拳參正丁醇提取物對(duì)異丙腎上腺素致大鼠心肌肥厚的保護(hù)作用

1、拳參正丁醇提取物對(duì)異丙腎上腺素致大鼠心肌肥厚的保護(hù)作用             作者：張鄉(xiāng)城，薛金雄，楊曉光，葉春榮，汪有彪，潘吳媛，黃志華，曾靖【摘要】  目的觀察拳參正丁醇提取物對(duì)異丙腎上腺素所致大鼠心肌肥厚的保護(hù)作用及探索其相關(guān)作用機(jī)制。方法采用ISO 1 mg·kg-1·d-1，背部皮下注射，連續(xù)10 d，建立大鼠心肌肥厚模型。造模第2天開始給大鼠灌胃不同濃度的拳參正丁醇提取物或NS，連續(xù)14 d，末次給藥后禁食12 h，稱重，麻醉后斷頭

2、取血，取心臟稱重后全心重量指數(shù)及左心重量參數(shù)；采用試劑盒測(cè)定心肌組織NOS活性及MDA含量。結(jié)果ISO模型組大鼠心臟重量參數(shù)及左心室重量指數(shù)明顯提高，左心室NOS含量降低，MDA 含量升高；與模型組相比，拳參正丁醇提取物組左心室重量指數(shù)下降，心臟重量指數(shù)有下降趨勢(shì)（無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），心肌組織NOS活性顯著升高及MDA 含量降低。結(jié)論拳參正丁醇提取物對(duì)異丙腎上腺素所致大鼠心肌肥厚具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制與清除OFR和提高NO水平有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  拳參正丁醇提取物； 異丙腎上腺素； 心肌肥厚Abstract：ObjectiveTo observe the protective effe

3、ct of Polygonum bistorla L. n-Butyl Alcohol Extract (PBNA) on myocardial hypertrophy caused by isopropylarterenol (Iso) in rats and explore its possible mechanism. MethodsThe myocardial hypertrophy model was established through hypodermic injection for 10 consecutive days at back skin with Iso, 1 mg

4、/（kg·d）.Once the model was formed, the rats were administrated with various concentrations of PBNA or NS in intragastric way from the second day for 14 days. 12 h after the last administration,blood and heart were taken under anesthesia, the indexes of whole heart and left ventricle were calcul

5、ated and NOS activity and MDA level of myocardial tissue were determined with kits. ResultsThere was obvious difference between Iso group and Ns group. Indexes of whole heart and left ventrical in Iso group were much higher than those in control one, NOS activity was decreased while MDA concentratio

6、n was increased in left ventricle. However, both indexes of whole heart and left ventricle were decreased in BAEB group, furthermore, NOS activity was strikingly enhanced and MDA concentration was reduced in PBNA group. ConclusionBAEB has a protective effect on myocardial hypertrophy caused by Iso,

7、and its mechanism may be related with clearance of OFR and NO concentration promotion.Key words：Polygonum bistorla L. n-Butyl alcohol extact;  Isopropylarterenol;  Myocardial hypertrophy    中藥拳參具有清熱、鎮(zhèn)驚、利濕等功效，主要成分為沒食子酸、丁二酸、槲皮素、槲皮素-5-O-D-葡萄糖苷、原兒茶酸等1，2。有實(shí)驗(yàn)表明，其正丁醇提取物(Polygonum b

8、istorla L. n-Butyl Alcohol Extract)具有鎮(zhèn)痛3、中樞抑制4、心肌缺血保護(hù)等5作用。心肌肥厚是以心肌細(xì)胞體積增大和蛋白含量增多為主要特征的代償反應(yīng)，是對(duì)各種心血管刺激因子的適應(yīng)反應(yīng)，但持續(xù)的心肌肥厚會(huì)導(dǎo)致死亡。資料表明，連續(xù)用ISO刺激可誘導(dǎo)大鼠心肌肥厚6，本實(shí)驗(yàn)利用ISO背部皮下注射構(gòu)造大鼠心肌肥厚模型，研究拳參正丁醇提取物對(duì)ISO所致大鼠心肌肥厚的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。1  器材和方法1.1  藥品和試劑  拳參正丁醇提取物（由沈陽藥科大學(xué)提供）；鹽酸異丙腎上腺素注射針劑（上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)H31021344）

9、，一氧化氮合酶（NOS）、丙二醛（MDA）測(cè)定試劑盒（南京建成生物工程研究所）。1.2 儀器  722N可見光分光光度計(jì)（上海精密儀器有限公司）；賽多利斯BS224S型天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，7600-020+ISE全自動(dòng)生化分析儀(日本日立)。1.3  動(dòng)物 SD大鼠，雄性，體重200250 g，購自江西中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（贛）2005-0001。1.4  方法1.4.1  分組及給藥 雄性SD大鼠24只，隨機(jī)分成4組： 正常對(duì)照組；心肌肥厚模型組；心肌肥厚模型+1mg/kg PBNA組；心肌肥厚

10、模型+0.5 mg/kg PBNA組。組大鼠背部皮下注射ISO 1 mg·kg-1·d-1，連續(xù)10 d，制作心肌肥厚模型，正常對(duì)照組給予等體積生理鹽水。于造模后第2天開始組分別灌胃給以PBNA 1，0.5 mg/kg，連續(xù)14 d，NS對(duì)照組和ISO模型組大鼠每日灌胃給予相同體積的生理鹽水。1.4.2  心臟重量指數(shù)和左心室重量參數(shù)的測(cè)定 末次給藥后禁食12 h，稱重后麻醉斷頭取血后，取出心臟，去除結(jié)締組織，用生理鹽水洗凈，吸干后稱全心重量，剪除心房和右心室，稱左心室重量，計(jì)算心臟重量指數(shù)和左心室重量參數(shù)：心臟重量指數(shù)=全心重(mg)/體重(g), 左

11、心室重量參數(shù)(LHWW/BW)=左心室重(mg)/體重(g)。1.4.3  測(cè)定左心室NOS活性及MDA含量取約500600 mg左心室心肌組織冰浴下配制10%勻漿，3 500 r/min，離心10 min，取上清液按試劑盒說明測(cè)定NOS活性及MDA含量。1.4.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Graphpad prism 4.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果以柱狀圖表示，P0.05,認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。1         2  結(jié)果2.1  PBNA對(duì)心肌肥厚大鼠心臟重量指數(shù)和左心

12、室重量參數(shù)的影響 ISO模型組大鼠心臟重量指數(shù)及左心室重量參數(shù)值較正常對(duì)照組明顯增加(P<0.001)。1 mg/kg PBNA劑量組與心肌肥厚模型組比較心臟重量指數(shù)有下降趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（見圖1）。1 mg/kg PBNA劑量組與心肌肥厚模型組比較左心室重量參數(shù)有下降趨勢(shì)，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)（見圖2）。提示拳參正丁醇提取物有保護(hù)大鼠心肌的作用。2.2  PBNA對(duì)心肌肥厚大鼠左心肌組織NOS活性的影響  與正常對(duì)照組比較，ISO模型組NOS有一定下降趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與ISO模型組相比，PBNA低濃度及高濃度組NOS均有

13、顯著提高(P<0.01及P<0.001)，且呈劑量依賴性（見圖3）。2.3  PBNA對(duì)心肌肥厚大鼠心肌組織MDA含量的影響  與正常對(duì)照組比較，ISO模型組MDA有明顯升高(P<0.01)。與ISO模型組相比，PBNA低濃度及高濃度組MDA下降，且呈劑量依賴性（見圖4）。3  討論    本實(shí)驗(yàn)研究了PBNA對(duì)ISO所致大鼠心肌肥厚的保護(hù)作用，結(jié)果表明 PBNA能有效減輕ISO所致大鼠心肌肥厚。異丙腎上腺素為腎上腺素受體激動(dòng)藥，對(duì)受體有很強(qiáng)的激動(dòng)作用，可加快心率、加速傳導(dǎo)，心肌耗氧量明顯增加，環(huán)磷酸腺苷(

14、cAMP)生成和糖原合成增加，從而促進(jìn)心肌細(xì)胞總蛋白和非收縮蛋白合成，心肌細(xì)胞肥大。另外，循環(huán)和心臟局部?jī)翰璺影泛吭黾?，可引起脂質(zhì)代謝異常及引起體內(nèi)氧自由基（OFR）生成增加7。OFR可進(jìn)攻生物膜的類脂分子，引起類脂分子中多不飽和脂肪酸(PUFA)的脂質(zhì)過氧化，從而損傷生物膜，產(chǎn)生大量的脂質(zhì)自由基。OFR可致線粒體結(jié)構(gòu)破壞和功能障礙，抑制ATP合成體系中的酶，使ATP合成減少，心肌能量缺乏，導(dǎo)致心肌肥厚的發(fā)生7,8。    過多的OFR可使細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)-脂質(zhì)過氧化，MDA為過氧化脂質(zhì)的降解產(chǎn)物，實(shí)驗(yàn)中觀察到，在注射ISO的同時(shí)給予 PBNA，可呈劑量依賴性地降

15、低MDA含量，表明PBNA具有清除OFR的作用，并能奪取過氧化過程中產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化自由基，生成活性較低的多酚自由基，打斷自由基氧化鏈反應(yīng)，有效清除體內(nèi)有害自由基8，9，從而對(duì)心肌起保護(hù)作用。    NO作為體內(nèi)重要的生理因子，大量研究證實(shí)，NO可以通過舒張血管，減少心臟的前后負(fù)荷，降低心肌氧耗，直接滅活氧自由基等途徑，抑制心肌和血管增殖，抑制心肌肥厚，產(chǎn)生心肌保護(hù)作用。NO是NOS催化L-Arg和分子氧反應(yīng)產(chǎn)生的。本實(shí)驗(yàn)證明拳參正丁醇提取物可提高心肌肥厚大鼠心肌組織NOS的活性，并呈劑量依賴性。這可能是PBNA抑制心肌肥厚的機(jī)制之一 10，11。 &#

16、160;  本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PBNA能抑制ISO連續(xù)注射引起的心肌肥厚,具有保護(hù)心肌的結(jié)構(gòu)和功能的作用，其作用與清除OFR和提高NO水平有關(guān)。【】  1劉曉秋，陳發(fā)奎，吳立軍,等拳參的化學(xué)成分J.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2004(3)：187.2Zeng jing，Huang xianhua，Lai fei，et al.Antiarrhythmic Effects of Polygonum Bistorta L.Agueous extractJ.Drug Development Research 2002,55（4）:264.3曾靖，李良東，黃志華,等拳參水提取物鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)觀

17、察J.臨床康復(fù)，2005,9（6）：80.4曾靖，黃志華,周 俐，等.拳參正丁醇提取物中樞抑制作用的研究J.贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，23（4）：359.5葉和揚(yáng)，黃志華，汪秀榮，等拳參正丁醇提取物保護(hù)大鼠心肌缺血再灌注損傷的劑量依賴性效應(yīng)J.中國(guó)臨床康復(fù)，2005，39（9）：118.6秦泰春，頤振綸，劉世增槲皮素對(duì)異丙腎上腺素所致大鼠心肌肥厚的影響J.中國(guó)藥通報(bào)，1999，15(4)：329.7胡宇馳，侯家玉知母、黃芪對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性心肌肥厚及應(yīng)激反應(yīng)能力的影響J.中國(guó)中藥雜志，2003，28(4)：369.8趙寶路氧自由基和天然抗氧化劑M.北京：出版社，1999：199.9張淑華，曲福軍實(shí)驗(yàn)性大鼠心肌肥厚與氧自由基的關(guān)系J.同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2002，23(1)：18.10Paulus WJThe role of nitric oxide i