《chapter蛋白質(zhì)》ppt課件

1、第四節(jié)第四節(jié) 蛋白質(zhì)分子構(gòu)造與功能的關(guān)系蛋白質(zhì)分子構(gòu)造與功能的關(guān)系一一.蛋白質(zhì)一級(jí)構(gòu)造與功能的關(guān)系蛋白質(zhì)一級(jí)構(gòu)造與功能的關(guān)系 研討蛋白質(zhì)一級(jí)構(gòu)造與功能的關(guān)系主要是：研討多肽鏈中不同部位的殘基與生研討蛋白質(zhì)一級(jí)構(gòu)造與功能的關(guān)系主要是：研討多肽鏈中不同部位的殘基與生物功能的關(guān)系。物功能的關(guān)系。 進(jìn)展這方面的研討常用的方法有：同源蛋白質(zhì)氨基酸序列類似性分析、氨基酸殘進(jìn)展這方面的研討常用的方法有：同源蛋白質(zhì)氨基酸序列類似性分析、氨基酸殘基的化學(xué)修飾等。基的化學(xué)修飾等。 例例1 鐮刀形貧血病鐮刀形貧血病(一種血紅蛋白分子病一種血紅蛋白分子病)患者血紅細(xì)胞合成了一種不正常的血紅蛋白患者血紅細(xì)胞合成了一種不

2、正常的血紅蛋白Hb-S, hemoglobin - sickle它與正常的血紅蛋白它與正常的血紅蛋白Hb-A的差別：僅僅在于的差別：僅僅在于鏈的鏈的N-末端第末端第6位殘基發(fā)生了變位殘基發(fā)生了變化化Hb-A第第6位殘基是極性谷氨酸殘基，位殘基是極性谷氨酸殘基，Hb-S中換成了非極性的纈氨酸殘基中換成了非極性的纈氨酸殘基使血紅蛋白細(xì)胞收縮成鐮刀形，輸氧才干下降，易發(fā)生溶血使血紅蛋白細(xì)胞收縮成鐮刀形，輸氧才干下降，易發(fā)生溶血(導(dǎo)致貧血導(dǎo)致貧血)這闡明了蛋白質(zhì)分子構(gòu)造與功能關(guān)系的高度一致性這闡明了蛋白質(zhì)分子構(gòu)造與功能關(guān)系的高度一致性例例2 一級(jí)構(gòu)造的部分?jǐn)嗔雅c蛋白質(zhì)的一級(jí)構(gòu)造的部分?jǐn)嗔雅c蛋白質(zhì)的激活

3、激活 體內(nèi)的某些蛋白質(zhì)分子初合成時(shí)，體內(nèi)的某些蛋白質(zhì)分子初合成時(shí)，常帶有抑制肽，呈無活性形狀，稱為常帶有抑制肽，呈無活性形狀，稱為蛋白質(zhì)原蛋白質(zhì)原.蛋白質(zhì)原的部分肽鏈以特定蛋白質(zhì)原的部分肽鏈以特定的方式斷裂后，才變?yōu)榛钚苑肿印５姆绞綌嗔押?，才變?yōu)榛钚苑肿?。胰島素的激活：胰島素，在剛合成時(shí)，胰島素的激活：胰島素，在剛合成時(shí)，是一個(gè)比成熟的胰島素分子大一倍多是一個(gè)比成熟的胰島素分子大一倍多的單鏈多肽，稱為前胰島素原的單鏈多肽，稱為前胰島素原前胰島素原的前胰島素原的N-末端有一段肽鏈，稱末端有一段肽鏈，稱為信號(hào)肽為信號(hào)肽.信號(hào)肽被切去，剩下的是胰島素原。信號(hào)肽被切去，剩下的是胰島素原。胰島素原比胰島

4、素分子多一段胰島素原比胰島素分子多一段C肽，只肽，只需當(dāng)需當(dāng)C肽被切除后才成為有肽被切除后才成為有51個(gè)殘基，個(gè)殘基，分分A、B兩條鏈的胰島素分子單體兩條鏈的胰島素分子單體.例3 血液凝固與氨基酸序列的部分?jǐn)嗔?在動(dòng)物體內(nèi)的某些生物化學(xué)過程中，蛋白質(zhì)分子的部分肽鏈必需先按特定的方式斷裂，然后才呈現(xiàn)生物活性。蛋白質(zhì)分子的這一特性具有它的重要生物學(xué)意義。它是在生物進(jìn)化過程中開展起來的，是蛋白質(zhì)分于的構(gòu)造與功能具有高度一致性的表現(xiàn)。1.血液凝固的生物化學(xué)原理 血液凝固是一系列復(fù)雜的生物化學(xué)過程。這一過程的主要環(huán)節(jié)有二：一是血漿中的凝血酶原遭到血漿和血小板中一些因子的激活而構(gòu)成凝血酶(thrombin

5、)；二是血漿中的纖維蛋白原在凝血酶的激活下轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄岳w維蛋白(fibrin)網(wǎng)狀構(gòu)造，使血液變成凝膠。凝血酶原是一種糖蛋白。在凝血酶原致活物的催化下，凝血酶原分子中的二個(gè)肽鍵(Arg274-Thr275和Arg323-Ile324發(fā)生斷裂，釋放出分子量力32000的氨基末端片段構(gòu)成有活性的凝血酶。凝血酶由二條肽鏈經(jīng)過一個(gè)二硫鍵交聯(lián)而成，一條肽鍵A鏈)含49個(gè)殘基，另一條肽鍵含259個(gè)殘基。纖維蛋白原分子長46nm，分子量為340 000，屬纖維狀蛋白質(zhì)。每一分子含6條肽鏈，這6條肽鏈兩兩一樣，分三種類，分別稱為鏈(含600個(gè)殘基左右)、鏈(461個(gè)殘基)和鏈(410個(gè)殘基)。整個(gè)分子由對(duì)稱的

6、兩部分組成，6條肽鏈的N末端部分集中在中間。纖維蛋白原分子共含29個(gè)二硫鍵，6條肽鏈由這些二硫鍵交聯(lián)成一個(gè)整體分子。肽鏈的氨基酸之間有順序同源景象。纖維蛋白原一級(jí)構(gòu)造表示圖 纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白的過程是在凝血酶的作用下，從二條鏈和二條鏈的N末端各斷裂一個(gè)特定的肽鍵(Arg-Gly-)，釋放出二個(gè)纖維肽A和二個(gè)纖維肽B。 A、B肽切除后，減少了蛋白質(zhì)分子的負(fù)電荷，促進(jìn)了纖維蛋白分子的直線聚合和側(cè)向聚合，從而構(gòu)成網(wǎng)狀構(gòu)造的纖維蛋白。電子顯微鏡察看闡明，纖維蛋白單體的聚合是按1/2錯(cuò)位的方式進(jìn)展的。例例4 同源蛋白質(zhì)同源蛋白質(zhì) 同源蛋白質(zhì)：指在不同生物體中實(shí)現(xiàn)同一功能或類似功同源蛋白質(zhì)：指在不同

7、生物體中實(shí)現(xiàn)同一功能或類似功能的蛋白質(zhì)。同源蛋白中的一級(jí)構(gòu)造中有許多位置的氨基酸能的蛋白質(zhì)。同源蛋白中的一級(jí)構(gòu)造中有許多位置的氨基酸對(duì)一切種屬來說都是一樣的，稱為不變殘基；其他位置的氨對(duì)一切種屬來說都是一樣的，稱為不變殘基；其他位置的氨基酸稱可變殘基基酸稱可變殘基.不同種屬的可變殘基有很大變化不同種屬的可變殘基有很大變化.可用于判別可用于判別生物體間親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近生物體間親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近.例：細(xì)胞色素例：細(xì)胞色素C位于線粒體中位于線粒體中60 個(gè)物種中，有個(gè)物種中，有 27 個(gè)位置上的氨基酸殘基完全不變，是維個(gè)位置上的氨基酸殘基完全不變，是維持其構(gòu)象中發(fā)揚(yáng)特有功能所必要的部位，屬于不變殘基持其構(gòu)

8、象中發(fā)揚(yáng)特有功能所必要的部位，屬于不變殘基.可變殘基能夠隨著進(jìn)化而變異，而且不同種屬的細(xì)胞色素可變殘基能夠隨著進(jìn)化而變異，而且不同種屬的細(xì)胞色素 C氨基酸差別數(shù)與種屬之間的親緣關(guān)系相關(guān)。親緣關(guān)系越近，氨基酸差別數(shù)與種屬之間的親緣關(guān)系相關(guān)。親緣關(guān)系越近，氨基酸差別少，反之那么反進(jìn)化樹氨基酸差別少，反之那么反進(jìn)化樹.黃色： 不變殘基invariable residues藍(lán)色 ： 保守氨基酸conservative residues未標(biāo)志：可變殘基variable residues二二.蛋白質(zhì)的構(gòu)象與功能的關(guān)系蛋白質(zhì)的構(gòu)象與功能的關(guān)系 別構(gòu)效應(yīng)別構(gòu)效應(yīng)allosteric effect：又稱變構(gòu)效應(yīng)

9、，是指寡聚：又稱變構(gòu)效應(yīng)，是指寡聚蛋白與配基結(jié)合，改動(dòng)蛋白質(zhì)構(gòu)象，導(dǎo)致蛋白質(zhì)生物活性改動(dòng)的蛋白與配基結(jié)合，改動(dòng)蛋白質(zhì)構(gòu)象，導(dǎo)致蛋白質(zhì)生物活性改動(dòng)的景象。景象?？煞譃橥傩?yīng)正協(xié)同性、負(fù)協(xié)同性和異促效應(yīng)。它是細(xì)胞可分為同促效應(yīng)正協(xié)同性、負(fù)協(xié)同性和異促效應(yīng)。它是細(xì)胞內(nèi)最簡單的調(diào)理方式。內(nèi)最簡單的調(diào)理方式。例：血紅蛋白的別構(gòu)效應(yīng)例：血紅蛋白的別構(gòu)效應(yīng)一個(gè)亞基與氧結(jié)合后，引起該亞基構(gòu)象改動(dòng)一個(gè)亞基與氧結(jié)合后，引起該亞基構(gòu)象改動(dòng)進(jìn)而引起另三個(gè)亞基的構(gòu)象改動(dòng)進(jìn)而引起另三個(gè)亞基的構(gòu)象改動(dòng)整個(gè)分子構(gòu)象改動(dòng)整個(gè)分子構(gòu)象改動(dòng)與氧的結(jié)合才干添加與氧的結(jié)合才干添加第五節(jié)第五節(jié) 蛋白質(zhì)的分別、純化和表征蛋白質(zhì)的分別、純

10、化和表征一一.蛋白質(zhì)的分子大小蛋白質(zhì)的分子大小蛋白質(zhì)是分子量很大的生物分子，相對(duì)分子質(zhì)量大于蛋白質(zhì)是分子量很大的生物分子，相對(duì)分子質(zhì)量大于6 000。最高可。最高可達(dá)達(dá)40 000 000煙草花葉病毒。煙草花葉病毒。 蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的測(cè)定方法蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的測(cè)定方法1.根據(jù)化學(xué)組成測(cè)定最低相對(duì)分子質(zhì)量根據(jù)化學(xué)組成測(cè)定最低相對(duì)分子質(zhì)量 此法首先利用化學(xué)分析方法測(cè)定蛋白質(zhì)分子中某一特殊成分的百分含量此法首先利用化學(xué)分析方法測(cè)定蛋白質(zhì)分子中某一特殊成分的百分含量然后，假定蛋白質(zhì)分子中該成分只需一個(gè)分子或原子，據(jù)其百分含量可然后，假定蛋白質(zhì)分子中該成分只需一個(gè)分子或原子，據(jù)其百分含量可計(jì)算出最

11、低相對(duì)分子質(zhì)量：計(jì)算出最低相對(duì)分子質(zhì)量：最低相對(duì)分子質(zhì)量知成分的相對(duì)分子、原子質(zhì)量最低相對(duì)分子質(zhì)量知成分的相對(duì)分子、原子質(zhì)量/知成分的百分含知成分的百分含量量假設(shè)蛋白質(zhì)分子中所含知成分不是一個(gè)單位，那么真實(shí)相對(duì)分子質(zhì)量等假設(shè)蛋白質(zhì)分子中所含知成分不是一個(gè)單位，那么真實(shí)相對(duì)分子質(zhì)量等于最小相對(duì)分子質(zhì)量的倍數(shù)。于最小相對(duì)分子質(zhì)量的倍數(shù)。2.沉降速度法超離心法沉降速度法超離心法在在60 00080 000r/min的超速離心力作用下，蛋白質(zhì)分子會(huì)沿旋轉(zhuǎn)中的超速離心力作用下，蛋白質(zhì)分子會(huì)沿旋轉(zhuǎn)中心向外周方向挪動(dòng)心向外周方向挪動(dòng)用光學(xué)方法依折射率變化測(cè)定界面挪動(dòng)的速度即為蛋白質(zhì)的離心沉用光學(xué)方法依折射率

12、變化測(cè)定界面挪動(dòng)的速度即為蛋白質(zhì)的離心沉降速度降速度蛋白質(zhì)的沉降速度與分子大小和外形有關(guān)蛋白質(zhì)的沉降速度與分子大小和外形有關(guān)沉降系數(shù)是溶質(zhì)顆粒在單位離心場(chǎng)中的沉降速度，用s表示。一個(gè)s單位，為110-13秒,用S表示相對(duì)分子質(zhì)量越大，s值越大蛋白質(zhì)的沉降系數(shù)：1200S 由沉降系數(shù)s可根據(jù)斯維得貝格Svedberg方程(P296)計(jì)算蛋白質(zhì)分子的相對(duì)分子質(zhì)量。3.凝膠過濾法(原理見P303)凝膠過濾所用介質(zhì)為凝膠珠，其內(nèi)部為多孔網(wǎng)狀構(gòu)造。如交聯(lián)葡聚糖，商品名：Sephadex一定型號(hào)的凝膠網(wǎng)孔大小一定，只允許相應(yīng)大小的分子進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，大分子那么被排阻在外洗脫時(shí)大分子隨洗脫液從顆粒間隙流下

13、來，洗脫液體積小；小分子在顆粒網(wǎng)狀構(gòu)造中穿來穿去，歷程長，后洗脫下來，洗脫體積大只能測(cè)定球形pro，不能測(cè)定線形的或與凝膠能發(fā)生吸附作用的pro測(cè)得幾種規(guī)范分子量蛋白質(zhì)的洗脫體積Ve以相對(duì)分子質(zhì)量對(duì)數(shù)logMr對(duì)Ve作圖，得出規(guī)范直線再測(cè)出未知樣品洗脫體積Ve從規(guī)范曲線上可查出樣品蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量4.SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法SDS:十二烷基硫酸鈉，變性劑普通蛋白質(zhì)電泳的泳動(dòng)速率取決于荷質(zhì)比凈電荷、外形、大小用SDS和巰基乙醇翻開二硫鍵處置蛋白量變性肽鏈伸展并與SDS結(jié)合，構(gòu)成SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物不同蛋白質(zhì)分子的均帶負(fù)電SDS帶負(fù)電；且荷質(zhì)比一樣每2分子AA殘基結(jié)合1分子SDS不同蛋白質(zhì)

14、分子具有類似的構(gòu)象雪茄煙狀用幾種規(guī)范蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)值對(duì)它們的相對(duì)遷移率樣品遷移間隔/前沿染料遷移間隔,R 作圖(lgMr=a-bR)測(cè)出待測(cè)樣品的遷移率從規(guī)范曲線上查出樣品的相對(duì)分子質(zhì)量 影響遷移率的主要要素影響遷移率的主要要素凝膠的分子篩效應(yīng)對(duì)長短不同的棒形分子會(huì)凝膠的分子篩效應(yīng)對(duì)長短不同的棒形分子會(huì) 產(chǎn)產(chǎn) 生不同的阻力主生不同的阻力主要要素要要素凝膠的濃度和交聯(lián)度凝膠的濃度和交聯(lián)度同一電泳條件下，分子小，受阻小，游動(dòng)快，遷移率大。相對(duì)分子同一電泳條件下，分子小，受阻小，游動(dòng)快，遷移率大。相對(duì)分子質(zhì)量大者，遷移率小質(zhì)量大者，遷移率小 優(yōu)點(diǎn)：快速，樣品用量少，可同時(shí)測(cè)幾個(gè)樣品優(yōu)點(diǎn)：快

15、速，樣品用量少，可同時(shí)測(cè)幾個(gè)樣品 缺陷：誤差大，約為缺陷：誤差大，約為10誤差主要來源于遷移間隔的丈量誤差主要來源于遷移間隔的丈量誤差誤差 此方法只能測(cè)得此方法只能測(cè)得 亞基肽鏈的相對(duì)分子質(zhì)量亞基肽鏈的相對(duì)分子質(zhì)量二二. 蛋白質(zhì)的兩性離解和電泳景象蛋白質(zhì)的兩性離解和電泳景象蛋白質(zhì)與多肽一樣，可以發(fā)生兩性離解，也有等電點(diǎn)。在等電點(diǎn)時(shí)蛋白質(zhì)與多肽一樣，可以發(fā)生兩性離解，也有等電點(diǎn)。在等電點(diǎn)時(shí)(Isoelectric point， pI)，蛋白質(zhì)的溶解度最小可用于，蛋白質(zhì)的溶解度最小可用于pro的純的純化，在電場(chǎng)中不挪動(dòng)?；?，在電場(chǎng)中不挪動(dòng)。在不同的在不同的pH環(huán)境下，蛋白質(zhì)的電學(xué)性質(zhì)不同。在等電點(diǎn)

16、偏酸性溶環(huán)境下，蛋白質(zhì)的電學(xué)性質(zhì)不同。在等電點(diǎn)偏酸性溶液中，蛋白質(zhì)粒子帶正電荷，在電場(chǎng)中向負(fù)極挪動(dòng)；在等電點(diǎn)偏堿液中，蛋白質(zhì)粒子帶正電荷，在電場(chǎng)中向負(fù)極挪動(dòng)；在等電點(diǎn)偏堿性溶液中，蛋白質(zhì)粒子帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正極挪動(dòng)。這種景象性溶液中，蛋白質(zhì)粒子帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正極挪動(dòng)。這種景象稱為蛋白質(zhì)電泳稱為蛋白質(zhì)電泳(ProteinElectrophoresis)。蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)pH條件下，不發(fā)生電泳景象。利用蛋白質(zhì)的電泳景象，可以將蛋白質(zhì)進(jìn)展分別純化。三三.蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)由于蛋白質(zhì)的分子量很大，它在水中可以構(gòu)成膠體溶液。蛋白質(zhì)由于蛋白質(zhì)的分子量很大，它在水中可以構(gòu)成膠體溶液。蛋

17、白質(zhì)溶液具有膠體溶液的典型性質(zhì)，如丁達(dá)爾景象、布郎運(yùn)動(dòng)等。溶液具有膠體溶液的典型性質(zhì)，如丁達(dá)爾景象、布郎運(yùn)動(dòng)等。由于膠體溶液中的蛋白質(zhì)不能經(jīng)過半透膜，因此可以運(yùn)用透析法由于膠體溶液中的蛋白質(zhì)不能經(jīng)過半透膜，因此可以運(yùn)用透析法將非蛋白的小分子雜質(zhì)除去。將非蛋白的小分子雜質(zhì)除去。四四.蛋白質(zhì)的沉淀作用蛋白質(zhì)的沉淀作用蛋白質(zhì)膠體溶液的穩(wěn)定性與它的分子量大小、所帶的電荷和水化蛋白質(zhì)膠體溶液的穩(wěn)定性與它的分子量大小、所帶的電荷和水化作用有關(guān)。作用有關(guān)。改動(dòng)溶液的條件，將影響蛋白質(zhì)的溶解性質(zhì)。改動(dòng)溶液的條件，將影響蛋白質(zhì)的溶解性質(zhì)。在適當(dāng)?shù)臈l件下，蛋白質(zhì)可以從溶液中沉淀出來。在適當(dāng)?shù)臈l件下，蛋白質(zhì)可以從溶

18、液中沉淀出來。 1.可逆沉淀可逆沉淀(1)在溫暖條件下，經(jīng)過改動(dòng)溶液的在溫暖條件下，經(jīng)過改動(dòng)溶液的pH或電荷情況，使蛋白質(zhì)從膠體溶液中沉淀或電荷情況，使蛋白質(zhì)從膠體溶液中沉淀分別。分別。(2) 在沉淀過程中，構(gòu)造和性質(zhì)都沒有發(fā)生變化，在適當(dāng)?shù)臈l件下，可以重新溶在沉淀過程中，構(gòu)造和性質(zhì)都沒有發(fā)生變化，在適當(dāng)?shù)臈l件下，可以重新溶解構(gòu)成溶液，所以這種沉淀又稱為非變性沉淀。解構(gòu)成溶液，所以這種沉淀又稱為非變性沉淀。(3)可逆沉淀是分別和純化蛋白質(zhì)的根本方法，如等電點(diǎn)沉淀法、鹽析法和有機(jī)可逆沉淀是分別和純化蛋白質(zhì)的根本方法，如等電點(diǎn)沉淀法、鹽析法和有機(jī)溶劑沉淀法短時(shí)間等。溶劑沉淀法短時(shí)間等。鹽溶鹽溶sa

19、lting in：指中性鹽添加蛋白質(zhì)溶解度的景象。：指中性鹽添加蛋白質(zhì)溶解度的景象。鹽析：指向蛋白質(zhì)溶液中參與大量的中性鹽，使蛋白質(zhì)脫去水化層而聚集的鹽析：指向蛋白質(zhì)溶液中參與大量的中性鹽，使蛋白質(zhì)脫去水化層而聚集的可逆性沉淀的景象?？赡嫘猿恋淼木跋?。2.不可逆沉淀不可逆沉淀(1)在劇烈沉淀?xiàng)l件下，不僅破壞了蛋白質(zhì)膠體溶液的穩(wěn)定性，而且也破壞了蛋在劇烈沉淀?xiàng)l件下，不僅破壞了蛋白質(zhì)膠體溶液的穩(wěn)定性，而且也破壞了蛋白質(zhì)的構(gòu)造和性質(zhì)，產(chǎn)生的蛋白質(zhì)沉淀不能夠再重新溶解于水。白質(zhì)的構(gòu)造和性質(zhì)，產(chǎn)生的蛋白質(zhì)沉淀不能夠再重新溶解于水。(2)由于沉淀過程發(fā)生了蛋白質(zhì)的構(gòu)造和性質(zhì)的變化，所以又稱為變性沉淀。由于

20、沉淀過程發(fā)生了蛋白質(zhì)的構(gòu)造和性質(zhì)的變化，所以又稱為變性沉淀。(3)如加熱沉淀制豆腐、強(qiáng)酸堿沉淀、重金屬鹽沉淀豆?jié){解毒和生物堿如加熱沉淀制豆腐、強(qiáng)酸堿沉淀、重金屬鹽沉淀豆?jié){解毒和生物堿沉淀等都屬于不可逆沉淀。沉淀等都屬于不可逆沉淀。五五.蛋白質(zhì)的變性蛋白質(zhì)的變性 蛋白質(zhì)的性質(zhì)與它們的構(gòu)造親密相關(guān)。某些物理或化學(xué)要素，可以破壞蛋白蛋白質(zhì)的性質(zhì)與它們的構(gòu)造親密相關(guān)。某些物理或化學(xué)要素，可以破壞蛋白質(zhì)的構(gòu)造形狀，引起蛋白質(zhì)理化性質(zhì)改動(dòng)并導(dǎo)致其生理活性喪失。這種景象稱為質(zhì)的構(gòu)造形狀，引起蛋白質(zhì)理化性質(zhì)改動(dòng)并導(dǎo)致其生理活性喪失。這種景象稱為蛋白質(zhì)的變性蛋白質(zhì)的變性. 變性蛋白質(zhì)通常都是固體形狀物質(zhì)，不溶于

21、水和其它溶劑，也不能夠恢復(fù)原有蛋白質(zhì)所具有的性質(zhì)。所以，蛋白質(zhì)的變性通常都伴隨著不可逆沉淀。引起變性的主要要素是熱、紫外光、猛烈的攪拌以及強(qiáng)酸和強(qiáng)堿等。肽鍵的反響，肽鍵越多顏色越深肽鍵的反響，肽鍵越多顏色越深受蛋白質(zhì)特異性影響小受蛋白質(zhì)特異性影響小蛋白質(zhì)定量測(cè)定；測(cè)定蛋白質(zhì)水解程度蛋白質(zhì)定量測(cè)定；測(cè)定蛋白質(zhì)水解程度 2.米倫氏反響米倫氏反響酪氨酸的顯色反響酚羥基反響酪氨酸的顯色反響酚羥基反響米倫試劑為硝酸、亞硝酸、硝酸汞、亞硝酸汞的混合物米倫試劑為硝酸、亞硝酸、硝酸汞、亞硝酸汞的混合物蛋白溶液中，參與米倫試劑，產(chǎn)生白色沉淀，加熱后變成紅色蛋白溶液中，參與米倫試劑，產(chǎn)生白色沉淀，加熱后變成紅色3

22、.乙醛酸反響乙醛酸反響在蛋白質(zhì)溶液中參與在蛋白質(zhì)溶液中參與HCOCOOH，將濃硫酸沿管壁緩慢參與，不使，將濃硫酸沿管壁緩慢參與，不使相混，在液面交界處，即有紫色環(huán)構(gòu)成相混，在液面交界處，即有紫色環(huán)構(gòu)成色氨酸的反響吲哚環(huán)的反響色氨酸的反響吲哚環(huán)的反響鑒定蛋白質(zhì)中能否含有色氨酸鑒定蛋白質(zhì)中能否含有色氨酸明膠中不含色氨酸明膠中不含色氨酸4.坂口反響坂口反響精氨酸的反響胍基的反響精氨酸的反響胍基的反響精氨酸與精氨酸與-萘酚在堿性次氯酸鈉或次溴酸鈉溶液中發(fā)生反響，萘酚在堿性次氯酸鈉或次溴酸鈉溶液中發(fā)生反響，產(chǎn)生紅色產(chǎn)物產(chǎn)生紅色產(chǎn)物鑒定蛋白質(zhì)中能否含有精氨酸鑒定蛋白質(zhì)中能否含有精氨酸定量測(cè)定精氨酸定量測(cè)定精氨酸5.茚三酮反響茚三酮反響靈敏度不高靈敏度不高6.黃蛋白反響黃蛋白反響濃硝酸與酪氨酸、色氨酸的反響濃硝酸與