HPLC法測(cè)定紫花地丁中槲皮素_芹菜素_木犀草素含量

1、中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)2011年第12卷第1期 48DrugStandardsofChina2011,Vol 12No 1229.4 奧山惠美.龍眼肉的抗焦慮活性物質(zhì)J.國(guó)外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊(cè),1998,(4):62.5 羅國(guó)平,孟會(huì)寧.龍眼肉中葡萄糖的含量測(cè)定J.藥品評(píng)價(jià),2006,3(6):440 442.6 GB/T18932 22 2005.蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量的測(cè)定方法液相色譜示差折光檢測(cè)法S.HPLC法測(cè)定紫花地丁中槲皮素、芹菜素、木犀草素含量孟繁姝1,2,劉權(quán)友,高東立,姚永順222(1.沈陽(yáng)藥科大學(xué),沈陽(yáng)110016;2.黑龍江省牡丹江市藥品檢驗(yàn)所,牡丹江157011)摘要

2、 目的:建立高效液相色譜法測(cè)定紫花地丁中槲皮素、芹菜素和木犀草素的含量測(cè)定方法。方法:采用HPLC法對(duì)紫花地丁中的槲皮素、芹菜素、木犀草素進(jìn)行含量測(cè)定。色譜條件為:C18柱(5 m,4 6mm 250mm),柱溫30 ,流動(dòng)相為乙腈 甲醇 0 2%磷酸水溶液梯度洗脫,流速0 8mL min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)350nm。結(jié)果:槲皮素、芹菜素和木犀草素色譜分離良好,濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系,線性范圍分別為槲皮素7 590 0mg L-1,r=0 9999(n=6);芹菜素7 5180 0mg L-1,r=0 9998(n=6),木犀草素2 555 0mg L-1,r=0 9999(n=6)。平均加樣

3、回收率分別為95 1%(n=9,RSD=1 0%)、95 7%(n=9,RSD=1 2%)、97 8%(n=9,RSD=0 7%)。結(jié)論:本方法測(cè)定了5批紫花地丁的槲皮素、芹菜素和木犀草素的含量,該方法分離度好、快速、簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好。關(guān)鍵詞:高效液相色譜法;紫花地丁;槲皮素;芹菜素;木犀草素中圖分類號(hào):R931 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1009-3656(2011)-1-48-2DeterminationofQuercetin,ApigeninandLuteolininViolayedoensisMakinobyRP HPLCMengFan shu,LiuQuan you,GaoDong l

4、i,YaoYong shunMudanjiangInstituteforDrugControlofHeilongjiangProvince,Mudanjiang157011)1,2222(1.ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016;2.Abstract Objective:ToestablishanHPLCmethodfordeterminationofQuercetin,ApigeninandLuteolininViolayedoensisMaki no.Methods:HPLCanalysiswasperformedonC18colu

5、mn(4.6mm 250mm,5 m)withthemethanolpotassiumdihydrogenphosphateasmobilephaseingradientmode,thecolumntemperaturewassetat30 ,theflowratewas0 8mL min-1andthede tectingwavelengthwasat350nm.Results:Thelinearresponserangesfrom7 5to90 0mg L-1ofquercetin(r=0 9999,n=6)andfrom7 5to180 0mg L-1ofapigenin(r=0 999

6、8,n=6)andfrom2 5to55 0mg L-1ofluteolin(r=0 9999,n=6);therecoveriesofquercetin,apigeninandluteolinwere95 1%(n=9,RSD=1 0%),95 7%(n=9,RSD=1 2%),97 8%(n=9,RSD=0 7%),respectively.Conclusion:All5samplesweredeterminedbyHPLC.Themethodisapracticalmethodindetermina tionofQuercetin,ApigeninandLuteolininViolaye

7、doensisMakino.KeyWords:HPLC;ViolayedoensisMakino;Quercetin;Apigenin;Luteolin紫花地丁為堇菜科植物紫花地丁violaphilippic assp.mundaW.Becker的干燥全草。多年生草本,春、夏、秋季均可采收,分布廣泛。紫花地丁性寒味微苦,有清熱解毒的功效。主治黃疸、痢疾、乳腺炎、目赤腫痛、咽炎、外敷治跌打損傷、癰腫、毒蛇咬傷11 實(shí)驗(yàn)部分1 1 儀器、試藥與樣品Agilent1100高效液相色譜儀;Agilent1100色譜工作站;紫外檢測(cè)器;UV 2550紫外分光光度計(jì);超聲波發(fā)生器;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;BS110型

8、電子分析天平;TG332A型微量分析天平;自動(dòng)三重純水蒸餾器。甲醇、乙腈為色譜純;水為三重蒸餾水;其他均為分析純。槲皮素、芹菜素、木犀草素對(duì)照品(TCM含有機(jī)酸、黃酮及其甙類、酚性成分、糖類、氨基酸、多肽及蛋白質(zhì)、皂甙、植物甾醇、鞣質(zhì)等多種有2效成分。,女,:DrugStandardsofChina2011,Vol 12No 1中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)2011年第12卷第1期 49中藥研究所)。1 2 色譜條件KromasilC18色譜柱(250mm 4 6mm,5 m);流動(dòng)相為乙腈 甲醇 0 2%磷酸水溶液;梯度洗脫;-1流速0 8mL min;檢測(cè)波長(zhǎng)350nm;柱溫30 。梯度:040min10

9、35 55;4060min12 35 53;6090min90 5 5。色譜圖見(jiàn)圖1。1 6 回收率試驗(yàn)精密量取已知含量的同一批紫花地丁提取液10mL9份,分別精密加入3種對(duì)照品溶液配制成高、中、低3個(gè)不同濃度的樣品各3份,按照供試品含量測(cè)定方法操作,結(jié)果槲皮素、芹菜素、木犀草素平均加樣回收率分別為95 1%(n=9,RSD=1 0%)、95 7%(n=9,RSD=1 2%)、97 8%(n=9,RSD=0 7%)。1 7 重現(xiàn)性試驗(yàn)精密量取同一批提取液6份,按照樣品含量測(cè)定方法操作,測(cè)定含量,計(jì)算RSD,槲皮素的RSD為0 3%,芹菜素的RSD為0 7%,木犀草素的RSD為0 4%。1 8

10、穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份供試品溶液,分別于0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣,測(cè)定峰面積,計(jì)算RSD,槲皮素的RSD為0 2%,芹菜素的RSD為1 5%,木犀草素的RSD為圖1 紫花地丁色譜圖1 5%。1 9 樣品測(cè)定精密量取提取液10mL,按供試品溶液制備方法操作,進(jìn)樣10 L。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。1 3 溶液制備1 3 1 對(duì)照品溶液 精密稱取槲皮素、芹菜素、木犀草素對(duì)照品各2 5mg,置25mL量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,即得三種對(duì)照品儲(chǔ)備液。1 3 2 供試品溶液 精密量取紫花地丁提取液10mL,加5%鹽酸溶液5mL,80 水浴回流1h,溶液減壓蒸干,殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?mL,用0 45 m

11、的微孔濾膜過(guò)濾,即得。1 3 3 陰性對(duì)照溶液 取缺提取液的樣品,同法制備空白對(duì)照溶液。1 4 線性關(guān)系考察分別精密吸取上述3種對(duì)照品儲(chǔ)備液,用甲醇配制成6個(gè)不同濃度的混合對(duì)照品溶液,分別進(jìn)樣10 L,測(cè)定峰面積。以槲皮素、芹菜素、木犀草素對(duì)照品的濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行回歸分析。線性范圍分別為槲皮素7 5-190 0mg L,r=0 9999(n=6);芹菜素7 5180 0mg L,r=0 9998(n=6),木犀草素2 5-155 0mg L,r=0 9999(n=6)。1 5 精密度試驗(yàn)取同一份混合對(duì)照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,以峰面積積分值計(jì)算RSD,槲皮素的RSD為0 4%,芹菜 -1表1 樣品含量結(jié)果(n=3)編號(hào)12345槲皮素/ g g-111 47 829 7-芹菜素素/ g g-136 829 730 610 0-木犀草素素/ g g-110 98 54 6- 在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍外。2 討論2 1 在檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇時(shí),根據(jù)待測(cè)成分的紫外掃描圖譜和文獻(xiàn)報(bào)道,考察了350nm、289