薄層色譜基礎(chǔ)知識(shí)及斑點(diǎn)異常ppt課件

1、1薄層色譜基礎(chǔ)知識(shí)Zhuhaikangabc及斑點(diǎn)異常的原因和克服及斑點(diǎn)異常的原因和克服2 薄層色譜操作的流程操作的流程3薄層板的制備v什么是固定相？v固定相4薄層板的制備薄層板的制備v常用固定相1、聚酰胺2、硅膠3、硅澡土4、氧化鋁5、纖維素6、其他5薄層板的制備薄層板的制備v聚酰胺1、什么是聚酰胺？2、聚酰胺適合那些化合物的分離？適用于多元酚類化合物分離，如黃酮，醌類，酚酸，含羰基的化合物等 6薄層板的制備薄層板的制備v硅膠1、什么是硅膠2、硅膠適合酸性和堿性等化合物的分離7薄層板的制備硅硅膠膠硅膠G硅膠H/硅膠N硅膠GF245硅膠HF2543、實(shí)驗(yàn)室硅膠有哪些型號(hào) 硅膠S8v硅膠G和硅膠

2、S薄層板的制備1.硅膠G是指硅膠粉+15%煅石膏。2.硅膠S是指硅膠粉+15%淀粉。9v硅膠H或硅膠N薄層板的制備是指純硅膠粉，沒有添加任何粘合劑10v硅膠H和硅膠G的應(yīng)用薄層板的制備1物質(zhì)是有色的，在日光看2物質(zhì)沒有顏色但可以利用顯色劑顯色3.可以熒光顯色11v硅膠HF254和硅膠GF254薄層板的制備1.是指添加了熒光劑，如硫化鎘等。 2.應(yīng)用范圍：物質(zhì)有熒光，在254波長紫外下看其熒光；物質(zhì)沒熒光，在254波長紫外下看暗斑（熒光淬滅）12薄層板的制備無黏合劑自制板自制板含黏合劑13薄層板的制備黏合劑cmc-na溶液的配制先將稱好的CMC-Na加入所需水量的8/10,讓其充分溶漲后,再加熱

3、煮沸,然后將剩余水慢慢加入.這樣在煮沸過程中不易形成顆粒,煮沸時(shí)間短. 14薄層板的制備黏合劑cmc-na溶液的濃度溶液的濃度0.3-0.7%比較合適，實(shí)際操作中0.40.5最為實(shí)用，濃度高了將來顯色時(shí)如果有加熱過程稍不小心板子容易發(fā)黑，濃度低了鋪出來的板子不結(jié)實(shí)，不好保存 15薄層板的制備黏合劑cmc-na溶液的存放注意放置時(shí)間太長的CMC-Na溶液可能會(huì)發(fā)黃，而且可能有霉菌出現(xiàn)，最好不要使用。 16薄層板的制備操作：除另有規(guī)定外，是指將1份固定相和3份水溶液，研磨混合，置玻璃板上使涂布均勻，平臺(tái)上于室溫下晾干，活化后，置有干燥器中備用。制板17注意點(diǎn) 1.沿同一方向研磨混合，避免產(chǎn)生氣泡

4、2.厚度為0.20.3mm，涂層薄，點(diǎn)樣容易過載；涂層厚，顯色不那么明顯 3.室溫下在水平位置放置，待薄層發(fā)白近干 薄層板的制備18注意點(diǎn)5.研磨時(shí)間6.鋪板用的勻漿不宜過稠或過?。哼^稠，板容易出現(xiàn)拖動(dòng)或停頓造成的層紋；過稀，水蒸發(fā)后，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1：23，硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板涂層的厚度，進(jìn)一步影響上樣量 。 薄層板的制備19活化2.在105110度活化30分鐘。3.一般檢識(shí)水溶性成分或一些極性大的成分時(shí)，所用薄層板只在空氣中自然干燥，不經(jīng)活化即可貯存?zhèn)溆?。 薄層板的制備1.薄層板為何要進(jìn)行“活化”？20薄層色

5、譜的點(diǎn)樣v點(diǎn)樣器21薄層色譜的點(diǎn)樣潔凈 、干燥v點(diǎn)樣環(huán)境22薄層色譜的點(diǎn)樣v點(diǎn)樣的形狀1、圓點(diǎn)2、條帶狀23薄層色譜的點(diǎn)樣v點(diǎn)樣的距離1015mm810mm5mm直徑不大于2mm寬度48mm8mm直徑不大于4mm寬度510mm自制板高效板24薄層色譜的點(diǎn)樣v點(diǎn)樣的注意點(diǎn)1.不要弄破薄層板2.點(diǎn)樣量大時(shí)，少量多次，3.點(diǎn)好樣的薄層板用電吹風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干 25薄層色譜的展開v展開將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，浸入展開劑的深度為距原點(diǎn)5mm為宜，密封26薄層色譜的展開v展開劑配制2.混合展開劑要求新鮮配制，不要多次反復(fù)使用,如需分層，則按要求放置分層后取需要的一相（上層或下層），

6、備用 1.把各組成溶劑移入分液漏斗，強(qiáng)烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開劑。最好不要把各組成溶液倒入展開缸，振搖展開缸來配制展開劑。 27薄層色譜的展開v預(yù)飽和、預(yù)平衡展開缸如需預(yù)先用展開劑預(yù)平衡，可在缸中加入適量的展開劑，密閉，一般保持1530分鐘28薄層色譜的展開v展開距離展開至規(guī)定距離（一般為815cm）29薄層色譜的顯色v顯色與檢視1.供試品含有可見光下有顏色的成分可直接在日光下檢視，也可用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色劑顯色，或加熱顯色，在日光下檢視。2.有熒光的物質(zhì)或遇某些試劑可激發(fā)熒光的物質(zhì)可在356nm紫外光燈下觀察熒光色譜。3.對于可見光下無色，但在

7、紫外光下有吸收的成分可用帶有熒光劑的硅膠板（如GF254板），在254nm紫外光燈下觀察熒光板面上的熒光猝滅物質(zhì)形成的色譜301、拖尾現(xiàn)象2、邊緣效應(yīng)3、S形及波形斑點(diǎn) 4、念珠狀斑點(diǎn) 5、斑點(diǎn)與對照品對不上 薄層色譜中斑點(diǎn)的異常異?，F(xiàn)象6、其它31拖尾原因拖尾原因斑點(diǎn)異常1.點(diǎn)樣量過載2.點(diǎn)樣圓點(diǎn)未重合3.展開劑4.薄層析5.其他32拖尾斑點(diǎn)異常與克服1.點(diǎn)樣量過載任何吸附劑，它們的負(fù)載化合物的能力是有一定限度的，因此點(diǎn)樣過量而超載后，過剩的化合物被拋在后面，形成拖尾現(xiàn)象 克服方法：A.點(diǎn)樣時(shí)可以點(diǎn)成條帶狀B.選用稍厚一點(diǎn)的板33拖尾斑點(diǎn)異常與克服2.點(diǎn)樣圓心未重合樣點(diǎn)雖然在同一垂直線上但樣

8、點(diǎn)上下圓心沒有重合，致使樣點(diǎn)呈近橢圓形，也是形成拖現(xiàn)象的原因之一 克服方法：點(diǎn)樣位置要準(zhǔn)確，預(yù)先設(shè)計(jì)好點(diǎn)樣的位置，然后用鉛筆作好標(biāo)記，每次點(diǎn)樣對準(zhǔn)圓點(diǎn)34拖尾斑點(diǎn)異常與克服3.展開劑的配制35拖尾斑點(diǎn)異常與克服4.薄層板為了提高樣品的分離度和減少斑點(diǎn)的拖尾，鋪板時(shí)在硅膠中加入某些酸（如硼酸，草酸），堿（如氫氧化鈉），鹽（如磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉）等將硅膠板改性 克服方法：硅膠預(yù)制板可用浸板的辦法改性 36邊緣效應(yīng)2、薄層板3、展開劑未預(yù)飽和斑點(diǎn)異常1、點(diǎn)樣邊距4、其他37邊緣效應(yīng)斑點(diǎn)異常與克服1.點(diǎn)樣邊距38邊緣效應(yīng)斑點(diǎn)異常與克服2.薄層板薄層板厚薄不均勻，兩邊厚或者兩邊薄都是形成邊邊緣效應(yīng)的

9、原因之一克服方法：選用符合要求的薄層板。（符合要求的薄層板應(yīng)該在反射光下板面平滑均勻，無氣泡，灰塵或顆粒，透射光下薄層紋理均勻細(xì)膩）39邊緣效應(yīng)斑點(diǎn)異常與克服3.預(yù)飽和在薄層板上一般是邊緣上的展開劑較容易揮發(fā),如果這幾個(gè)有機(jī)溶劑的揮發(fā)性能差異比較大,那么就會(huì)造成薄層板上邊緣和中間展開劑比例的差異而產(chǎn)生展開速度不一致的現(xiàn)象 克服方法：展開前要充分飽和 40波形斑點(diǎn)S形斑點(diǎn)斑點(diǎn)異常vS形及波形斑點(diǎn) 41vS形斑點(diǎn) 斑點(diǎn)異常S形斑點(diǎn)是指含多咱成分的樣品層析時(shí)，其斑點(diǎn)不是順次分布于原點(diǎn)至展開前沿的垂直線上，而是呈S形分布于垂直線兩側(cè)。42v波形斑點(diǎn) 斑點(diǎn)異常波形斑點(diǎn)：是指某些含多種成分的樣品液，順次點(diǎn)

10、于同一起始線上，展開后，這些成分相同的斑點(diǎn)不吃不開直線狀平行于起始線，而是呈波浪形。43vS形及波形斑點(diǎn)斑點(diǎn)異常2.為避免上述現(xiàn)象的出現(xiàn)，應(yīng)選用厚薄均勻的薄層板1.產(chǎn)生原因：多數(shù)是因?yàn)楸影搴癖〔粍颉?4v念珠狀斑點(diǎn) 斑點(diǎn)異常念珠狀斑點(diǎn)是指化合物斑點(diǎn)之間距離小，相互連接呈念珠狀 45念珠狀斑點(diǎn)異常與克服產(chǎn)生原因及克服方法1.樣品中成分過多，在下定長度的薄層板上，排布不開，彼此重疊?？蛇m當(dāng)增加層析板長度，使斑點(diǎn)距離加大或采用雙向?qū)游觯顾煞窒騼蓚€(gè)方向展開可以避免念珠狀斑點(diǎn)的出現(xiàn)。 2.多次點(diǎn)樣時(shí)，點(diǎn)樣中心不重合，形成復(fù)斑。應(yīng)以適當(dāng)濃度供試液一次點(diǎn)樣，若多次點(diǎn)樣，點(diǎn)樣中心必須重合。46vRf值

11、不穩(wěn)定 斑點(diǎn)異常1.溫度2.濕度3.手工制板4.溶劑質(zhì)量47vRf值不穩(wěn)定斑點(diǎn)異常與克服1.溫度溫濕度對薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下，通常溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫下分離，例如人參皂苷。 48vRf值不穩(wěn)定斑點(diǎn)異常與克服2.濕度49vRf值不穩(wěn)定斑點(diǎn)異常與克服2.濕度濕度的影響，主要是影響薄層板的吸附能力，導(dǎo)致選擇性（容量因子）的變化，濕度應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況確定。溫度控制使用空調(diào)器或冰柜，濕度控制是通過在另一展開槽放置相應(yīng)濃度的硫酸 50vRf值不穩(wěn)定斑點(diǎn)異常與克服濕度的控制51vRf值不穩(wěn)定斑點(diǎn)異常與克服手工制板由于手工制的板的技巧不同，所制備的薄層板的質(zhì)量不同造成重現(xiàn)性差52v樣品