b6相色譜儀(HPLC)設備驗證方案及記錄

1、高效液相色譜儀驗證 設備驗證記錄題目編號頁數(shù)版本2000起草人及日期審核人及日期批準人及日期一、 方案（一）驗證目的：證實Echrom98高效液相色譜系統(tǒng)的流速、梯度混合比例、每米理論塔板數(shù)、重現(xiàn)性、分離度及噪聲、漂移等確實能達到生產要求，為生產提供依據。（二）驗證指標：1、高效液相系統(tǒng)的實際流速與設備顯示的數(shù)值的偏差2、 每米理論塔板數(shù)是否大于100003、 分離度是否大于1.54、 各組分重現(xiàn)性是否良好5、 噪聲、漂移試驗是否達到要求（三）驗證依據：1、藥品生產驗證指南2、高效液相色譜儀使用說明書（四）驗證的必備條件：1、 潔凈容量瓶（100ml、200ml、500ml）2、 d=0.1電

2、子秤3、 高效液相處于正常運行狀態(tài)4、 已脫氣的流動相5、潔凈廠房經過驗證并合格 設備驗證記錄題目編號頁數(shù)版本2000設備概況：本高效液相色譜系統(tǒng)由雙泵系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、樣品分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)及色譜工作站與打印系統(tǒng)組成，雙泵系統(tǒng)可由手動（面板控制）或電腦控制任意設定流速、限壓及梯度洗脫條件。其限壓設定對儀器提供過壓保護，樣品分離系統(tǒng)主要由色譜柱及其保護柱組成，可按不同柱填料的功能與樣品組分性質將樣品中各組分分離，在流動相的作用下進入檢測器，檢測系統(tǒng)為紫外可變波長檢測器，波長在190870nm連續(xù)可調，衰減輸出信號方便，檢測靈敏，對紫外、可見區(qū)有吸收的物質均可產生信號且與濃度成正比。色譜工作站可控

3、制操作，記錄運行信號，數(shù)據處理，保存并打印記錄文件。使該系統(tǒng)可用于混合組分的分離與純化，安裝在本崗位的主要作用是用于白介素2的最終純化，以除去其中的雜蛋白及其它組分并保持其生物活性。 設備驗證記錄題目編號頁數(shù)版本2000設備資料檔案：高效液相色譜儀A泵泵紫外可變波長檢測器Echrom98色譜工作站出廠日期2001.11.022001.11.022001.05.102001.10.10設備出廠編號P2600406P2600407U208157D200230S00本公司設備編號FD-jx-01-01FD-jx-01-01FD-jx-01-02FD-jx-01-03生產廠家大 連 依 利 特 科 學

4、 儀 器 有 限 公 司電源22022V頻率500.5Hz功 耗200W流量范圍0.5ml/min50.0ml/min工作溫度535濕度85%相對濕度流量精確度1.0%(10ml/min); 2.0%(10ml/min)最高工作壓力20MPa（流量10ml/min）；10Mpa(流量30ml/min)流量穩(wěn)定度1.5%RSD噪 聲2.010-4AU（254 nm）漂 移5.010-4AU/hr(254nm)安裝位置基因工程車間純化二室設備驗證記錄題目編號頁碼版本2000二、設備安裝確認：1、 電源 設計要求 安裝情況 電 壓 220V 頻 率 50Hz 接地要求 接地 結 論： 確 認 人：

5、日 期： 2、 振動源及穩(wěn)定性：安放儀器的工作臺應穩(wěn)固且寬度大于80cm，安裝處沒有振動源。結 論： 確 認 人： 日 期：3、 安裝環(huán)境要求：安裝場所應清潔無塵，無易燃易爆及腐蝕性氣體，排風良好，無較強的電場或磁場。溫度1530，相對濕度在20%85%范圍內。結 論： 確 認 人： 日 期： 4、 資料整理 存放地點操作說明書維修手冊色譜工作站說明書電腦系統(tǒng)說明書打印機說明書設備驗證記錄題目編號頁碼版本2000三、設備運行確認：1、 泵的運行確認：1、1、 打開泵電源，泵電源指示燈亮；1、2、 屏幕顯示當前壓力及前次設定的流速、限壓；1、3、 按功能鍵，設定流速及限壓，屏幕上應顯示與設定數(shù)值

6、一樣的數(shù)字；1、4、 將泵入口管放入裝有注射用水的血清瓶中，設定流速為10.0ml/min，限壓為10.0MPa，讓泵運行，泵屏幕上顯示流速為10.0ml/min，限壓為10.0MPa，壓力為1.2MPa，泵出口處有水流出；1、5、 關閉電源，電源指示燈滅。結 論： 確認人： 日 期：2、檢測儀的運行確認：2、1、打開檢測儀電源，屏幕上顯示數(shù)字；2、2、調節(jié)輸出衰減，不同衰減，屏幕上顯示數(shù)字不同；2、3、調節(jié)衰減，屏幕上顯示所調的結果；2、4、關閉檢測儀電源，屏幕上數(shù)字消失。結 論： 確認人： 日 期：3、電腦系統(tǒng)的運行確認：3、1、打開電腦主機及顯示器電源，電源指示燈亮；3、2、將電腦進入工

7、作站系統(tǒng)，電腦立即進入工作站系統(tǒng)；3、3、設定梯度，以注射用水為流動相，讓泵運行，泵按設定的梯度運行并記錄結果。3、4、按工作站的程序保存運行結果，退出工作站；3、5、關閉電腦電源, 電源指示燈滅。結 論：確認人： 日 期：設備驗證記錄題目編號頁碼版本2000四、設備性能確認： 1、 預試驗驗證：檢查泵連接管路是否暢通，確認系統(tǒng)密封性是否良好及限壓保護是否正常。1、 1系統(tǒng)密封性試驗：嚴格按該儀器使用說明書連接泵、過濾網、進樣器、色譜柱、保護柱、檢測器及其廢液排出管路，檢查電源連接符合要求后開啟電源，以100%甲醇為流動相，按功能選擇設定流速為20ml/min，限壓為10.0MPa。按說明書啟

8、動儀器，觀察泵的聲音正常。氣泡排盡后，廢液出口流出液體，證明管路暢通，待壓力平穩(wěn)后保持10 min，用濾紙檢查各管路接口處應無濕跡。卸下色譜柱，堵住泵出口端（壓力傳感器以下），使壓力達到9.0MPa， 系統(tǒng)仍無泄露及運行管路無氣泡產生。結 論：確認人： 日期：1、2限壓保護實驗：以HPLC級水為流動相，選擇功能設定一限壓為2.0MPa。再逐漸加大流速使實際壓力逐漸達到2.0MPa。在實際壓力達到限定壓力（2.0MPa）的一秒鐘內，泵自動停止，證明限壓保護（2.0MPa）合格，再于保護柱前端增加一0.22um濾膜，目前限壓為5.0MPa，逐漸加大流速（流速為35ml/min），至柱壓實際達到5.

9、0MPa時泵自動停止，限壓為5.0MPa合格。同法設定為10.0MPa，泵自動停止。結 論：確認人： 日期：1、 3流速及梯度混合實驗：1、3、1 流速各設定單泵流速分別為5ml/min, 10ml/min, 15ml/min, 20ml/min, 30ml/min,以注射用水為流動相，于廢液出口用潔凈并已稱重的容量瓶（100 ml，200 ml，500 ml）分別收集各流速10分鐘流動相流出液的重量，用d=0.1g電子秤稱重，計算其實際流速，結果見下表，測三次： 設備驗證方案題目編號頁碼版本2000 第一次運行結果：設定流(ml/min)10分鐘流出液重量（g）水 溫()水 密 度(g)實際

10、流速(ml/min)偏差%A泵510152030B泵510152030操作人： 復核人： 日 期：第二次運行結果：設定流(ml/min)10分鐘流出液重量（g）水 溫()水 密 度(g)實際流速(ml/min)偏 差%A泵510152030B泵510152030操作人： 復核人： 日 期：設備驗證記錄題目編號頁碼版本2000第三次運行結果：設定流(ml/min)10分鐘流出液重量（g）水 溫()水 密 度(g)實際流速(ml/min)偏 差%A泵510152030B泵510152030操作人： 復核人： 日 期：驗證結果：驗證人員：日 期：1、3、2 梯度混合試驗：由梯度控制裝置設置階梯式的梯

11、度洗脫程序。設定溶劑A為注射用水，B為0.1%丙酮水溶液，B經由5個階梯從0%變到100%，設定梯度見下表。開機后先以A溶劑沖洗系統(tǒng)，待基線平穩(wěn)后開始執(zhí)行梯度程序，畫出梯度變化曲線。求出各溶劑配比時的輸出信號值或記錄儀讀數(shù)。重復測量三次，計算平均值。從B溶劑的含量及相對應的輸出信號值或記錄儀讀數(shù)i(第i段梯度準確度，%)和m(第i段輸出信號值或記錄儀讀數(shù)平均值)計算梯度準確度Gci(各段輸出信號值或記錄儀讀數(shù)平均值)，取Gci最大者作為儀器梯度準確度誤差。運行結果見附圖。計算公式：Gci=（i-m）/m100%設備驗證記錄題目編號頁碼版本2000設定梯度如下：時 間（min）流 速（ml/mi

12、n）A%B%梯度狀態(tài)0201000130201000150208020180208020110020604011302060401150204060118020406012002020801230202080125020010012802001001計算結果如下：B 溶 液 梯 度0%20%40%60%80%100%記錄儀讀數(shù)（電信號）123i-m123Gci123設備驗證記錄題目編號頁碼版本2000運行結果見附圖：第一次運行結果圖：操作人： 復核人： 日 期：第二次運行結果圖：操作人： 復核人： 日 期：第三次運行結果圖：操作人： 復核人： 日 期： 驗證結果：驗證人員：日 期：設備驗證記錄

13、題目編號頁碼版本20002、系統(tǒng)適應性試驗 2、1 每米理論塔板數(shù)測定：嚴格按該儀器使用說明書操作，條件為：ODSC18柱，規(guī)格為225cm, 粒徑20m,孔徑300,紫外檢測器檢測波長為280nm，輸出衰減為0.005,流動相A為0.1%TFA水溶液，流動相B為0.1%TFA乙腈溶液,流速為10ml/min。樣品為硝基苯，濃度為10%，進樣量100ul。在50%B狀態(tài)下洗脫，測三次，運行結果見附圖： 第一次每米塔板數(shù)：N=5.54(tR/W1/2)21000/250=操作人： 復核人： 日 期：第二次每米塔板數(shù)：N=5.54(tR/W1/2)21000/250=操作人： 復核人： 日 期：第

14、三次每米塔板數(shù)：N=5.54(tR/W1/2)21000/250=操作人： 復核人： 日 期：驗證結果：驗證人員： 日 期：2、2 分離度測定：嚴格按該儀器使用說明書操作，條件為：ODSC18柱，規(guī)格為225cm, 粒徑20m,孔徑300,紫外檢測器檢測波長為280nm，輸出衰減為0.005,流動相A為注射用水，流動相B為純甲醇，流速為10ml/min。樣品為8 ul/ ml硝基苯、2.04mg/ml萘的溶液， 進樣量為50ul。在70%B狀態(tài)下洗脫，測三次，結果見附圖：設備驗證記錄題目編號頁碼版本2000第一次分離度R=（tR2-tR1）/（W1+W2）=操作人： 復核人： 日 期：第二次分

15、離度R=（tR2-tR1）/（W1+W2）=操作人： 復核人： 日 期：第三次分離度R=（tR2-tR1）/（W1+W2）=操作人： 復核人： 日 期：驗證結果：驗證人員：日 期： 2、3重現(xiàn)性測定：嚴格按該儀器使用說明書操作，條件為：ODSC18柱，規(guī)格為225cm, 粒徑20m,孔徑300,紫外檢測器檢測波長為280nm，輸出衰減為0.005,流動相A為注射用水，流動相B為純甲醇，流速為10ml/min。樣品為8 ul/ ml硝基苯、2.04mg/ml萘的溶液， 進樣量為50ul。在70%B狀態(tài)下洗脫。系統(tǒng)于前次運行結束后充分洗脫，經流動相平衡1小時以上，重新進樣，在相同條件下運行，見附圖

16、：操作人： 復核人： 日 期：驗證結果：驗證人員：日 期：設備驗證記錄題目編號頁碼版本20002、4噪聲、漂移測試：選用C18色譜柱，100%甲醇為流動相，流速為10ml/min,紫外檢測儀的波長為254nm，衰減器調到最靈敏檔（即0.005）,開機預熱，待儀器穩(wěn)定后記錄基線60 min，計算基線噪聲和漂移。峰形圖：第一次：基線噪聲：漂 移：操作人： 復核人： 日 期：第二次：基線噪聲：漂 移：操作人： 復核人： 日 期：第三次：基線噪聲：漂 移：操作人： 復核人： 日 期：設備驗證記錄題目編號頁碼版本2000驗證結果：驗證人員：日 期：2、5色譜工作站功能的確認：電腦系統(tǒng)工作界面為Windows9