各種緩沖液的配制方法

1、各種緩沖液的配制方法各種緩沖液的配制方法NaHPG檸檬酸鈉緩沖液PH0.2mol/LNaHPO(ml)0.1mol/L檸檬酸鈉(ml)PH0.2mol/LNaHPO(ml)0.1mol/L檸檬酸鈉(ml)2.20.419.65.210.729.282.41.2418.765.411.158.852.62.1817.825.611.608.402.83.1716.835.812.097.913.04.1115.896.012.637.373.4.9415.066.13.226.78223.45.7014.306.413.856.153.66.4413.566.614.555.453.87.101

2、2.906.815.454.554.07.7112.297.016.473.534.28.2811.727.217.392.614.48.8211.187.418.171.834.69.3510.657.618.731.274.89.8610.147.819.150.855.010.309.708.019.450.55NaHPO2HQ分子量=178.050.2mol/L溶液含35.61g/L檸檬酸.H2。，分子量=210.140.1mol/L溶液含21.01g/L檸檬酸檸檬酸鈉緩沖溶液(0.1mol/L)PH0.1mol/L檸檬酸(ml)0.1mol/L檸檬酸鈉(ml)PH0.1mol/L檸檬

3、酸(ml)0.1mol/L檸檬酸鈉(ml)3.018.61.45.08.211.83.217.22.85.27.312.7316.04.056.413.6.4.43.614.95.15.65.514.53.814.06.05.84.715.34.013.16.96.03.816.24.212.37.76.22.817.24.411.48.66.42.018.04.610.39.76.61.418.64.9.210.88檸檬酸.H2。分子量=210.140.1mol/L溶液含21.01g/L檸檬酸鈉.2H2。)分子量=294.12;0.1mol/L溶液含29.4g/L醋酸緩沖液(0.2mol/L

4、,18C)PH0.2mol/LNaAC(ml)0.2mol/LHAC(ml)PH0.2mol/LNaAC(ml)0.2mol/LHAC(ml)3.60.759.254.85.904.103.81.208.805.07.003.004.01.808.205.27.902.104.22.657.355.48.601.404.43.706.305.69.100.904.64.905.105.89.400.60NaAC.3H2O,分子量=136.090.2mol/L溶液含27.22g/L（1）醋酸鹽溶液的配制：醋酸醋酸鈉緩沖液（pH3.6）取醋酸鈉5.1g,加冰醋酸20ml,再加水稀釋至250ml,即

5、得。醋酸一醋酸鈉緩沖液（pH3.7）取無(wú)水醋酸鈉20g,加水300ml溶解后，加溟酚藍(lán)指示液1ml及冰醋酸6080ml,至溶液從藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)榧兙G色，再加水稀釋至1000ml,即得。醋酸醋酸鈉緩沖液（pH3.8）取2mol/L醋酸鈉溶液13ml與2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含銅1mg的硫酸銅溶液0.5ml,再加水稀釋至1000ml,即得。醋酸一醋酸鈉緩沖液(pH4.5)取醋酸鈉18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀釋至1000ml,即得。醋酸一醋酸鈉緩沖液(pH4.6)取醋酸鈉5.4g,加水50ml使溶解，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至4.6,再加水稀釋至100ml,即得。醋酸一醋酸鈉緩沖液(pH

6、6.0)取醋酸鈉54.6g,加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀釋至500ml,即得。用醋酸和醋酸鈉配制的緩沖溶液的PH=PKa+lgC(NaAc)/C(HAc)(在此，C(HAc)指醋酸的濃度，C(NaAc)指醋酸鈉的濃度，Ka是醋酸的解離常數(shù)=1.8*10-5(1.8乘10的-5次方),PKa=-lgKa=4.75,將PH=5.5代入，可得C(NaAc)/C(HAc)=5.6通常我們配制時(shí)會(huì)使C(HAc)=0.1mol/L,或是C(HAc)=0.2mol/L等。若是配制C(HAc)=0.1mol/L,則C(NaAc)=0.56mol/L稱量醋酸鈉固體質(zhì)量為82*0.56=46克量取

7、冰醋酸體積為0.1*1000/17.5=5.7mL。將稱好的醋酸鈉和量好的冰醋酸加入1000mLzk中溶解、攪拌均勻即可。當(dāng)然若想配制其它的濃度，也可照公式計(jì)算即可，通常緩沖溶液不能配的太稀，否則緩沖能力要下降，太濃的話又浪費(fèi)試劑。苯二甲酸氫鉀氫氧化鈉緩沖液PH0.1mol/LNaOH(ml)0.2mol/L苯二甲酸氫鉀(ml)加水至(ml)4.00.4025.00100.004.23.6525.00100.004.47.3525.00100.004.612.0025.00100.004.817.5025.00100.005.023.6525.00100.005.229.7525.00100.

8、005.435.2525.00100.005.639.7025.00100.005.843.1025.00100.006.045.4025.00100.006.247.0025.00100.000.2mol/L苯二甲酸氫鉀溶液：稱取在硫酸干燥器中干燥過(guò)24小時(shí)的苯二甲酸氫鉀20.44g溶于水中，稀釋至500ml。磷酸緩沖液（:0.2mol/L)PH0.2mol/LNaHPO(ml)0.2mol/LNaHPO(ml)PH0.2mol/LNaHPO(ml)0.2mol/LNaHPO(ml)588.092.07.061.039.06.012.387.77.272.028.06.218.581.57.

9、481.019.06.26.573.57.87.013.0466.637.562.57.891.58.56.849.051.08.094.75.3NaHPO.2H2O,分子量=178.05,0.2mol/L溶液含35.61g/LNaHPO.2H2O，分子量=156.03,0.2mol/L溶液含31.21g/LNaHPO.H2O,分子量=138.03,0.2mol/L溶液含27.6g/LNaHPO.12H2O,分子量=358.22,0.2mol/L溶液含71.64g/L磷酸鹽緩沖液(PB0配制方法0.01MPBSPBS(135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and8mMK

10、2HPO4pH7.2)PBS緩沖液(pH7.27.4):NaCl137mmol/L,KCl2.7mmol/L,Na2HPO44.3mmol/LKH2PO41.4mmol/L稱7.9gNaCl,0.2gKCl,0.24gKH2PO4(or1.44gNa2HPO4)l1.8gK2HPO4,溶于800ml蒸儲(chǔ)水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4,最后加蒸僭水定容至1L。保存于4c冰箱中即可。需要注意的是，通常所說(shuō)的濃度0.01M指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非Na離子或K離子的濃度，Na離子和K離子只是用來(lái)調(diào)節(jié)滲透壓的。母液的配制：0.2MNa2HPO4稱取71.6gNa2HPO4-12H2

11、。溶于1000ml水0.2MNaH2PO4稱取31.2gNaH2PO4-2H2Q溶于1000ml水各種濃度PB(pH=7.4)的配制:先配0.2MPB(pH=7.4)100ml):取19ml0.2mol/L的NaH2PO481ml0.2mol/L的Na2HPO4,即可。然后只需將0.2MPB(pH=7.4)按相應(yīng)比例適當(dāng)稀釋即可，如：0.1MPB(PH=7.4):取500ml0.2MPB)加水稀釋至1000ml即可。0.01MPB(PH=7.4):取50ml0.2MPB,力口水稀釋至1000ml即可。0.02MPB(PH=7.4):取100ml0.2MPB)加水稀釋至1000ml即可。若需要N

12、aCl的話，加入NaCl至0.9%(g/100ml)即可。另：其它各種另PH值的0.2MPB100ml)配方：pH0.2MNaH2PO4(ml)0.2MNa2HPO4ml)5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.1 85156.2 81.518.56.3 77.522.56.4 73.526.56.5 68.531.56.6 62.537.56.7 56.543.56.8 51496.9 45557.038627.1 33677.2 28727.3 23777.4 19ml81ml7.5 16847.6 13877.7 10.590.57.8 8.591.57.

13、9 7938.05.394.70.01M磷酸鹽緩沖液（PBS配制方法稱取8gNaCl、0.2gKCk1.44gNa2HPO尋口0.24gKH2PO4g于800ml蒸儲(chǔ)水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4）最后加蒸個(gè)留水定容至1L即可。在15lbf/in2（1034X105Pa）高壓下蒸氣滅菌（至少20分鐘），保存存于室溫或4c冰箱中。需要注意的是，通常所說(shuō)的濃度0.01M指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非Na離子或K離子的濃度，Na離子和K離子只是用來(lái)調(diào)節(jié)滲透壓的。如果是用于免疫組化的話，則需要在配置的時(shí)候分別加入100u/ml青霉素和鏈霉素之后再調(diào)PH定容、滅菌消毒。PH 7.67.4

14、7.0H2O10001000NaCl8.58.58.5Na2HPO4 2.22.2NaH2PO4 0.10.47.2100010008.52.22.20.20.3根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)看，新鮮配置的PBS攪勻后其PH值約在7.2-7.4之間，可是在溫度的影響下，尤其在夏天，其電離常數(shù)發(fā)生了改變，在經(jīng)過(guò)晝夜的時(shí)間后，PH值會(huì)明顯改變（我親自測(cè)過(guò)偏酸）。所以做實(shí)驗(yàn)的同學(xué)可要注意了，PH值可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，甚至可能導(dǎo)致陰性。所以務(wù)必記得這個(gè)時(shí)候和天氣，要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)條件控制問(wèn)題。每次使用前最好用試紙測(cè)一下過(guò)夜了的PBS如果發(fā)生偏酸或偏堿，注意重新?lián)Q新液。PB藪沖液稱取NaCl8g,KCl0.2g,Na2HPO4?

15、12H2O63g,KH2PO24g,溶于900ml雙蒸水中，用鹽酸調(diào)pH值至7.4,加水定容至1L,常溫保存?zhèn)溆肞BS撰沖液取3006Tween-20力口入PBS100ml中，混勻后即刻使用?，F(xiàn)用現(xiàn)配。如果是把所有固體加大十倍，配置為濃縮液，工作時(shí)候十倍稀釋，那么，在剛配好濃縮液時(shí)，PH在6.5左右，明顯偏酸。不能用鹽酸調(diào)。雖然可以用氫氧化鈉顆粒調(diào)，但是有更方便的方法。十倍稀釋以后，PH自動(dòng)升高到所需要的值。不需要其它任何處理。這個(gè)可以先取少量試一試，配好之后再測(cè)一次PH8.0的PBS配方詳細(xì)1. NaCl 137mmol/LKCl 2.7mmol/LNa2HPO44.3mmol/L,KH2P

16、O41.4mmol/L2 .向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻? .滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至8.0,然后加入去離子水將溶液定容至1L。4 .高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述PBSBuffer中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1mM3aCl2和0.5mMMgClZ0.05mol/LPBS（磷酸緩沖液PhosphateBufferSolution,PBSR勺配制：甲液：0.05mol/LNa2HPO4溶液：稱取磷酸氫二鈉9.465g7.099g,加蒸儲(chǔ)水至1000ml;乙液：0.05mol/LKH2P04溶液：稱取磷酸二氫鉀,9.07g6.803g,加蒸儲(chǔ)水至1000mt將

17、甲乙液分裝在棕色瓶?jī)?nèi)，于4c冰箱中保存，用時(shí)甲、乙兩液各按不同比例混合，即可得所需pH的緩沖液,見(jiàn)下表：pH甲液ml乙液ml5.292.597.55.595.095.05.9110.090.06.2420.080.06.4730.070.06.6440.060.06.8150.050.06.9860.040.07.1770.030.07.3880.020.07.7390.010.08.0495.05.0你要配制pH=6.8的PB§可用甲、乙液各50ml混合即可。硼酸緩沖液（0.2mol/L硼酸鹽）P0.05mol/0.2mol/LP0.05mol/0.2mol/LHL硼砂(ml)硼酸

18、（ml）HL硼砂(ml)硼酸(ml)7.41.09.08.23.56.57.61.58.58.44.55.57.82.08.08.76.04.08.03.07.09.08.02.0硼砂NaBQNOHzO,分子量=381.43,0.05mol/L溶液=0.2mol/L硼砂含19.07g/L硼酸，分子量=61.84,0.2mol/L溶液含12.37g/L硼砂易失去結(jié)晶水，必須在帶塞得瓶中保存；硼砂溶液也可以用半中和的硼酸溶液代替鹽酸-氯化鉀緩沖液P0.1mol0.02mo加P0.1mol0.02mo加H/LHCl(ml)l/LKCl(ml)水至(ml)H/LHCl(ml)l/LKCl(ml)水至(

19、ml)1.194.562.701001.723.7638.101001.275.1012.451001.818.6840.601001.359.6820.151001.914.9842.501001.447.4026.301002.011.9044.051001.537.6431.201002.19.4645.03100129.9035.00127.5246.2510.600.200.02mol/LKCl溶液：溶7.455g氯化鉀于水中,稀釋至500ml苯二甲酸氫鉀-鹽酸緩沖液P0.1mol0.02mo力口P0.1mol0.02mo力口H/LHCll/L苯水H/LHCll/L苯水(ml)二甲酸至(ml)二甲酸至氫鉀(氫鉀(ml)m(ml)mii)246.6025.001314.8025.0010.0.0202239.6025.00139.9525.0010.0.0404233.0025.00136.0025.0010.0.06062.826.5025.001003.82.6525.00100320.4025.001.0000.02mol/L苯二甲酸氫鉀溶液：稱取在硫酸干燥器中干燥過(guò)24小時(shí)額苯二甲酸氫鉀20.44g溶于水中，稀釋至500ml磷酸二氫