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文檔簡介
1、實(shí)驗(yàn)室菌種管理規(guī)程目的:保證菌種合理、有效地使用和保存,最大限度降低變異率,確保菌 種的溯源性與穩(wěn)定性,保證實(shí)驗(yàn)室和社會(huì)的生物安全。職責(zé):主管負(fù)責(zé)菌種的出入庫保管、保存、分發(fā),組員負(fù)責(zé)菌種的確認(rèn)、 傳代、使用及銷毀。范圍:本規(guī)程適用于實(shí)驗(yàn)室菌種的管理,包括菌種的保存、傳代、使用及 銷毀等。1 菌種的保存工作用菌種的保存工作用菌種采用平板低溫保存法。將菌種接種在適宜的固體培養(yǎng)基上,待菌生長充分以后,轉(zhuǎn)移至 2 8C冰箱中保存。此法僅用于工作用菌種的 短期保存,并應(yīng)隨時(shí)檢查其污染雜菌和變異等情況,發(fā)現(xiàn)異常情況,經(jīng)應(yīng) 滅活處理后銷毀。保存時(shí)間為 1 周,超過該期限前挑取單菌落重新于瓊脂 平板劃線活化
2、,若菌落活力下降則從-80 C冰箱中取用甘油冷凍管。傳代用菌種的保存采用甘油冷凍管保藏法。甘油冷凍管保存法用無菌接種環(huán)輕輕刮平板上的單菌落并接種至適宜的液體培養(yǎng)內(nèi),置 于適宜的培養(yǎng)條件下培養(yǎng),菌液充分振蕩后取適宜體積加入到已滅菌的冷 凍管內(nèi),再加入等體積的無菌甘油(濃度 40%),即為 20%甘油菌懸液,輕 輕振搖,使內(nèi)容物充分混合,在-80 C冷凍條件下保存,保存期限為 3年。 每個(gè)菌株保存至少 30 個(gè)無菌冷凍管。使用時(shí),取出一支放至室溫,接種增 菌培養(yǎng)或接種至瓊脂平板復(fù)蘇,挑取純菌落傳代或工作用。2 菌種的傳代工作用菌種的傳代當(dāng)工作用菌種代數(shù)小于 5 時(shí),在規(guī)定保存期限內(nèi),可直接用上一代
3、工 作用菌種轉(zhuǎn)接下一代工作用菌種。取在冰箱 28 C保存的工作用菌種用普 通瓊脂平板傳代,并將新傳代的培養(yǎng)物替代原有的菌種,作為工作用菌種。 也可取用“甘油冷凍管保藏法”保存的菌種,進(jìn)行復(fù)蘇,直接作為工作用 菌種。菌種每 1 周傳代一次,當(dāng)超過 5 代,須用“甘油冷凍管保藏法”保 存的原始菌種傳代。傳代用菌種的傳代首先劃線接種確認(rèn),根據(jù)日常檢驗(yàn)工作的需要量,挑取純菌落轉(zhuǎn)接平 板,作為工作用菌種;同時(shí),結(jié)合菌種的代數(shù)和最長保存期限,挑取純菌 落制成菌懸液,按“”的方法制備甘油冷凍管數(shù)支,作為傳代用菌種。傳代時(shí)注意事項(xiàng)無菌操作,使菌株不死亡,不污染、不丟失。同時(shí)實(shí)驗(yàn)人員也要采取 有效的預(yù)防措施進(jìn)行
4、自我保護(hù),如工作時(shí)必須穿工作服,佩帶無菌手套, 實(shí)驗(yàn)完成以后消毒實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的區(qū)域、實(shí)驗(yàn)儀器和器具。如發(fā)生意外,如菌 種泄漏或人員受傷,應(yīng)立即向主管報(bào)告以便及時(shí)進(jìn)行處理。3 菌種的保管實(shí)驗(yàn)室全部菌種都應(yīng)由菌種負(fù)責(zé)人記錄在冊,并輸入電腦以電子版形式存 檔,以便查找。菌種上應(yīng)貼上明顯的標(biāo)簽,標(biāo)明名稱、培養(yǎng)基、保種人、 日期、編號等。菌種設(shè)專人加鎖保管,并對所保存的菌種建立菌種保存、 領(lǐng)用登記臺賬(附表 3)。菌種的定期檢查 在菌種的保存期間,應(yīng)每天檢查保存菌種冰箱的溫度、菌種管的塞子 是否松動(dòng)或生霉,如有異常應(yīng)及時(shí)處理。所保管的菌種,不能隨意轉(zhuǎn)讓其他單位和個(gè)人,需要時(shí)應(yīng)有單位證明和批 準(zhǔn)手續(xù)以及李愛科
5、組長簽字方可供應(yīng)。4 菌種的領(lǐng)用與使用 實(shí)驗(yàn)室人員根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,需到主管領(lǐng)取工作用菌種或傳代用菌種,同時(shí) 填寫菌種領(lǐng)用登記臺賬相關(guān)內(nèi)容。實(shí)驗(yàn)室人員從主管領(lǐng)取工作用菌種或傳代用菌種,用于日常檢驗(yàn)或驗(yàn)證試 驗(yàn),使用后及時(shí)填寫菌種使用登記臺賬 (附表 6),以便追蹤菌種使用歷 史。5 菌種(廢棄)的銷毀下列情況的菌種或培養(yǎng)物或被污染的器具等,必須采用121 C、45分鐘濕熱滅活處理:新一代菌種制備成功后的上一代菌種;使用完后的菌種 和帶有標(biāo)準(zhǔn)菌種的器具和培養(yǎng)物;超過有效期的菌種;凡被污染、變異、 可疑等異常情況菌種;其他應(yīng)廢棄的菌種。6 附則附表 1 :檢定菌接收記錄附表 2:檢定菌種傳代、分離記錄
6、附表3:檢定菌種保存、領(lǐng)用登記臺賬附表4:檢定菌種觀察記錄附表5:檢定菌種鑒定記錄附表6:檢定菌種使用登記臺賬附表7:廢棄菌種(物品)銷毀處理記錄菌種資源詳細(xì)信息(密)此項(xiàng)信息不對外公布,保存核心成員手中。,隨時(shí)補(bǔ)充,菌種登記:編號+詳細(xì)名稱+來源+特性+動(dòng)物實(shí)驗(yàn)+留照片附表1:菌種接收記錄記錄名稱菌種接收記錄代碼頁次1共頁名稱及編號數(shù)量代數(shù)來源接收日期接收人檢查情況保存條件附表2:菌種傳代、分離、保存記錄記錄名稱菌種傳代、分離記錄代碼頁次1共1頁名稱及編號購進(jìn)(領(lǐng)取)日期年 月曰來源傳代前菌種保存方法傳代用培養(yǎng)基傳代日期傳代用 菌種編號總數(shù)量傳代用菌種工作用菌種操作人數(shù)量編號有效期保存 方法數(shù)量編號有效期保存 方法分離與純 化過程純度 檢查結(jié)果操作人:復(fù)核人:附表3:菌種使用登記臺賬記錄名稱菌種保存、領(lǐng)用登記臺賬代碼頁次1共1頁收到日期名稱及編號數(shù)量接收人移交人領(lǐng)用日期用途數(shù)量發(fā)放人領(lǐng)用人附表4:菌種觀察記錄記錄名稱菌種觀察記錄代碼頁次1共1頁日期冰箱溫 度C)塞子是否松動(dòng)是否霉變處理措施觀察人附表5:菌種鑒定記錄記錄名稱菌種鑒疋記錄代碼頁次1共1頁菌種名稱及編號鑒定原因開始鑒定日期鑒定人復(fù)核人年 月曰鑒定項(xiàng)目菌落形態(tài)革蘭染色顯微鏡下形態(tài)典型生化反應(yīng)特征鑒定結(jié)論日期:年 月曰附表6:菌種使用登記臺賬記錄名稱菌種使用登記臺賬代碼頁次1共1頁領(lǐng)用日期名稱
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