血清蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電泳實驗報告

1、血清蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電泳實驗報告實驗名稱血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳及其定量實驗日期實驗地點XX實驗室合作者XXX指導老師XXX評分教師簽名批改日期一、實驗目的1.1. 學習醋酸纖維薄膜電泳的基本原理和操作方法；1.2. 了解電泳技術(shù)的一般原理；1.3. 掌握電泳分離血清蛋白質(zhì)及其定性定量的方法。二、實驗原理2.1. 血清中各種蛋白質(zhì)的等電點不同，一般都低于pH7.4。它們在pH8.6的緩沖液中均解離帶負電荷，在電場中向正極移動。由于血清中各種蛋白質(zhì)分子大小、形狀及所帶的電荷量不同，在醋酸纖維素薄膜上電泳的速度也不同。因此可以將它們分離為清蛋 白（Albumin）、a 1-球蛋白、a 2-球蛋白

2、、B -球蛋白、丫 -球蛋白5條區(qū)帶。2.2. 血清中不同蛋白質(zhì)的等電點、分子量及含量血清蛋白質(zhì)等電點分子量占總蛋白的清蛋白4.6469,0005772a 1 球蛋白5.06200,00025a 2 球蛋白5.06300,00049B 球蛋白5.1290,000150,0006.512丫 一球蛋白6.857.3156,000950,0001220緩沖液 pH=8.6, pl v pHo血清蛋白帶負電荷，在電場中向正極移動。預測血清蛋白電泳區(qū)帶圖血清蛋白依次分為清蛋白，球蛋白的 a 1、a 2、B、丫五個區(qū)帶2.3. 膜條經(jīng)過氨基黑10B染色后顯出清晰色帶；各色帶蛋白質(zhì)含量與染料結(jié)合 量基本成正

3、比；可將各色帶剪開，分別溶于堿性溶液中；用分光光度法計算各種蛋 白質(zhì)的百分數(shù)。三、材料與方法：3.1. 實驗材料：3.1.1. 實驗試劑：樣品：健康人血清（新鮮、無溶血）；巴比妥-巴比妥鈉緩沖液（pH8.6,離子強度0.06mol/L ）;3氨基黑10B染色液；漂洗液；洗脫液： 0.4mol/NaO H 溶液。3.1.2. 實驗器材：V-1100分光光度計（X 1）；恒溫水浴箱（X 1）；試管（X6）、試管架（X 1）；1000卩L加樣槍（X 1）、加樣槍架（X 1）；醋酸纖維薄膜（2cm*8cm厚度120卩m）:培養(yǎng)皿（X 5）;點樣器或載玻片（X 1）；平頭鑷 子（X 2）；剪刀（X 1）

4、；電泳槽（X 1）； ?直流穩(wěn)壓電泳儀（X 1）3.2. 實驗步驟1 準備與點樣：取2X 8cm的膜條；亞光面距一端1.5cm處取一點樣線；充分浸透在巴比妥緩沖液中；取出膜條，用濾紙吸去多余的緩沖液；點樣器下端粘上薄層血清；垂直點樣2. 電泳：放置膜條（點樣面向下，點樣端置于陰極）；膜條貼緊濾紙，拉直膜條；平衡五分鐘；通電（調(diào)節(jié)電壓 120v/電流，時間：4560 min）;關(guān)閉電源電泳槽解剖圖:3. 染色、漂洗：通電完畢；取出膜條；浸于染色液（氨基黑10B）中，5min； 取出膜條，浸于漂洗液；反復漂洗 2次，直至漂凈；濾紙吸干薄膜。4. 定量（洗脫比色法）（因?qū)嶒炇业仍颍醋觯┧?、結(jié)果與

5、討論:圖一染色后的膜條4.1. 結(jié)果分析本次實驗得到的圖譜只能夠清晰的看出清蛋白和丫 一球蛋白的區(qū)帶，其余無法區(qū)別。原因可能如下： 醋酸纖維薄膜質(zhì)量不足 薄膜過濕，樣品擴散迅速，導致樣品分離不成區(qū)帶。 點樣太少，區(qū)帶顯色不明顯。 電泳時間不足。 薄膜在緩沖液中浸泡的時間不足。 取出電泳后的薄膜過程中曾不慎將薄膜掉到地上。 染色時，因為現(xiàn)場混亂，可能導致醋酸纖維薄膜不是一張一張放入染色液的，在染色 固定前，薄膜與薄膜之間重疊，造成薄膜上還未固定的血清蛋白彼此粘連。4.2. 課后思考題1. 電泳時，點樣端置于電場的正極還是負極？為什么？答：點樣端置于電場的負極。因為人體血清的蛋白質(zhì)會因電槽中溶質(zhì)呈堿性而帶負電，要成功分離出各類各類蛋白質(zhì)，理應將點樣端置于電場的負極。2. 電泳后各區(qū)帶應明顯分開，如分離不清或不整齊，試分析其可能存在的原因。答：醋酸纖維薄膜質(zhì)量不足；薄膜過濕，樣品擴散迅速，導致樣品分離不成區(qū)帶;點樣太少，區(qū)帶顯色不明顯；染色時