微生物實驗報告(土壤)(共6頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上吉林化工學(xué)院環(huán)境與生物工程學(xué)院微生物學(xué)實驗報告土壤微生物的分離、培養(yǎng)及鑒定學(xué)生學(xué)號： 學(xué)生姓名： 王慧 專業(yè)班級： 生技1001 指導(dǎo)教師： 謝瑩 吉 林 化 工 學(xué) 院Jilin Institute of Chemical Technology專心-專注-專業(yè)土壤微生物的分離、培養(yǎng)及鑒定王慧、王宇、鄧賽、叢學(xué)琦（環(huán)境與生物工程學(xué)院，生物技術(shù)1001）摘要：利用分離純化微生物的基本操作技術(shù)對土壤中的微生物進(jìn)行分離與純化，根據(jù)菌落形態(tài)觀察及一系列生理生化試驗的結(jié)果，對照種屬特征初步鑒定分離純化的微生物所屬類群。關(guān)鍵詞：細(xì)菌、放線菌、霉菌、培養(yǎng)基的配制、高壓滅菌。1前言培

2、養(yǎng)基是指利用人工方法將適合微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的各種營養(yǎng)物質(zhì)混合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)，主要用于微生物的分離、培養(yǎng)、鑒定、菌種保藏等方面。自然界中微生物種類繁多，營養(yǎng)類型多樣，加之實驗和研究的目的不同，所以培養(yǎng)基種類很多。不同培養(yǎng)基一般都應(yīng)含有微生物生長繁殖所需的碳源、氮源、能源、無機(jī)鹽、生長因子和水等營養(yǎng)成分。此外，為了滿足微生物生長繁殖的要求，還必須控制培養(yǎng)基的pH值。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種用于培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基，屬于半合成培養(yǎng)基。高氏一號培養(yǎng)基是一種用于培養(yǎng)放線菌的合成培養(yǎng)基。馬丁氏培養(yǎng)基用于霉菌的分離培養(yǎng)。2材料與藥品2.1材料 土壤（選定采土地點后，鏟去表涂層23cm，取310c

3、m深層土壤10g。）、天平、高壓蒸汽滅菌鍋、移液管、試管、燒杯、量筒、錐形瓶、培養(yǎng)皿、pH試紙、棉花、紗布、牛皮紙、線繩、報紙、無菌培養(yǎng)皿、無菌移液管、玻璃涂棒等。2.2藥品牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、可溶性淀粉、瓊脂、黃豆芽、NaCl、KNO3、K2HPO4、MgSO4、FeSO4、KH2PO4、MgSO47H2O、NaOH溶液（1mol/L）、無菌水、1重鉻酸鉀。3 實驗方法3.1 培養(yǎng)基的配制3.1.1肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制1培養(yǎng)基成分牛肉膏 0. 3g蛋白胨 1gNaCl 0.5g瓊脂 1.5g水 100mLpH 7.27.42配制方法（1）稱量及溶化：分別稱取蛋白胨和NaCl的所需量，置

4、于燒杯中，加入所需水量的23左右的蒸餾水；用玻璃棒挑取牛肉膏置于另一小燒杯中，進(jìn)行稱量。然后加入少量蒸餾水于小燒杯中，加熱融化，倒入上述燒杯中。（2）定容：將溶液倒入量筒中，補充水量至所需體積。（3）加瓊脂：將所需量的瓊脂先放到三角瓶中，再將定容后的培養(yǎng)基倒入三角瓶中。（4）調(diào)pH：待溶液冷至室溫時，用1mol/L NaOH溶液調(diào)pH至7.27.4。（5）分裝、加塞、包扎。（6）高壓蒸汽滅菌20分鐘。待培養(yǎng)基冷卻至60左右時，倒入已滅菌的培養(yǎng)皿中，等到培養(yǎng)基完全凝固后，放入冰箱中保存。3.1.2高氏一號培養(yǎng)基的配制1培養(yǎng)基成分可溶性淀粉 20gKNO3 1gNaCl 0.5gK2HPO4 0.

5、5gMgSO4 0.5gFeSO4 0.01g瓊脂 20g水 1000mLpH 7.27.42配制方法（1）稱量及溶化：先稱量可溶性淀粉，置于一小燒杯中，加入少量冷水，將淀粉調(diào)成糊狀，加熱，使淀粉完全融化。再分別稱量KNO3、NaCl、K2HPO4、MgSO4，依次逐一加入水中溶解。（2）定容：將溶液倒入量筒中，補充水量至所需體積。（3）加瓊脂：將所需量的瓊脂先放到三角瓶中，再將定容后的培養(yǎng)基倒入三角瓶中。（4）調(diào)pH：待溶液冷至室溫時，用1mol/lLNaOH溶液調(diào)pH至7.27.4。（5）分裝、加塞、包扎。（6）高壓蒸汽滅菌20分鐘。待培養(yǎng)基冷卻至60左右時，倒入已滅菌的培養(yǎng)皿中，等到培養(yǎng)

6、基完全凝固后，放入冰箱中保存。3.1.3馬丁氏培養(yǎng)基的配制1培養(yǎng)基成分葡萄糖 10g蛋白胨 5gK2HPO4 1gMgSO47H2O 0.5g瓊脂 16g水 1000mL鏈霉素溶液（10000U/ml） 3.3mL（臨用前加入）的2配制方法（1）稱量：稱取培養(yǎng)基各成分的所需量。（2）溶化：在燒杯中加入約2/3所需水量，然后依次逐一加入并溶化培養(yǎng)基各成分。（3）定容：將溶液倒入量筒中，補充水量至所需體積。（4）加瓊脂：將所需量的瓊脂先放到三角瓶中，再將定容后的培養(yǎng)基倒入三角瓶中。（5）加塞、包扎。（6）高壓蒸汽滅菌20分鐘。（7）臨用前，加熱融化培養(yǎng)基，待冷卻至60左右，按每1000ml培養(yǎng)基以

7、無菌操作加入3.3ml的鏈霉素溶液，迅速混勻。3.2微生物的分離3.2.1細(xì)菌分離1制備土壤稀釋液稱取土樣1g，加入盛有99ml無菌水的錐形瓶中，振蕩10min，使土壤中菌體、芽孢或孢子均勻分散，制成102稀釋度的土壤稀釋液。然后按10倍稀釋法進(jìn)行稀釋分離，以制備107稀釋度為例，具體操作過程如下：取4.5ml無菌水試管6支，按103107順序編號，放置在試管架上。取移液管一支，準(zhǔn)確吸取0.5ml102土壤稀釋液，此為103稀釋度的土壤稀釋液，依次操作，制成104、105、106、107的土壤稀釋液。2涂布分離用無菌移液管分別吸取上述107、106、105、三個稀釋度菌懸液0.1ml，依次加入

8、對應(yīng)編號已經(jīng)準(zhǔn)備好的平板上。右手持無菌玻璃涂棒，左手那培養(yǎng)皿，并用拇指將皿蓋打開一縫，在火焰旁右手持玻璃涂棒將菌也自平板中央均勻向四周涂布擴(kuò)散，切忌用力過猛將菌液直接推向平板邊緣或?qū)⑴囵B(yǎng)基劃破。每個稀釋度涂兩個平板。3恒溫培養(yǎng)將平板置于30恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。3.2.2放線菌分離1制備土壤稀釋液稱取土樣1g，加入盛有99ml無菌水的錐形瓶中，振蕩后靜置5min，即成102稀釋度的土壤稀釋液。2涂布分離用無菌移液管分別吸取上述105、104、103、三個稀釋度菌懸液0.1ml，涂平板。每個稀釋度涂兩個平板。3培養(yǎng)將涂好的平板放于28恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)57d后觀察結(jié)果。3.2.3霉菌的

9、分離1制備土壤稀釋液稱取土樣5g，加入盛有95ml無菌水的錐形瓶中，振蕩后靜置5min，即成102稀釋度的土壤稀釋液。2涂布分離將已滅菌的培養(yǎng)基溶化，加入鏈霉素溶液，待培養(yǎng)基凝固后，用無菌移液管分別吸取104、103、102、三個稀釋度菌懸液0.1mL，涂平板。每個稀釋度涂兩個平板。3培養(yǎng)將涂好的平板放于28恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)35d后觀察結(jié)果。4 結(jié)果與討論菌體外觀記錄表 菌落特征名稱形狀顏色質(zhì)地表面光澤與培養(yǎng)基結(jié)合程度菌體形態(tài)細(xì)菌 圓形 白、黃橘軟光澤不緊密球狀放線菌圓形乳白色硬粗糙緊密桿狀霉菌絲狀綠、白、黃疏松不光澤不緊密長管狀有菌絲討論：實驗過程中注意無菌操作，培養(yǎng)時需將平板倒置。參考文獻(xiàn) 1 林先貴 土壤微生物研究原理與方法 高等教育出版社 2010-3年2 陳堅，劉和，李秀芬等