薄層色譜操作技術(shù)

1、.實驗四薄層色譜計劃學(xué)時： 3 學(xué)時一、實驗?zāi)康模?、了解薄層色譜的基本原理和應(yīng)用。2、掌握薄層色譜的操作技術(shù)。二、實驗原理：1、原理薄層色譜 (Thin Layer Chromatography)常用 TLC 表示，又稱薄層層析，屬于固液吸附色譜。樣品在薄層板上的吸附劑（固定相）和溶劑（移動相）之間進(jìn)行分離。 由于各種化合物的吸附能力各不相同，在展開劑上移時， 它們進(jìn)行不同程度的解吸，從而達(dá)到分離的目的。2、薄層色譜的用途：1）化合物的定性檢驗。（通過與已知標(biāo)準(zhǔn)物對比的方法進(jìn)行未知物的鑒定）在條件完全一致的情況，純碎的化合物在薄層色譜中呈現(xiàn)一定的移動距離，稱比移值（ Rf 值），所以利用薄層

2、色譜法可以鑒定化合物的純度或確定兩種性質(zhì)相似的化合物是否為同一物質(zhì)。但影響比移值的因素很多， 如薄層的厚度，吸附劑顆粒的大小，酸堿性，活性等級，外界溫度和展開劑純度、組成、揮發(fā)性等。所以，要獲得重現(xiàn)的比移值就比較困難。為此，在測定某一試樣時，最好用已知樣品進(jìn)行對照。溶質(zhì)最高濃度中心至原點中心的距離R f溶劑前沿至原點中心的距離2、快速分離少量物質(zhì)。（幾到幾十微克，甚至0.01 g）3、跟蹤反應(yīng)進(jìn)程。在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)時，常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失，來判斷反應(yīng)是否完成。4、化合物純度的檢驗（只出現(xiàn)一個斑點，且無拖尾現(xiàn)象，為純物質(zhì)。）此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相

3、色譜分析的物質(zhì)。.三 、實驗裝置薄層板在不同的層析缸中展開的方式四、實驗操作步驟：1、吸附劑的選擇薄層色譜的吸附劑最常用的是氧化鋁和硅膠。1）、硅膠：“硅膠 H”不含粘合劑；“硅膠 G”含煅石膏粘合劑；其顆粒大小一般為260 目以上。顆粒太大，展開劑移動速度快， 分離效果不好；反之，顆粒太小，溶劑移動太慢，斑點不集中，效果也不理想。化合物的吸附能力與它們的極性成正比，具有較大極性的化合物吸附較強(qiáng)，因而 Rf 值較小。酸和堿 > 醇、胺、硫醇> 酯、醛、酮> 芳香族化合物> 鹵代物、醚>烯>飽和烴本實驗選擇的吸附劑為薄層色譜用硅膠G。2、薄層板的制備（濕板的制

4、備）薄層板制備的好壞直接影響色譜的結(jié)果。薄層應(yīng)盡量均勻且厚度要固定。否則，在展開時前沿不齊，色譜結(jié)果也不易重復(fù)。在燒杯中放入2g 硅膠 G，加入 5 6ml0.5%的羧甲基纖維素鈉水溶液，調(diào)成糊狀。將配制好的漿料傾注到清潔干燥的載玻片上， 拿在手中輕輕的左右搖晃， 使其表面均勻平滑， 在.室溫下晾干后進(jìn)行活化。本實驗用此法制備薄層板4 片。3、薄層板的活化將涂布好的薄層板置于室溫涼干后， 放在烘箱內(nèi)加熱活化， 活化條件根據(jù)需要而定。硅膠板一般在烘箱中漸漸升溫， 維持 105110活化 30min。氧化鋁板在 200烘 4h 可得到活性為級的薄板， 在 150160烘 4h 可得活性為級的薄板。

5、活化后的薄層板放在干燥器內(nèi)保存待用。4、點樣先用鉛筆在距薄層板一端1cm 處輕輕劃一橫線作為起始線，然后用毛細(xì)管吸取樣品，在起始線上小心點樣，斑點直徑一般不超過 2mm。若因樣品溶液太稀，可重復(fù)點樣，但應(yīng)待前次點樣的溶劑揮發(fā)后方可重新點樣， 以防樣點過大，造成拖尾、擴(kuò)散等現(xiàn)象，而影響分離效果。若在同一板上點幾個樣，樣點間距離應(yīng)為 1。點樣要輕，不可刺破薄層。5、展開薄層色譜的展開，需要在密閉容器中進(jìn)行。為使溶劑蒸氣迅速達(dá)到平衡，可在展開槽內(nèi)襯一濾紙。在層析缸中加入配好的展開溶劑，使其高度不超過1cm。將點好的薄層板小心放入層析缸中，點樣一端朝下，浸入展開劑中。蓋好瓶蓋，觀察展開劑前沿上升到一定

6、高度時取出， 盡快在板上標(biāo)上展開劑前沿位置。晾干，觀察斑點位置，計算 Rf 值。6、顯色被分離物質(zhì)如果是有色組分，展開后薄層色譜板上即呈現(xiàn)出有色斑點。如果化合物本身無色， 則可用碘蒸氣熏的方法顯色。 還可使用腐蝕性的顯色劑如濃硫酸、濃鹽酸和濃磷酸等。對于含有熒光劑的薄層板在紫外光下觀察，展開后的有機(jī)化合物在亮的熒光背景上呈暗色斑點。本實驗樣品本身具有顏色，不必在熒光燈下觀察。五、實驗內(nèi)容：.1、檢驗甲基橙的純度。（通過與已知標(biāo)準(zhǔn)物對比的方法檢驗物質(zhì)是否純凈）實驗樣品：甲基橙粗品（自制） 、甲基橙純品。溶劑：乙醇：水 =1： 1展開劑：丁醇：乙醇：水=10：1：12、混合物的分離實驗樣品：圓珠筆芯油溶劑： 95%乙醇展開劑：丁醇：乙醇：水=9： 3： 1（體積比）3、 1%偶氮苯、 1%間硝基苯胺、熒光黃 (95%乙醇 , 1mg/1ml)、次甲基藍(lán)、環(huán)己烷:乙酸 9:1五、實驗關(guān)鍵步驟：1、載玻片應(yīng)干凈且不被手污染，吸附劑在玻片上應(yīng)均勻平整。2、點樣不能戳破薄層板面，各樣點間距1 1.5cm，樣點直徑應(yīng)不超過2mm。3、展開時，不要讓展開劑前沿上升至底線。否則，無法確定展開劑上升高度，即無法求得Rf 值和準(zhǔn)確判斷粗產(chǎn)