減數(shù)分裂相關(guān)基因與犏牛雄性不育的關(guān)系研究

1、減數(shù)分裂相關(guān)基因與犏牛雄性不育的關(guān)系研究牦牛是中國的主要牛種之一,它具有很強(qiáng)的抗逆性、肉質(zhì)好、用途廣泛等優(yōu)點(diǎn),是青藏高原高寒牧區(qū)人民賴以生存的生產(chǎn)、生活資料。但其生產(chǎn)性能低,于是人們采用種間雜交改良的方式,利用雜種優(yōu)勢提高后代乳肉生產(chǎn)性能。將黃牛和牦牛雜交,雜種一代犏牛具有很強(qiáng)的雜種優(yōu)勢：生長發(fā)育快、早熟,適應(yīng)范圍擴(kuò)大,世代間隔縮小,畜群周轉(zhuǎn)加快,奶、肉、役力都大幅度提高,深受牧區(qū)、半農(nóng)半牧區(qū)和鄰近農(nóng)區(qū)群眾的歡迎。但由于種間雜交,生殖隔離的作用在這些雜交后代犏牛上體現(xiàn)為雄性不育,因而無法將雜種的優(yōu)良性狀通過橫交的方式固定下來,這成為牦牛雜交改良中的一大難題。因此探明犏牛雄性不育機(jī)制成為近年來牦

2、牛雜交改良和育種有待解決的難題。研究發(fā)現(xiàn)犏牛雄性不育可能與精子發(fā)生過程中的減數(shù)分裂密切相關(guān)。Cdc2.Cdc25Avasa、pum現(xiàn)因是影響減數(shù)分裂的重要基因，為探討減數(shù)分裂與犒牛雄性不育的關(guān)系，本文采用RT-PC序口熒光定量PC淑術(shù)對Cdc2、Cdc25Avasa和pum2b因的組織表達(dá)特征以及在黃牛、耗牛和犒牛睪丸組織中的表達(dá)水平進(jìn)行分析。1.黃牛、耗牛和犒牛睪丸組織中Cdc2基因mRNAS達(dá)水平研究本實(shí)驗(yàn)根據(jù)牛Cdc2基因序列（GenBank登陸號為NC007329設(shè)計(jì)引物，并以黃牛、耗牛和犒牛睪丸組織RNA*模板,PCR擴(kuò)增，該基因在黃牛、耗牛和犒牛睪丸組織都有表達(dá)，產(chǎn)物為283bp；

3、通過RT-PC耐測Cdc2基因在耗牛睪丸、附睪、副性腺、垂體、下丘腦、心臟、肝臟、脾臟、腎臟、肺臟、胸肌,卵巢等組織中的表達(dá)情況,結(jié)果顯示該基因在各組織中都有表達(dá),驗(yàn)證了它廣泛表達(dá)的特點(diǎn)并說明它是細(xì)胞周期運(yùn)行和細(xì)胞增殖的主要調(diào)控者。通過熒光定量PCR僉測犒牛及其親本睪丸組織中Cdc2基因的表達(dá)水平，結(jié)果顯示：Cdc2基因在在犒牛睪丸組織中的表達(dá)水平顯著低于其在黃牛、牦牛睪丸組織中的表達(dá)水平(P<0.05)。說明Cdc2基因mRNAg達(dá)水平與犒牛雄性不育有一定關(guān)系。2.黃牛、耗牛和犒牛睪丸組織中Cdc25A基因mRN膝達(dá)水平研究本實(shí)驗(yàn)根據(jù)牛Cdc25A®因序歹1(GenB

4、ank®陸號為BC151493設(shè)計(jì)引物，并以黃牛、耗牛和犒牛睪丸組織RNA為模板,PCR擴(kuò)增，該基因在黃牛、耗牛和犒牛睪丸組織都有表達(dá)，產(chǎn)物為385bp；通過RT-PCR僉測Cdc25A基因在耗牛睪丸、附睪、副性腺、垂體、下丘腦、心臟、肝臟、脾臟、腎臟、肺臟、胸肌,卵巢等組織中的表達(dá)情況,結(jié)果顯示該基因在各組織中都有表達(dá),驗(yàn)證了它廣泛表達(dá)的特點(diǎn)并說明它是細(xì)胞周期運(yùn)行和細(xì)胞增殖的主要調(diào)控者。通過熒光定量PCR僉測犒牛及其親本睪丸組織中Cdc25A.基因的表達(dá)水平，結(jié)果顯示：Cdc25A基因在犒牛睪丸組織中的表達(dá)水平顯著低于其在黃牛、牦牛睪丸組織中的表達(dá)水平(P<0.05)

5、。表明Cdc25A基因mRNAS達(dá)水平與犒牛雄性不育有一定關(guān)系。3.黃牛、耗牛和犒牛睪丸組織中vasa基因mRNAfe達(dá)水平研究本實(shí)驗(yàn)根據(jù)牛vasa基因序列(GenBank®陸號為NM173979設(shè)計(jì)引物，并以黃牛、耗牛和犒牛睪丸組織RNA為模板,PCR擴(kuò)增，該基因在黃牛、耗牛和犒牛睪丸組織都有表達(dá)，產(chǎn)物為172bp；通過RT-PCR測vasa基因在耗牛睪丸、附睪、副性腺、垂體、下丘腦、心臟、肝臟、脾臟、腎臟、肺臟、胸肌,卵巢等組織中的表達(dá)情況,結(jié)果顯示該基因在僅在生殖細(xì)胞中表達(dá)，是影響精子發(fā)生的重要候選基因.通過熒光定量PCR僉測犒牛及其親本睪丸組織中vasa基因的表達(dá)水平,結(jié)果顯

6、示：它在犏牛睪丸組織中的表達(dá)水平顯著低于其在黃牛、牦牛睪丸組織中的表達(dá)水平(P<0.05)。說明vasa基因mRNAt達(dá)水平與犒牛雄性不育有一定關(guān)系。4.黃牛、耗牛和犒牛睪丸組織中pum2基因mRNAS達(dá)水平研究本實(shí)驗(yàn)根據(jù)牛pum2ss因序歹U(GenBank登陸號為XM₈64456設(shè)計(jì)弓I物，并以黃牛、耗牛和犒牛睪丸組織RNA»模板,PcR擴(kuò)增，該基因在黃牛、耗牛和犒牛睪丸組織都有表達(dá)，產(chǎn)物為220bp；通過RT-PCR僉測pum2s因在耗牛睪丸、附睪、副性腺、垂體、下丘腦、心臟、肝臟、脾臟、腎臟、肺臟、胸肌,卵巢等組織中的表達(dá)情況,結(jié)果顯示該基因