一代測序與二代測序的區(qū)別與聯(lián)系

1、一代測序與二代測序的區(qū)別與聯(lián)系Sanger法測序（一代測序）Sanger 法測序利用一種DNA 聚合酶來延伸結(jié)合在待定序列模板上的引物。直到摻入一種鏈終止核苷酸為止。每一次序列測定由一套四個單獨的反應(yīng)構(gòu)成，每個反應(yīng)含有所有四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP)， 并混入限量的一種不同的雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH 基團，使延長的寡聚核苷酸選擇性地在G、 A、 T 或 C 處終止。終止點由反應(yīng)中相應(yīng)的雙脫氧而定。每一種dNTPs 和 ddNTPs 的相對濃度可以調(diào)整，使反應(yīng)得到一組長幾百至幾千堿基的鏈終止產(chǎn)物。它們具有共同的起始點，但終止在不同的的核苷酸上，可

2、通過高分辨率變性凝膠電泳分離大小不同的片段，凝膠處理后可用X-光膠片放射自顯影或非同位素標(biāo)記進行檢測。高通量測序（二代測序）高通量測序技術(shù) （ High-throughput sequencing ，HTS）是對傳統(tǒng)Sanger 測序（稱為一代測序技術(shù)）革命性的改變, 一次對幾十萬到幾百萬條核酸分子進行序列測定, 因此在有些文獻中稱其為下一代測序技術(shù)(next generation sequencing ，NGS )足見其劃時代的改變, 同時高通量測序使得對一個物種的轉(zhuǎn)錄組和基因組進行細致全貌的分析成為可能, 所以又被稱為深度測序 (Deep sequencing)。第一代和第二代測序技術(shù)大約

3、第平臺測序方檢測讀長X 公司優(yōu)點相對局限性名稱法方法(堿基代數(shù) )ABI/桑格 -第3130生命毛細管一xL-37技術(shù)電泳測代30xL公司序法熒光/ 光學(xué)高讀長，準(zhǔn)確度一通量低；樣品制備600-1次性達標(biāo)率高， 能成本高，使之難以000很好處理重復(fù)序做大量的平行測列和多聚序列序GeXP桑格 -第貝克遺傳毛細管熒光 /一曼分析電泳測光學(xué)代系統(tǒng)序法基因第組測羅氏焦磷酸二序儀光學(xué)/454FLX測序法代系統(tǒng)第HiSeq可逆鏈2000熒光 /以魯終止物二/miS米那和合成光學(xué)代eq測序法高讀長，準(zhǔn)確度一次性達標(biāo)率高， 能通量低；單個樣品600-1很好處理重復(fù)序的制備成本相對000列和多聚序列； 易較高小型化樣品制備較難；難在第二代中最高于處理重復(fù)和同230-4讀長；比第一代的種堿基多聚區(qū)域；00測序通量大試劑沖洗帶來錯誤累積；儀器昂貴儀器昂貴；用于數(shù)2x15很高測序通量據(jù)刪節(jié)和分析的0費用很高很高測序通量； 在5500測序運行時間長；廣為接受的幾種第熒光 /讀長短，造成成本ABI/SxlSOL連接測25-35第二代平臺中， 所二高，數(shù)據(jù)分析困難OLiDiD 系序法光學(xué)要拼接出人類基代和基因組拼接困統(tǒng)因組的試劑成本難；儀器昂貴最低讀長短，推高了測第Helis單分子熒光 /高通量；在第二代赫利25-30序成本，降低了基二cope合成測中屬于單分子性