免疫學(xué)實驗指導(dǎo)書

1、免疫學(xué)實驗指導(dǎo)劉佳斌編 生命科學(xué)學(xué)院 生物技術(shù)系 2005.3實驗 1動物的注射采血及血清制備 家兔采血有耳靜脈采血，耳動 脈放血，心臟采血和勁動脈放血法，耳緣靜脈采血一般 適用于只需少量血液，常用于免疫注射采少量 血，測其效價，心臟采血和耳動脈采血法，耳 緣靜脈采血一般只適用少量采血。 常用于免疫注射采少 量血， 測其效價。 心臟采血和耳緣動 脈采血可采大量血有能保存動物， 從動脈可采大量， 動物死 去。 兔一般采血 20ML 不影響其 存活。雞一般用心臟采血法，每只雞一次取血 20ML ，不影響其存活，經(jīng) 36 個月后，可再 次采血。注射途徑一般有皮下、靜脈、皮內(nèi)和腹腔。一、目的與內(nèi)容：一

2、 目的1. 學(xué)習(xí)動物不同部位的采血方法2. 練習(xí)對家兔耳靜脈的注射方法3. 用離心法制備血清二 內(nèi)容1、雞心臟采血2、家兔采血3、制備血清二、材料與用品一 材料兔、雞二 用品生理鹽水、注射器、剪刀、鑷子、試管、離心管、離心機(jī)三、操作與觀察一 雞心臟采血1、固定雞腿、翅膀，拔取心臟部位羽毛，用手將雞按定。2、尋找內(nèi)肋骨到肩胛部皮下靜脈，心臟在此靜脈分支下面，以食指觸摸心跳，消毒， 垂直刺入 針頭，如觸及肋骨那么稍后退，將針頭稍后偏于胸骨，切不可硬往里插，針頭向里刺 入后，可感到心臟 跳動。此時，針頭刺入心臟，徐徐抽取血液。采血 20ML 取下針頭，將血 液放入離心管。二 家兔采血1、家兔心臟采血

3、1固定兔，剪取左前胸心臟部位的毛，酒精棉球消毒皮膚。2 用左手食指、中指、無名指防在右胸處，輕輕向左推，將心臟推至左惻固定，拇指在胸左惻由下向上數(shù)至第三至四肋骨探測心臟搏動最劇烈處3將針頭從搏動處刺入心臟，假設(shè)準(zhǔn)確徐徐抽取血液，足量后拔除，再改變方向成徑直刺入心臟，取血液 20ML ，放入離心管。 4 家兔靜脈注射，在耳緣靜脈注入1ML 生理鹽水。2、家兔耳緣靜脈采血。三 制備血清四、作業(yè)與思考1、心臟采血關(guān)鍵什么？需要注意哪些問題？ 2、抓兔子時為什么不能抓它的雙耳？正確的抓取方 法是什么？實驗 2抗原與免疫血清的制備 將抗原注射入動物體內(nèi)，刺沖動物 的 B 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，產(chǎn)生特異性

4、抗體。待 其血清中累積大量抗體時， 采其血液別離血清， 即 抗體的免疫血清。 抗原量低到一定程度時， 抗體不能產(chǎn)生或用現(xiàn)有方法不能測出， 但超過最高限度， 又對抗體產(chǎn)生抑制作用。 本實驗抗 原為細(xì)菌細(xì)胞，采用每毫升含 9 億個細(xì)菌比擬恰當(dāng)。一、目的與內(nèi)容一 目的1、抗原與抗體的制備方法2、為凝集實驗制備材料二 內(nèi)容1、抗原的制備2、免疫血清的制備二、材料與用品一 材料大腸桿菌，家兔二 用品麥?zhǔn)媳葷峁?，試管，注射器?9 號、 7 號針頭，離心機(jī)等0.5%的石炭酸生理鹽水三、操作與觀察一抗原的制備 1 取 5ML0.5% 的石炭酸生理鹽水，注射大腸桿菌斜面，洗下菌臺 2 用無菌毛細(xì)菌滴管吸取洗下

5、的菌液，注入無菌小試管 3 將此含有菌液的小試管放 60 度水浴箱中 1 小時，并不時搖動。4取一與比濁管同質(zhì)量的小試管，加菌液1ml，再加石炭酸生理鹽水 4 ml 或更 多，是原菌液濃度而定 ，混勻后各比濁管比濁。麥?zhǔn)媳葷岱ㄔ恚?某一未知菌濃度， 菌液在投射光作用下用肉眼與某一比濁管比擬， 如 果二 者透光度相同，即可目測該菌大致濃度。5稀釋：用0.5 %勺生理鹽水，待菌液稀釋 9億/ml，即等濁于第3支。二免疫血清的制備 1 注射動物：耳緣靜脈注射抗原。214日采血1ml,別離血清，測其效價，合格即大量采血。 3心臟采血 4別離免疫血清。1日0.2m14日0.6m12日0.4m16日2.

6、0m1四、作業(yè)與思考1.在動物體內(nèi)制備免疫血清為何要屢次注射？2 ?制備大腸桿菌抗原時，使用石炭酸生理鹽水和加熱6 0C1h的目的是什么？實驗3環(huán)狀沉淀反響可溶性抗原與相應(yīng)抗體反響，在有電解質(zhì)的情況下，會產(chǎn)生細(xì)微的沉淀，稱為沉淀反響。環(huán)狀沉淀反響是使抗原抗體在沉淀管內(nèi)形成交界面，然后在此交界面處出現(xiàn)一環(huán)狀乳白色沉淀物，出現(xiàn)此環(huán)狀反響的抗原最頂峰，稀釋度為沉淀素效價。一、目的與內(nèi)容一目的通過沉淀素的效價測定，學(xué)習(xí)環(huán)狀沉淀反響的操作方法及結(jié)果觀察。二內(nèi)容雞血清與免抗雞免疫血清發(fā)生沉淀反響。二、材料與用品一材料雞血清、兔血清、免抗雞免疫血清二用品小試管、1ml吸管量筒、生理鹽水三、操作與觀察1?將雞

7、血清以1 : 25稀釋，去該液1ml，用倍比稀釋法稀釋為各種濃度1#1、2 2分別表示自第1管、第2管中吸取1ml以此類推。試呂號1234567生理鹽水/ml11111111 : 25 血清/ml1,#八1 1*1 2*1 3*,# 一1 4*1 5*1 6*血清稀釋液1/501/1001/2001/4001/8001/16001/32002?將 9個干潔小試管插在試管架上，使直立。3?用吸管吸取1: 2的免抗雞免疫血清，參加小試管底部，每管約兩滴。4?用另一吸管吸取上面稀釋的雞血清抗原，按下表參加各管。試管123456789免抗雞1:2 /滴222222222稀釋度雞血清1/501/1001

8、/2001/4001/8001/16001/3200生理鹽水兔血清量/滴444444444從最頂峰稀釋度加起，參加時沿壁徐徐參加，使與下層免抗雞免疫血清之間形成界面，切勿搖動。5?室溫靜置15 30分鐘，觀察試管中的兩液面交界處，有無白色沉淀出現(xiàn)。6?吉果記錄：由白色沉淀“ +，無沉淀“一，出現(xiàn)沉淀最大稀釋度的試管其稀釋度倒數(shù)為沉淀素效價。四、作業(yè)與思考1.結(jié)果：試管123456789抗原1/501/1001/2001/4001/8001/16001/3200生理鹽水兔血清結(jié)果該沉淀素效價為實驗4玻片凝集反響細(xì)菌細(xì)胞成紅細(xì)胞顆粒抗原與特異性抗體結(jié)合后，在有電解質(zhì)的情況下，會出現(xiàn)肉眼可以看見的凝集塊，稱為凝集反響。玻片凝集法主要利用抗血清來鑒定未知菌，也可用來顯示 免疫血清的存在，這是一種定性方法。一、目的與內(nèi)容一目的1?了解血清學(xué)反響的根本原那么。2?學(xué)習(xí)玻片凝集現(xiàn)象。3?觀察凝集現(xiàn)象。二內(nèi)容兔抗血清與與大腸桿菌發(fā)生凝集反響。二、材料與用品一材料大腸桿菌、注射大腸桿菌抗原后的家兔二用品瓊脂斜面、培養(yǎng)物、生理鹽水、玻片、接種環(huán)、血清三、操作與觀察1?采集家兔血液10ml，離心，制備抗血清。2?以1 :10用生理鹽水稀釋抗血清。3?在玻片一端用小滴管加 1滴1 :10抗血清，另一端加1滴生理鹽水。4?挑取少許細(xì)菌混入生理鹽水中，再攪勻，挑取少許細(xì)菌混入