人肺炎衣原體抗體Cpn-Ab酶聯(lián)免疫分析

1、人肺炎衣原體抗體 (Cpn-Ab) 酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。96T使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中肺炎衣原體抗體(Cpn-Ab) 表達。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標本中人肺炎衣原體抗體(Cpn-Ab) 表達。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中肺炎衣原體抗體(Cpn-Ab)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體 -抗原復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。 TMB 在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度（OD 值

2、），與CUTOFF 值相比較，從而判定標本中人肺炎衣原體抗體(Cpn-Ab) 的存在與否。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml ×1瓶7終止液6ml ×1瓶2酶標試劑6ml ×1瓶8陽性對照0.5ml ×1瓶3酶標包被板12孔 ×8條9陰性對照0.5ml ×1瓶4樣品稀釋液6ml ×1瓶10說明書1份5顯色劑 A液6ml ×1瓶11封板膜2張6顯色劑 B液6ml ×1/瓶12密封袋1個標本要求1標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20 保存，

3、但應(yīng)避免反復(fù)凍融2不能檢測含 NaN3 的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照 2孔、陽性對照 2孔、空白對照 1 孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50l。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40l，然后再加待測樣品 10l。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，3. 溫育：用封板膜封板后置 37 溫育 30分鐘。4. 配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置3

4、0秒后棄去，如此重復(fù) 5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50l，空白孔除外。7. 溫育：操作同 3。8. 洗滌：操作同 5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50 l，再加入顯色劑 B50 l，輕輕震蕩混勻， 37 避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50l，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零， 450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD 值）。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié)：計算和結(jié)果判定：試驗有效性：陽性對照孔平均值1.00; 陰性對照平均值0.10臨界值（ CUT OFF ）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15陰性判定：樣品OD 值<臨界值（ CUTOFF ）者為肺炎衣原體抗體陽性判定：樣品OD 值 臨界值（ CUTOFF ）者為肺炎衣原體抗體(Cpn-Ab)(Cpn-Ab)陰性陽性。注意事項1操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。2試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。4封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5底物請避光保存。6試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630