細(xì)胞含量不確定，通常很少血液標(biāo)本血液標(biāo)本血清、血漿標(biāo)本：含腫瘤DNA，但含量不穩(wěn)定，DNA片段化循環(huán)血腫瘤細(xì)胞：可得較高質(zhì)量腫瘤DNA，但量很少不同類型標(biāo)本處理方式不同類型標(biāo)本處理方式新鮮組織標(biāo)本新鮮組織標(biāo)本： 1、迅速低溫放置，如有條件可放置-80或者液氮保存，如果沒(méi)有條件可使用-20保 存，但是保存時(shí)間不宜太久； 2、放入組織保存液中保存，組織保存液的能滲透0.5cm厚度的組織，因此用組織保存

3、液保存時(shí)，建議組織不宜過(guò)大。核酸在組織保存液中 37 穩(wěn)定存放1天，25 穩(wěn)定存放一周，4 1個(gè)月或20 長(zhǎng)期存放石蠟組織標(biāo)本石蠟組織標(biāo)本 1、手術(shù)、穿刺、活檢標(biāo)本等放入10%中性福爾馬林中固定后制作成蠟塊，可保存數(shù)年之久。(病理科常規(guī)處理樣本方式)細(xì)胞學(xué)標(biāo)本細(xì)胞學(xué)標(biāo)本 1、胸水樣本、心包積液、腦脊液等，建議在收到標(biāo)本后兩個(gè)小時(shí)內(nèi)離心收集沉淀細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，如來(lái)不及操作可離心后將沉淀凍存至-20保存，等使用時(shí)取出；亦可將沉淀包埋成蠟塊后再切片檢測(cè)； 2、或者將樣本直接放置4保存過(guò)夜再離心收集沉淀，可能會(huì)一定程度影響DNA的完整性，但一般不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。細(xì)胞學(xué)標(biāo)本建議涂片后經(jīng)病理診斷含有腫瘤后在進(jìn)

4、行檢測(cè)。血液標(biāo)本血液標(biāo)本 1、血液標(biāo)本收集后使用EDTA抗凝，由于血漿、血清中游離核酸以及循環(huán)腫瘤細(xì)胞量極少，建議盡可能在收集標(biāo)本后2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行核酸提取，以避免核酸更深降解。標(biāo)本通常較大，能提供足夠的腫瘤組織用于檢測(cè)標(biāo)本可以是冰凍或福爾馬林固定組織 手術(shù)標(biāo)本標(biāo)本接收、固定組織處理、石蠟包埋切片及H&E染色組織學(xué)觀察支氣管鏡活檢標(biāo)本較小通常是福爾馬林固定、石蠟包埋處理建議采用靈敏度高的ARMS檢測(cè)方法細(xì)針穿刺活檢標(biāo)本較小通常是福爾馬林固定、石蠟包埋處理建議采用靈敏度高的ARMS檢測(cè)方法細(xì)胞學(xué)標(biāo)本細(xì)胞學(xué)標(biāo)本中通常腫瘤細(xì)胞數(shù)目較少，需要采用靈敏度高的ARMS檢測(cè)方法建議有條件的病理科制備細(xì)胞蠟塊：處

5、理流程：細(xì)胞學(xué)標(biāo)本經(jīng)離心處理后，常規(guī)福爾馬林固定、處理及石蠟包埋即可制備細(xì)胞蠟塊的好處： （1）便于長(zhǎng)期保存；（2）方便用于EGFR基因突變的檢測(cè)及其他分子生物學(xué)標(biāo)記物的檢測(cè)胸水或支氣管刷片或痰液涂片、染色病理診斷液基細(xì)胞學(xué)病理診斷細(xì)胞蠟塊，切片染色病理診斷四、胸水標(biāo)本處理流程收集胸水收集胸水50-500mL室溫靜置室溫靜置30分鐘，吸去上清，剩余分鐘，吸去上清，剩余 5-50mL沉淀物室溫沉淀物室溫250g離心離心10分鐘，吸去上清分鐘，吸去上清低溫保存低溫保存酒精固定涂片酒精固定涂片福爾馬林固定切片福爾馬林固定切片 福爾馬林固定的標(biāo)本 固定要及時(shí)，離體后即時(shí)處理1h 固定液：10% 中性緩

6、沖福爾馬林（新鮮配制） 固定液的量：應(yīng)為組織體積的10倍以上 固定時(shí)間：小組織6-12h，大標(biāo)本6-48h 冰凍標(biāo)本 組織離體后立即速凍1h標(biāo)本的質(zhì)量控制肺轉(zhuǎn)移性肝細(xì)胞性肝癌未檢測(cè)到腫瘤組織病理評(píng)估不達(dá)標(biāo)樣本導(dǎo)致EGFR突變檢測(cè)呈陰性結(jié)果小細(xì)胞性肺癌腫瘤細(xì)胞太少4 例肺腫塊切除標(biāo)本EGFR突變檢測(cè)呈陰性Rubbish In; Rubbish Out 選擇正確、合適的肺癌組織，是保證突變檢測(cè)成功第一步及重要的步驟選擇正確、合適的肺癌組織，是保證突變檢測(cè)成功第一步及重要的步驟診斷：確保腫瘤組織是非小細(xì)胞性肺癌腫瘤量：確保有足夠的腫瘤組織用于突變檢測(cè) 盡量保證200-400個(gè)腫瘤細(xì)胞 對(duì)于技術(shù)成熟的實(shí)驗(yàn)室，可以嘗試進(jìn)行200個(gè)腫瘤細(xì)胞的標(biāo)本檢測(cè) 5-10uM 10張切片能滿足突變檢測(cè)需求 當(dāng)細(xì)胞數(shù)較少時(shí),可以適當(dāng)增加切片數(shù),以滿足檢測(cè)