沙門氏菌檢測

1、沙門氏菌檢測1 設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：1.1 冰箱： 2°C ? 5°C。1.2 恒溫培養(yǎng)箱： 36C±C, 42C±C。1.3 均質(zhì)器。1.4 振蕩器。1.5 電子天平：感量 0.1g 。1.6 無菌錐形瓶 :容量 500ml , 250ml 。頭。1.7 無菌吸管： 1ml 具 0.01ml 刻度、 10ml 具 0.1ml 刻度或微量移液器及吸1.8 無菌培養(yǎng)皿：直徑 90mm 。1.9 無菌試管： 3mm< 50mm 、 10mm< 75mm 。1.10 無菌毛細(xì)管。1.11 pH 計(jì)或 p

2、H 比色管或精密 pH 試紙。1.12 全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)。2 培養(yǎng)基和試劑2.1 緩沖蛋白胨水 BPW: 見附錄中 1。2.2 四硫磺酸鈉煌綠 TTB 增菌液：見附錄中 2。2.3 亞硒酸鹽胱氨酸 SC 增菌液：見附錄中 3。2.4 亞硫酸鉍 BS 瓊脂：見附錄中 4。2.5 HE 瓊脂：見附錄中 5。2.6 木糖賴氨酸脫氧膽鹽 XLD 瓊脂：見附錄中 6。2.7 沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基。2.8 三糖鐵 TSI 瓊脂：見附錄中 7。2.9 蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑：見附錄中 &2.10 尿素瓊脂 pH7.2 : 見附錄中 9。2.11 氰化鉀 KCN 培養(yǎng)基：見附錄中 10 。2.1

3、2 賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培 養(yǎng)基 : 見附錄中 11。2.13 糖發(fā)酵管：見附錄中 12 。2.14 鄰硝基酚 0D 半乳糖苷 ONPG 培養(yǎng)基：見附錄中 13。2.15 半固體瓊脂：見附錄中 14。2.16 丙二酸鈉培養(yǎng)基：見附錄中 15。2.17 沙門氏菌 O 和 H 診斷血清。2.18 生化鑒定試劑盒。3 操作方法3.1 試驗(yàn)前準(zhǔn)備3.1.1 將供試品及所有已滅菌的平皿、錐形瓶、勻漿杯、試管、量筒、吸管1ml、 10ml、稀釋劑等移至操作室內(nèi)。準(zhǔn)備好足夠用量，防止操作中出入操作間。3.1.2 開啟無菌室紫外殺菌燈和潔凈工作臺(tái)的空氣過濾裝置30mi n 。3.1.3 操作人員用肥皂洗手，關(guān)閉紫

4、外殺菌燈，進(jìn)入緩沖間，換工作鞋，用消毒液洗手或用乙醇棉球擦手，穿戴好無菌衣、帽、口罩、手套等。3.1.4 操作前先用乙醇棉球擦手、工作臺(tái)面，再用乙醇棉球擦拭供試品瓶、盒、袋等的開口 處周圍，待干后用滅菌剪刀或鑷子將供試品啟封。3.2 前增菌稱取25g ml樣品放入盛有225ml BPW 的無菌均質(zhì)杯中，以 8000r/min?10000r/min均質(zhì)1min?2min，或置于盛有225ml BPW的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式 均質(zhì)器拍打1min? 2min。假設(shè)樣品為液態(tài)，不需要均質(zhì)，振蕩混勻。如需測定pH值，用1mol/ml無菌 NaOH 或 HCl 調(diào) pH 至 6.8 ±.2。無菌

5、操作將樣品轉(zhuǎn)至 500ml 錐形 瓶中，如使用均質(zhì) 袋，可直接進(jìn)行培養(yǎng)，于 36°C±°C培養(yǎng)8 h? 18h。如為冷凍產(chǎn) 品，應(yīng)在45C以下不超過 15min,或2C? 5C不超過18h解凍。3.3 增菌輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)過的樣品混合物，移取 1ml，轉(zhuǎn)種于10ml TTB內(nèi)，于42C±C培養(yǎng)18 h? 24h。同時(shí)，另取1ml，轉(zhuǎn)種于10ml SC內(nèi)，于36C ± C培養(yǎng)18h? 24h。3.4別離分別用接種環(huán)取增菌液 1 環(huán)，劃線接種于一個(gè) BS 瓊脂平板和一個(gè) XLD 瓊脂平 板或HE瓊脂平板或沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板。于36C ±

6、 C分別培養(yǎng)18h? 24h XLD40h ? 48h瓊脂平板、 HE 瓊脂平板、沙門氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板或BS瓊脂平板，觀察各個(gè)平板上生長的菌落。各個(gè)平板上的菌落特征見表1表1沙門氏菌屬在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征選擇性瓊脂平板沙門氏菌BS瓊脂菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變。HE瓊脂藍(lán)綠色或藍(lán)色，多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色；有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色。XLD瓊脂菌落呈粉紅色，帶或不帶黑色中心，有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，或呈現(xiàn)全部黑色的困洛；有些困株為黃色困洛，帶或不帶黑色中心。沙門氏困屬顯色

7、培養(yǎng)基按照顯色培養(yǎng)基的說明進(jìn)仃判疋。3.5生化試驗(yàn)自選擇性瓊脂平板上分別挑取 2個(gè)以上典型或可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂，先在斜面劃線，再于底層穿刺；接種針不要滅菌，直接接種賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培 養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂平板， 于36C±C培養(yǎng)18h?24h，必要時(shí)可延長至48h。在三糖 鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng) 基內(nèi)，沙門氏菌屬的反響結(jié)果見表2。表2沙門氏困屬在三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基內(nèi)的反響結(jié)果三糖鐵瓊脂賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基初步判斷斜面底層產(chǎn)氣硫化氫KA+ ()+ ()可疑沙門氏菌屬KA+ ()+ ()一可疑沙門氏菌屬AA+ ()+ ()可疑沙門氏菌屬AA+ / + / 一非沙門

8、氏菌KK+ / + / + / 非沙門氏菌注：K:產(chǎn)堿，A :產(chǎn)酸，+:陽性，一：陰性；+ 多數(shù)陽性，少數(shù)陰性；+ /:陽性或陰性。接種三糖鐵瓊脂和賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基的同時(shí)，可直接接種蛋白胨水供做靛基質(zhì)試驗(yàn)、尿素瓊脂pH7.2 、氰化鉀KCN 培養(yǎng)基，也可在初 步判斷結(jié) 果后從營養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落接種。于36 ± °C培養(yǎng)18h? 24h，必要時(shí)可延長至48h,按表3判定結(jié)果。將已挑菌落的平板儲(chǔ)存于2C? 5C或室溫 至少保存24h，以備必要時(shí)復(fù)查。表3沙門氏菌屬生化反響初步鑒別表反響序號(hào)硫化氫H2S靛基質(zhì)pH7.2尿素氰化鉀KCN 賴氨酸脫羧酶A1+A2+A3+

9、 / 注：+:陽性,一：陰性，+/-:陽性或陰性。3.521反響序號(hào)A1 :典型反響判定為沙門氏菌屬。如尿素、KCN和賴氨酸脫羧 酶3項(xiàng)中有1項(xiàng)異常，按表4可判定為沙門氏菌。如有 2項(xiàng)異常為非沙門氏菌。表4沙門氏菌屬生化反響初步鑒別表pH7.2尿素氰化鉀KCN 賴氨酸脫羧酶判定結(jié)果甲型副傷寒沙門氏菌要求血清學(xué)鑒定結(jié)果沙門氏菌IV或V 要求符合本群生化特性沙門氏菌個(gè)別變體要求血清學(xué)鑒定結(jié)果注：+:陽性，一：陰性。3.522反響序號(hào)A2 :補(bǔ)做甘露醇和山梨醇試驗(yàn)，沙門氏菌靛基質(zhì)陽性變體兩項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果均為陽性，但需要結(jié)合血清學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)行判定。反響序號(hào)A3 :補(bǔ)做ONPG。ONPG陰性為沙門氏菌，同時(shí)

10、賴氨酸脫羧酶陽性。甲型副傷寒沙門氏菌為賴氨酸脫羧酶陰性。必要時(shí)按表5進(jìn)行沙門氏菌生化群的鑒別。表5沙門氏菌屬各生化群的鑒別工程IIIIIIIVVVI衛(wèi)矛醇+山梨醇水楊苷ONPG丙二酸鹽KCN注：+:陽性，一：陰性。如選擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)，可根據(jù)的初步判斷結(jié)果，從營養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落，用生理鹽水制備成濁度適當(dāng)?shù)木鷳乙海褂蒙b定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。3.6血清學(xué)鑒定抗原的準(zhǔn)備一般采用1.2%? 1.5%瓊脂培養(yǎng)物作為玻片凝集試驗(yàn)用的抗原。0血清不凝集時(shí)，將菌株接種在瓊脂量較高的如2%? 3%培養(yǎng)基上再檢查；如果是由于Vi抗原的存在而阻止了 0凝

11、集反響時(shí)，可挑取菌苔于1ml生理鹽水中做成濃菌 液，于酒精燈火焰上煮沸后再檢查。H抗原發(fā)育不良時(shí)，將菌株接種在0.55%? 0.65%半固體瓊脂平板的中央，俟菌落蔓延生長時(shí)，在其邊緣局部取菌檢查；或 將菌株通過裝有 0.3%? 0.4%半固體瓊脂的小玻管 1 次 ? 2 次，自遠(yuǎn)端取菌培養(yǎng)后 再檢查。362多價(jià)菌體抗原0鑒定在玻片上劃出 2 個(gè)約 1cm K 2cm 的區(qū)域，挑取 1 環(huán)待測菌，各放 1/2 環(huán)于玻片上 的每 一區(qū)域上部，在其中一個(gè)區(qū)域下部加1 滴多價(jià)菌體 0抗血清，在另一區(qū)域下部參加 1 滴生理鹽水，作為對(duì)照。再用無菌的接種環(huán)或針分別將兩個(gè)區(qū)域內(nèi) 的菌落研 成乳狀液。將玻片傾

12、斜搖動(dòng)混合 1 min ，并對(duì)著黑暗背景進(jìn)行觀察，任何程度的凝集現(xiàn)象皆為陽性反響。多價(jià)鞭毛抗原H鑒定同362。3.7 結(jié)果與報(bào)告綜合以上生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定的結(jié)果，報(bào)告25g ml 樣品中檢出或未檢出沙門氏菌。附錄培養(yǎng)基和試劑1緩沖蛋白胨水BPW 1.1成分蛋白胨10.0g氯化鈉5.0g磷酸氫二鈉含12個(gè)結(jié)晶水 磷酸二9.0g氫鉀1.5g蒸餾水1000mlpH7.2 士 0.21.2制法將各成分參加蒸餾水中，攪混均勻，靜置約10 min,煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH,高壓滅菌121C, 15min。2四硫磺酸鈉煌綠TTB 增菌液2.1根底液蛋白胨10.0g牛肉膏5.0g氯化鈉3.0g碳酸鈣45.0g蒸餾

13、水1000mlpH7.0 士 0.2除碳酸鈣外，將各成分參加蒸餾水中，煮沸溶解，再參加碳酸鈣，調(diào)節(jié)pH,高壓滅菌 121C，20 min。2.2硫代硫酸鈉溶液硫代硫酸鈉含 5個(gè)結(jié)晶水50.0g蒸餾水加至100ml咼壓火菌121 C，20 min。2.3碘溶液碘片20.0g碘化鉀25.0 g將碘化鉀充分溶解于少量的蒸餾水中，再投入碘片， 振搖玻瓶至碘片全部溶解為 止，后加蒸餾水至規(guī)定的總量，貯存于棕色瓶內(nèi)，塞緊瓶蓋備用。2.4 0.5 %煌綠水溶液煌綠0.5g蒸餾水100ml溶解后，存放暗處，不少于Id,使其自然滅菌。2.5牛膽鹽溶液牛膽鹽10.0g蒸餾水100ml加熱煮沸至完全溶解，高壓滅菌1

14、21C, 20mi n2.6制法根底液900ml硫代硫酸鈉溶液100ml碘溶液20.0ml煌綠水溶液2.0ml牛膽鹽溶液50.0ml臨用前，按上列順序，以無菌操作依次參加根底液中，每參加一種成分，均應(yīng)搖勻后再加入另一種成分。3亞硒酸鹽胱氨酸SC增菌液3.1成分蛋白胨5.0g乳糖4.0g磷酸氫二鈉10.0g亞硒酸氫鈉4.0gL-胱氨酸0.01g蒸餾水1000mlpH7.0± 0.2除亞硒酸氫鈉和L-胱氨酸外，將各成分參加蒸餾水中，煮沸溶解，冷至55C以下，以無菌操作參加亞硒酸氫鈉和1g/L L-胱氨酸溶液10ml 稱取0.1g L-胱氨酸,加1mol/L氫氧化鈉溶液15ml，使溶解，再

15、加無菌蒸餾水至100ml即成，如為DL-胱氨酸，用量應(yīng)加倍。搖勻，調(diào)節(jié)pH。4亞硫酸鉍BS瓊脂4.1成分蛋白胨10.0g牛肉膏5.0g葡萄糖5.0g硫酸亞鐵0.3g磷酸氫二鈉4.0g煌綠0.025g或5.0g/L水溶液5.0ml檸檬酸鉍銨2.0g亞硫酸鈉6.0g瓊脂18.0g? 20g蒸餾水1000mlpH4.2制法7.5 士 0.2將前三種成分參加300 ml蒸餾水制作根底液，硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉分別參加20ml和30ml蒸餾水中，檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉分別參加另一20ml和30ml蒸餾水中，瓊脂參加600ml蒸餾水中。然后分別攪拌均勻，煮沸溶解。冷至80 °C左右時(shí)，先將硫酸亞鐵和

16、磷酸氫二鈉混勻，倒入根底液中，混勻。將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉混勻，倒入根底液中，再混勻。調(diào)節(jié)pH，隨即傾入瓊脂液中,混合均勻，冷至50C? 55C。參加煌綠溶液，充分混勻后立即傾注平皿。注：本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌，在制備過程中不宜過分加熱，防止降低其選擇性，貯于室溫暗處，超過48h會(huì)降低其選擇性，本培養(yǎng)基宜于當(dāng)天制備，第二天使用v5 HE 瓊脂Hektoen Enteric Agar 蛋白胨12.0g將前面七種成分溶解于 400 ml蒸餾水內(nèi)作為根底液；將瓊脂參加于600 ml 蒸餾水內(nèi)。然后分別攪拌均勻，牛肉膏3.0g乳糖12.0g蔗糖12.0g水楊素2 .0g膽鹽20.0g氯化鈉5.0g瓊脂

17、18.0g ? 20.0g蒸餾水1 000ml0.4 %溴麝香草酚藍(lán)溶液16.0mlAndrade指示劑20.0ml甲液20.0ml乙液20.0mlpH7.5 士 0.25.2制法煮沸溶解。參加甲液和乙液于根底液內(nèi)，調(diào)節(jié)pH。注:本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌， 性。在制備過程中不宜過分加熱，防止降低其選擇甲液的配制硫代硫酸鈉34.0g檸檬酸鐵銨4.0g蒸餾水100ml乙液的配制去氧膽酸鈉10.0g蒸餾水100mlAn dradef旨示劑再參加指示劑，并與瓊脂液合并，待冷至50 C?55 C傾注平皿。蒸餾水100ml將復(fù)紅溶解于蒸餾水中,參加氫氧化鈉溶液。數(shù)小時(shí)后如復(fù)紅褪色不全，再加氫氧 化鈉溶液 1

18、ml? 2ml o6木糖賴氨酸脫氧膽鹽XLD 瓊脂6.1成分酵母膏3.0gL-賴氨酸5.0g木糖3.75g乳糖7.5g蔗糖7.5g去氧膽酸鈉2.5g檸檬酸鐵銨0.8g硫代硫酸鈉6.8g氯化鈉5.0g瓊脂15.0g酚紅0.08g蒸餾水1 000ml7.4pH士 0.26.2制法除酚紅和瓊脂外，將其他成分參加 400ml蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié) pH。另將瓊脂 參加600ml蒸餾水中，煮沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后，再參加指示劑，待冷至50C? 55 C傾注平皿。注:本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌，在制備過程中不宜過分加熱，防止降低其選擇性，貯于室溫暗處。本培養(yǎng)基宜于當(dāng)天制備，第二天使用。7三糖鐵TSI

19、瓊脂7.1成分蛋白胨牛肉膏乳糖20.0g5.0g硫酸亞鐵銨含 6 個(gè)結(jié)晶水0.2g酚紅氯化鈉0.025g 或 5.0 g/L 溶液5.0ml5.0g硫代硫酸鈉0.2g瓊脂12.0g蒸餾水1000mlpH7.4±0.27.2 制法除酚紅和瓊脂外，將其他成分參加 400ml 蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié) pH 。另 將瓊脂 參加 600ml 蒸餾水中，煮沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后，再參加指示 劑，混勻，分裝 試管，每管約2ml? 4ml，高壓滅菌121 °C 10 min或115° C 15min ,滅菌后置成高層斜面，呈桔紅色8 蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑8.1 蛋白胨水

20、5.0g1000ml蛋5m東或胰蛋白胨。氯化鈉 蒸餾水pH將上述成分參加蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH，分裝小試管,121C高壓滅菌15min。8.2 靛基質(zhì)試劑8.2.1 柯凡克試劑：將 5g 對(duì)二甲氨基甲醛溶解于 75ml 戊醇中 ， 然后緩慢參加濃鹽酸8.2.2 歐-波試劑：將1g對(duì)一甲氨基苯甲醛溶解于 95ml95%乙醇內(nèi)。然后緩慢參加濃鹽酸 20ml 。8.3 試驗(yàn)方法挑取小量培養(yǎng)物接種，在36C±C培養(yǎng)1d?2d，必要時(shí)可培養(yǎng)4d? 5d。參加柯凡克試劑約 0.5ml ，輕搖試管 ，陽性者于試劑層呈深紅色；或參加歐 -波試劑約0.5ml，沿管壁流下，覆蓋于培養(yǎng)液外表 ,陽性

21、者于液面接觸處呈玫瑰紅色。注：蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氯酸。每批蛋白胨買來后，應(yīng)先用菌種鑒定后方可使用。9尿素瓊脂pH 7.29.1成分1.0g5.0g1.0g2.0g3.0ml20.0g1000ml100ml7.2± 0.2蛋白胨氯化鈉葡萄糖磷酸二氫鉀0.4 %酚紅瓊脂蒸餾水20%尿素溶液pH9.2制法除尿素、瓊脂和酚紅外，將其他成分參加400ml蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH。另將瓊脂參加600 ml蒸餾水中，煮沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后，再參加指示劑后分裝，121C高壓滅菌15min。冷至50C? 55C,參加經(jīng)除菌過濾的 尿素溶液。尿素的最終濃 度為2%。分裝于無菌試管內(nèi)，放

22、成斜面?zhèn)溆谩?.3試驗(yàn)方法挑取瓊脂培養(yǎng)物接種,在36C±C培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。尿素酶陽性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。10氰化鉀KCN 培養(yǎng)基10.1成分蛋白胨10.0g氯化鈉5.0g磷酸二氫鉀0.225g磷酸氫二鈉5.64g蒸餾水1000ml20.0ml0.5氰化鉀10.2 制法將除氰化鉀以外的成分參加蒸餾水中，煮沸溶解，分裝后 121 C 高壓滅菌 15min 。 放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻。每 100ml 培養(yǎng)基參加 0.5%氰化鉀溶液 2.0ml 最后濃度為 1:10000 ,分裝于無菌試管內(nèi),每管約4ml,立刻用無菌橡皮塞塞緊 放在4C冰箱內(nèi)， 至少可保存兩個(gè)月。同時(shí)，將不加

23、氰化鉀的培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng)基,分裝試管備用。10.3 試驗(yàn)方法將瓊脂培養(yǎng)物接種于蛋白胨水內(nèi)成為稀釋菌液，挑取 1 環(huán)接種于氰化鉀 KCN 培養(yǎng)基。并另挑取 1 環(huán)接種于對(duì)照培養(yǎng)基。 在 36°C±°C 培養(yǎng) 1 d? 2 d, 觀察結(jié) 果。如有細(xì)菌生長即為陽性不抑制，經(jīng) 2d 細(xì)菌不生長為陰性抑制 注: 氰化鉀是劇 毒藥 ,使用時(shí)應(yīng)小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分裝培養(yǎng)基應(yīng)在 冰箱內(nèi)進(jìn)行。試驗(yàn)失敗 的主要原因是封口不嚴(yán) ,氰化鉀逐漸分解，產(chǎn)生氫氰酸氣 體逸出，以致藥物濃度降低，細(xì)11 賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培 養(yǎng)基11.1 成分5.0g3.0g1.0g1000ml蛋白胨

24、酵母浸膏葡萄糖蒸餾水1$%溴甲酚紫-乙醇溶液b-賴氨酸或DL-賴氨酸11.2制法菌生長，因而造成假陽性反響。試驗(yàn)時(shí)對(duì)每一環(huán) 節(jié)都要特別注意。除賴氨酸以外的成分加熱溶解后，分裝每瓶100ml，分別參加賴氨酸。L-賴氨 酸按 0.5%參加，DL-賴氨酸按1 %參加。調(diào)節(jié)pH。對(duì)照培養(yǎng)基不加賴氨酸。分 裝于無菌的小試 管內(nèi)，每管0.5ml，上面滴加一層液體石蠟，115C高壓滅菌10min11.3 試驗(yàn)方法從瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物接種， 于 36C±C 培養(yǎng) 18h? 24h, 觀察結(jié)果。氨基 酸脫羧 酶陽性者由于產(chǎn)堿，培養(yǎng)基應(yīng)呈紫色。 陰性者無堿性產(chǎn)物， 但因葡萄糖產(chǎn) 酸而使培養(yǎng)基變?yōu)辄S色。對(duì)照管應(yīng)為黃色。12 糖發(fā)酵管12.1 成分牛肉膏5.0g蛋白胨10.0g氯化鈉3.0g磷酸氫二鈉含12 個(gè)結(jié)晶水2.0g0.2溴麝香草酚藍(lán)溶液12.0ml蒸餾水1000mlpH7.4 ±0.212.2 制法葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后，調(diào)節(jié)pH。按0.5%參加葡萄糖，分裝于 有一個(gè)倒置小管的小試管內(nèi)， 121 °