醫(yī)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測制度及要求

1、.為了合理規(guī)我院消毒滅菌效果、環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測工作， 提高監(jiān)測結(jié)果的準(zhǔn)確性、真實(shí)性、可比性，特作如下規(guī)定及要求：一、各科室（部門）對此項(xiàng)監(jiān)測工作，按規(guī)定的要求開展監(jiān)測項(xiàng)目，嚴(yán)格遵守規(guī)定的監(jiān)測時(shí)限， 真實(shí)規(guī)采樣， 完整填寫申請單。 按時(shí)（每月底前）做好報(bào)表工作。二、各科室（部門）對每月監(jiān)測結(jié)果要進(jìn)行效果評價(jià)并將資料妥善保管。對不合格項(xiàng)目要進(jìn)行原因分析并制定改進(jìn)措施，達(dá)到不斷持續(xù)性改進(jìn)的目的。三、各科室（部門）對此項(xiàng)監(jiān)測工作，要務(wù)真，對不合格項(xiàng)目應(yīng)如實(shí)上報(bào)。避免單純追求合格率， 而虛報(bào)、鬧假、走形式。經(jīng)核實(shí)將按獎罰條例進(jìn)行重獎、重罰。四、檢驗(yàn)科（細(xì)菌室）保證對全院各科室（部門），監(jiān)測所需合格采樣試管

2、、培養(yǎng)皿的供應(yīng)，并每月做無菌試驗(yàn)。按要求做到培養(yǎng)時(shí)限準(zhǔn)確、中和劑添加正確、報(bào)告結(jié)果規(guī)。五、檢驗(yàn)科（細(xì)菌室）對各科室（部門）送檢的采樣標(biāo)本有不合格，采樣不規(guī)，申請單填寫不符合要求的，有權(quán)拒絕出示報(bào)告結(jié)果。六、感染控制科對全院重點(diǎn)科室（部門）的消毒滅菌效果、環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測工作負(fù)責(zé)監(jiān)督、并開展隨機(jī)抽查采樣監(jiān)測。 各科室應(yīng)積極主動配合， 對在隨機(jī)抽查采樣中態(tài)度不端正、找借口、推諉等影響工作正常進(jìn)行的， 將按獎罰條例進(jìn)行扣罰。七、各科室（部門）監(jiān)測時(shí)間具體安排重點(diǎn)科室（部門）：、類科室及相關(guān)科室手術(shù)室、新生兒里間、監(jiān)測時(shí)間：每周一次（周二）。鏡室 1w、供應(yīng)室 3w、產(chǎn)一科 1w、產(chǎn)二科 1w、母嬰同室

3、 1w 、分娩室 2w、人流.室 1w 等。監(jiān)測時(shí)間：每月一次。（第 1w、 2w、 3w）、（ 3*、9* ）普通科室（部門）：、類科室及相關(guān)科室外科（換藥室） 3w、五官科 1w、兒一科 3w、兒二科 3w、兒三科 3w、新生兒科 3w、婦一科 2w、婦二科 2w、檢驗(yàn)科 3w、血庫 3w、醫(yī)療廢物儲存室 2w、放射科 2w、病理室 1w、外科 3w、注射室 2w、換藥室 2w、泳吧 1w、婦科門診1w、兒童樂園 3w、兒科門診治療室3w、手足口病診室 2w監(jiān)測時(shí)間：每月一次。（第 1w、 2w、 3w）、（ 3*、9* ）注：有 *號的月份加紫外線強(qiáng)度監(jiān)測。八、各科室（部門）監(jiān)測項(xiàng)目、監(jiān)

4、測時(shí)限、采樣方法、評價(jià)（合格）標(biāo)準(zhǔn)，詳見附件。附件： 1 空氣消毒效果的監(jiān)測 采樣時(shí)間：在消毒處理后、操作前進(jìn)行采樣。(1) 采樣方法1)布點(diǎn)方法；室面積 30Cm2，設(shè)、中、外對角線3 點(diǎn)，、外點(diǎn)布點(diǎn)部位距墻壁IM 處；室面積 >30M2 ，設(shè) 4 角及中央 5 點(diǎn)， 4 角的布點(diǎn)部位距墻壁lm 處。2)平板暴露法：將普通營養(yǎng)瓊脂平板(直徑為 9CM)放在室各采樣點(diǎn)處，采樣高度為距地面 1.5m，采樣時(shí)將平板蓋打開，扣放于平板旁，暴露5min ，蓋好立即送檢。3) 檢測方法：將送檢的平板置 37溫箱培養(yǎng) 48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，并分離致病菌。(2)結(jié)果判定類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù) 10cfu/m3

5、 ，未檢出致病菌為消毒合格；類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù) 200 cfu/m3 ，未檢出致病菌為消毒合格；類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù) 500 cfu/m3 ，未檢出致病菌為消毒合格。.注意事項(xiàng)：采樣前，關(guān)閉門、窗，在無人走動的情況下，靜止10 分鐘后進(jìn)行采樣。2 物品和環(huán)境表面消毒效果監(jiān)測采樣時(shí)間：在消毒處理后進(jìn)行采樣。(1) 采樣方法：用 5cm×5cmd 標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢問題表面，采樣面積 100cm2 ，連續(xù)采樣 4 個(gè)，用浸有含有相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子 1 支，在規(guī)格板橫豎往返均勻涂擦各 5 次，并隨之轉(zhuǎn)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入 10ml 含有相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試

6、管，立即送檢。門把手等不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣。(2) 結(jié)果判定、類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù) 5CFU/cm3 并未檢出致病菌為消毒合格。類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù) 10CFU/cm3 并未檢出致病菌為消毒合格。類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù) 15CFU/cm3 并未檢出致病菌為消毒合格。母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門氏 3 手的消毒效果監(jiān)測 采樣時(shí)間 :在消毒后立即采樣。（ 1）采樣方法1）手的采樣：被檢人五指并攏，用浸有含有相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2 次（一只手涂擦面積約30 cm3 ），并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭

7、子投入 10ml 含有相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管，立即送檢。2）結(jié)果判定、類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù) 5CFU/cm3 ，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單孢菌為消毒合格。類區(qū)域工作人員： 細(xì)菌總數(shù) 10CFU/cm3 并未檢出金黃色葡萄球菌、 大腸桿菌為消毒合格。類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)15CFU/cm3并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。4 壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測方法(1) 化學(xué)監(jiān)測法1)化學(xué)指示卡 (管 )監(jiān)測方法：將既能指示溫度，又能指示溫度持續(xù)時(shí)間的化學(xué)指

8、示管 (卡 )放人每一待滅菌的物品包中央，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，取出指示管(卡)，根據(jù)其顏色及性狀的改變判斷是否達(dá)到滅菌條件。2)化學(xué)指示膠帶監(jiān)測法：將化學(xué)指示膠帶粘貼于每一待滅菌物品包外，經(jīng)一個(gè)滅.菌周期后，觀察其顏色的改變，以指示是否經(jīng)過滅菌處理。3)結(jié)果判定：檢測時(shí)，所放置的指示管(卡)的性狀或顏色均變至規(guī)定的條件，可認(rèn)為該包滅菌合格。4)注意事項(xiàng)：監(jiān)測所用化學(xué)指示劑須經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)，并在有效期使用。(2)生物監(jiān)測法1)指示菌株：指示菌株為嗜熱脂肪桿菌芽胞(ATCC7953 或 SSIK31株 )，菌片含菌量為 5.0X105-5.0x106cfu/ 片，在 121±0.5條件下，

9、D 值為 13-1.9min ，殺滅時(shí)間 (KT 值)19min ，存活時(shí)間 (ST值)為 3.9min 。2)培養(yǎng)基：試驗(yàn)用培養(yǎng)基為溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基。3)檢測方法：將兩個(gè)嗜熱脂肪桿菌芽胞菌片分別裝人滅菌小紙袋，置于標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包中心部位。滅菌柜室 ,排氣口上方放置一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包(由 3 件平紋長袖手術(shù)衣， 4 塊小手術(shù)巾，2 塊中手術(shù)巾， 1 塊大手術(shù)中， 3O 塊 10cm x 10cm8 層紗布敷料包裹成25cmX 30cm x 30cm 大小 )。手提壓力蒸汽滅菌器用通氣貯物盒(22cm x 13cm x 6cm)代替標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包，盒盛滿中試管，指示菌片放于中心部位的兩只滅菌試管(試管

10、口用滅菌牛皮紙包封)，將貯物盒平放于手提壓力蒸汽滅菌器底部。經(jīng)一個(gè)滅菌周期后， 在無菌條件下， 取出標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包或通氣貯物盒中的指示菌片，投人溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基中，經(jīng)56培養(yǎng) 7 天(自含式生物指示物按說明書執(zhí)行)，觀察培養(yǎng)基顏色變化。檢測時(shí)設(shè)陰性對照和陽性對照。(4)結(jié)果判定：每個(gè)指示菌片接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基都不變色，判定為滅菌合格；指示菌片之一接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基，由紫色變?yōu)辄S色時(shí)，.則滅菌不合格。(5)注意事項(xiàng)：監(jiān)測所用菌片須經(jīng)衛(wèi)生部認(rèn)可，并在有效期使用。5 紫外線消毒效果的監(jiān)測(1 )紫外線燈管輻照度值的測定1)檢測方法：開啟紫外線燈 5min 后，將測定波長為254

11、nm 的紫外線輻照計(jì)探頭置于被檢紫外線燈下垂直距離1m 的中央處，待儀表穩(wěn)定后， 所示數(shù)據(jù)即為該紫外線燈管的輻照度值。2)結(jié)果判定：普通30w。直管型紫外線燈，新燈輻照強(qiáng)度90Uw/cm2 為合格；使用中紫外線燈輻照強(qiáng)度70Uw/cm2 對為合格；30W 高強(qiáng)度紫外線新燈的輻照強(qiáng)度 180 Uw/cm2 行為合格。3)注意事項(xiàng)：測定時(shí)電壓220v 土 5v，溫度 20 一 25 ，相對濕度 <60%，紫外線輻照計(jì)必須在計(jì)量部門檢定的有效期使用。6 醫(yī)療器械滅菌效果的監(jiān)測(1)采樣時(shí)間：在滅菌處理后，存放有效期采樣。常規(guī)監(jiān)測1)檢測方法：用無菌的方法將擬檢縫合針、針頭、手術(shù)刀片等小件醫(yī)療器

12、械各5支，分別投人5ml 的無茵洗脫液中；注射器則取5 副在 5ml 無菌肉湯中分別抽吸 5 次；手術(shù)鉗、鑷子等大的醫(yī)療器械在無菌操作下取2 份以上用沾有無菌洗脫液的棉拭子反復(fù)涂擦采樣， 并將棉拭子投入5ml 無菌洗脫液中。 將采樣管用力振打 80 次，用無菌吸管吸取lml 待檢樣品放于滅菌平皿， 加人已熔化的45-48 的營養(yǎng)瓊脂 15-18ml ，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置37溫箱培養(yǎng) 48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。.2)結(jié)果判定：平板上無菌生長為滅菌合格。3)注意事項(xiàng)：若消毒因子為化學(xué)消毒劑時(shí)，采樣液中應(yīng)加人相應(yīng)中和劑。7 消毒液的監(jiān)測(1) 常用消毒液有效成分測定1)有效氯含量測定配制 2mo

13、l/L 硫酸、 10%碘化鉀與 0.5%淀粉等溶液。配制并標(biāo)定0.1mol/L 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。對液體含氯消毒劑，吸取0.1ml 放容量瓶中，加蒸餾水至刻度，混勻。對固體含氯消毒劑，稱取1g(精確至 0.001g) ，置研缽研磨后以蒸餾水溶解，轉(zhuǎn)人100ml容量瓶中 (溶水中無殘?jiān)呖擅庋心?。稱量杯及研缽需用蒸餾水洗3 次，洗液全部轉(zhuǎn)人容量瓶。向 100ml 碘量瓶中加 2mol/L 硫酸 10ml ，10%碘化鉀溶液 10ml 和混勻的消毒劑稀釋液 10.0ml 。此時(shí)，溶液出現(xiàn)棕色。蓋上蓋并振搖混勻后加蒸餾水?dāng)?shù)滿于碘量瓶蓋緣，置暗處 5min. 打開蓋，讓蓋緣蒸餾水流人瓶。用硫代硫酸

14、鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 (裝于 25ml 滴定管中 )滴定游離碘；邊滴邊搖勻。待溶液呈淡黃色時(shí)加人0.5%淀粉溶液 10 滴，溶液立即變藍(lán)色。繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，記錄用去的硫代硫酸鈉溶液總量。重復(fù)測3 次，取 3 次平均值進(jìn)行以下計(jì)算。因 lmol/L 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 Iml 相當(dāng)于 0.03545g 有效氯，故可按下式計(jì)算有效氯含量：有效氯含量二C × V × 0.03545/W × 100%C 為硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)的量濃度(MOL/L)V 為滴定用去硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù) ;w 為碘量瓶中所含消毒劑原藥克數(shù)(液體消毒劑則為毫升數(shù) )、 .2)有效碘含量的測定配制

15、 0.5%淀粉溶液。備36%醋酸溶液。配制并標(biāo)定0.1moL/L 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。向 ltolnl 碘量瓶中精確加含碘消毒劑樣液50ml 及醋酸 1 滴。用 0.led/L 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定 (通常用 25ML 滴定管，若預(yù)計(jì)有效碘濃度 >5%時(shí)用 50ml 滴定管 )，邊滴邊搖勻。待溶液呈淡黃色時(shí)加人0.5%淀粉溶液 10 滴(溶液立即變藍(lán)色 )，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失， 記錄用去的硫代硫酸鈉溶液總量。重復(fù)測 3 次，取 3 次平均值進(jìn)行以下計(jì)算。由于 lmol/L 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液lml 相當(dāng)于 0.1269g 有效碘，故可按下式計(jì)算有效碘含量：有效碘含量 =C ×

16、 V × 0.1269/W × 100%”“”“Wc 為硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)的量濃度(mol/L)v 為滿定用去硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù) ;W 為碘量瓶中所含消毒劑原藥克數(shù)(液體消毒劑則為毫升數(shù) )3) 戊二醛 (C5h 8O2 。)含量的測定配制 6.5%三已醇胺溶液、 0.04%澳酚藍(lán)乙醇溶液與鹽酸羥胺中性溶液(17.5g 鹽酸羥胺加蒸餾水 75ml 溶解，并加異丙醇稀釋至500ml ，搖勻。加 0.04%澳酚藍(lán)乙醇溶液 15rnl ，用 6.5%三乙醇胺溶液滴定至溶液顯藍(lán)綠色)。配制并標(biāo)定0.25mol/L硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。取戊二醛消毒劑樣液10.0ml(非消毒濃度的濃

17、溶液需用50ml 容量瓶稀釋后取樣 )置 250ml 碘量瓶中，精確加6.5%三乙醇胺溶液20.0ml 與鹽酸羥胺中性溶液0.25ml，搖勻。靜量反應(yīng)lh 后，用 0.25mol/L 硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。待溶液顯藍(lán)綠色，記錄硫酸溶液用量。同時(shí)，以不含戊二醇的三乙醇胺、鹽酸羥胺中性溶液.重復(fù)上述操作 (空白對照 )。重復(fù)測 3 次，取 3 次的平均值進(jìn)行以下計(jì)算。由于 lmol/L 硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液Iml 相當(dāng)于0.1001g 戊二醛，因此可按下式計(jì)算成二醛含量：戊二醛含量 (w/v)=C × (v2-v1) × 0.1001/w × 100%c 為硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)的量濃

18、度(mol/L);V1 與 V2 分別為樣品與空白對照滴定中用去的硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液毫升數(shù);W 為戊二醛樣品毫升數(shù)。 4)過氧化氫 (H2O2) 濃度的測定配制 2mol/L 硫酸與 10%硫酸錳等溶液。另外配制井標(biāo)定0.02rnol/L 高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液。取 1.0ml 過氧化氫樣液，于 100ml 容量瓶中用蒸餾水稀釋至刻度，混勻。取過氧化氫稀釋液 10.0ml，置 100ml 碘量瓶中，加人 2mol/L 硫酸 20ml 與 10%硫酸錳 3 滴，搖勻。用 0.02mol/L 高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液 (裝于 25ml 滴定管中 )滴定至溶液呈粉紅色， 記錄高錳酸鉀溶液用量。 重復(fù)測 3 次，取 3

19、次平均值進(jìn)行以下計(jì)算。因 lmol/L 高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液 lml 相當(dāng)于 0.08505g 過氧化氫，故可按下式計(jì)算過氧化氫含量：過氧化氫濃度 (w/v)=C × V × 0.08505/w × 100%C 與 V 分別為高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液物質(zhì)的量濃度(MOL/L)與滿定中用去的毫升數(shù)w為碘量瓶中所含過氧化氫樣液毫升數(shù)J(5)過氧乙酸 (C2H4O3)濃度的測定配制以下溶液： 2mol/L 硫酸、 10%碘化鉀、 0.01mol/L 高錳酸鉀、 10%硫酸錳、 3%鋁酸銨與 0.5%淀粉。配制并標(biāo)定0.05mol/L 硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。.取 1.0ml 過氧乙酸樣

20、液，于100ml 容量瓶中用蒸餾水稀釋至8 無菌檢驗(yàn)(1) 無菌檢驗(yàn)前準(zhǔn)備1)洗脫液與培養(yǎng)基無菌性試驗(yàn)：無菌試驗(yàn)前3 天，于需一厭養(yǎng)培養(yǎng)基與霉菌培養(yǎng)基各接種 Iml 洗脫液，分別置30-35 與 20-25 培養(yǎng) 72h ，應(yīng)無菌生長。2)陽性對照管菌液制備： 在試驗(yàn)前一天取金黃色葡萄球菌(26003)的普通瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物，接種1 環(huán)至需一厭氧培養(yǎng)基，在30-35 培養(yǎng) 16-18h 備用。(2) 無菌操作：取縫合針、針頭、刀片等小件醫(yī)療器械5 件直接浸人 6 管需一厭氧培養(yǎng)管 (其中一管作陽性對照 )與 4 管霉菌培養(yǎng)管 C 培養(yǎng)基用量為 15ml/ 管。取 5 副注射器，在 5ml 洗

21、脫液中反復(fù)抽吸 5 次，洗下管細(xì)菌，混和后接種需一厭養(yǎng)菌培養(yǎng)管 (共 6 管，其中 1 管作陽性對照 )與霉菌培養(yǎng)管 (共 4 管)。接種量：lml注射器為 0.5ml ，2ml 注射器為 Iml， 5-10ml 注射器為 2ml ，20-50ml 注射器為5ml，培養(yǎng)基用量：接種量為2ml 以下為 15ml/ 管，接種量 5ml 為 40ml/ 管。手術(shù)鉗、鑷子等大件醫(yī)療器械取2 件用沾有無菌洗脫液的棉拭子反復(fù)涂抹采樣，將棉拭子投人 sml 無菌洗脫液中，將采樣液混勻，接種于需一厭氧培養(yǎng)管(共 6管，其中 1 管作陽性對照 )與霉菌培養(yǎng)基 (共 4 管)。接種量為 lml/ 管，培養(yǎng)基用量為

22、 15ml/ 管。(3) 培養(yǎng)：在待檢樣品的需一厭氧培養(yǎng)管中，接種預(yù)先準(zhǔn)備的金黃色葡萄球菌陽性對照管液 1：1000 稀釋 1ml ，將需一厭氧培養(yǎng)管以及陽性與陰性對照管均于30-35 培養(yǎng) 5 天，霉菌培養(yǎng)管與陰性對照管于20-25 培養(yǎng) 7 天，培養(yǎng)期間逐日檢查是否有菌生長， 如加人供試品后培養(yǎng)基出現(xiàn)混濁或沉淀，經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀上判斷時(shí)， 可取培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種人另一支相同的培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng).48-72h后，觀察是否再現(xiàn)混濁或在外面上有無菌落生長，并在轉(zhuǎn)種的同時(shí)，取培養(yǎng)液少量，涂片染色，用顯微鏡觀察是否有菌生長。.(4) 結(jié)果判定：陽性對照在24h 應(yīng)有菌生長，陰性對照在培養(yǎng)期間應(yīng)無

23、菌生長，如需一厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管均為澄清或更顯混濁但經(jīng)證明并非有菌生長，判為滅菌合格；如需一厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管中任何1 管顯混濁并證實(shí)有菌生長， 應(yīng)重新取樣，分別同法復(fù)試2 次，除陽性對照外，其他各管均不得有菌生長，否則判為滅菌不合格。( 5)注意事項(xiàng)1)送檢時(shí)間不得超過6h，若樣品保存于0-4 ，則不超過 24h。2)被采樣本表面積<100cm2取全部表面；被采樣本表面積 100Cm2 ，取100cm2 。3)若消毒因子為兒學(xué)消毒劑，采樣液中應(yīng)加人相應(yīng)中和劑。9 熱原檢查法：.(1)鱟試驗(yàn)本法系利用鱟試劑與細(xì)菌毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的機(jī)理，以判斷供試品中細(xì)菌毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。

24、毒素的量用毒素單位(EU)表示。細(xì)菌毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品 (以下簡稱 RSE)系自大腸桿菌提取精致得到的毒素。以細(xì)菌毒素國際標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)，經(jīng)過協(xié)作標(biāo)定，使其與國際標(biāo)準(zhǔn)品單位含義一致.RSE用于標(biāo)定、復(fù)核、仲裁鱟試劑靈敏度和標(biāo)定細(xì)菌毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(以下簡稱 CSE)。CSE系經(jīng) RSE為基準(zhǔn)進(jìn)行標(biāo)定，確定其重量的相當(dāng)效價(jià)。 每毫微克 (Ing)CSE的效價(jià)應(yīng)不小于2EU，不大于 50EU，并具備均一性和穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。CSE 用于試驗(yàn)中空試劑靈敏度復(fù)核、干擾試驗(yàn)及設(shè)置的陽性對照。.1)試驗(yàn)準(zhǔn)備：試驗(yàn)所用器皿，需經(jīng)處理，除去可能存在的外源性毒素，常用的方法是 250于烤至少 lh 或 180干烤至少

25、2h，也可用其他適宜的方法。試驗(yàn)所用器皿應(yīng)確證無吸附細(xì)菌毒素的作用。試驗(yàn)操作過程應(yīng)防止微生物的污染。2)鱟試劑靈敏度復(fù)核：根據(jù)嘗試劑靈敏度的標(biāo)示值()，將 RSE 或 CSE 用細(xì)菌毒素檢查用水 (與批號鱟試劑24h 不產(chǎn)生凝集反應(yīng)的滅菌注射用水，以下簡稱BET水 )溶解，在旋渦混合器上混合15min ，然后制備成 2.0、0.5A 和 0.25等4個(gè)濃度的毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液， 每稀釋一步均應(yīng)在旋渦混合器上混合30 秒鐘，按“檢查法”項(xiàng)下試驗(yàn)，每一濃度平行做 4 管，同時(shí)用 BET 水做 4 管陰性對照，如最大濃度 (2.0)4 管為陽性，最低濃度 (0.25)4 管均為陰性，陰性對照 4 管均為陰

26、性，按下式計(jì)算反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值即為鯊試劑靈敏度的測定值()。c=Lg-1( X/4)式中 X 為反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對數(shù)值(Lg)。反應(yīng)終點(diǎn)濃度是系列濃度遞減的毒素溶液中最后一個(gè)呈陽性結(jié)果的濃度。當(dāng)c 在 0.5-2.0 (包括 0.5和2.0)時(shí)，方可用于細(xì)菌毒素檢查，并以為該批空鱟劑的靈敏度。 每批新的鯊試劑在用于試驗(yàn)前都要進(jìn)行靈敏度的復(fù)核。鱟試劑靈敏度定義為在本檢查法規(guī)定的條件下能檢測出標(biāo)準(zhǔn)溶液或供試品溶液中的最低毒素濃度，用 EU/ml 表示。3)供試品干擾試驗(yàn)：按“鱟試劑靈敏度復(fù)核”項(xiàng)下試驗(yàn)，用BET水和未檢出毒素的供試品溶液或其不超過最大有效稀釋倍數(shù)(MVD)的稀釋液分別制成合C

27、SE2.0、0.5和0.25等4 種濃度的毒素溶液。 用 BET水和供試品溶液或稀釋液制成的每一濃度平行做4 管，另取 BET水和供試品溶液或稀釋液各做4 管陰性對照。如標(biāo)準(zhǔn)溶液最大濃度 (2.0)4 管均為陽性，最低濃度 (0.25)4 管均為陰性，兩種陰.性對照 8 管均為陰性時(shí)，按下式計(jì)算用 BET水制成的毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值 (ES)和用供試品溶液或稀釋液制成的毒素溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值 (ET)。ES =ig-1( Xs/4)ET二 ig-1( XT/4)式中 Xs XT 分別為用 BET 水和供試品溶液或稀釋液制成的毒素溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對數(shù)值 (Lg)

28、。當(dāng) ET在 0.5Es-2.0Es(包括 0.5Es和 2.0Es)時(shí)測認(rèn)為供武品在該濃度下不干擾試驗(yàn)，否則需進(jìn)行適當(dāng)處理后重復(fù)試驗(yàn)， 或使用更靈敏的鱟試劑， 對供試品進(jìn)行更大倍數(shù)稀釋，是排除干擾因素的簡單有效的方法。 每個(gè)品種要求至少對三個(gè)批號的供試品進(jìn)行干擾試驗(yàn)， 若鱟試劑的來源、 供試品的配方或生產(chǎn)工藝有變化時(shí)， 須重復(fù)進(jìn)行干擾試驗(yàn)。供試品的最大有效稀釋倍數(shù) (MVD)按下式計(jì)算：MVD 二 L/L 為供試品的細(xì)菌毒素限值，以EU/ml 表示，當(dāng)正文中的限值以EU/mg 或 EU/U表示時(shí)，應(yīng)乘以供試品溶液的濃度，再以所得值代人上式。4)檢查法：取裝有0.1ml 鱟試劑溶液的 10×75mm 試管或 0.1ml/ 支規(guī)格的鯊試劑原安瓿 6 支，其中 2 支加人 0.1ml 或 0.2ml 供試品溶液 (其稀釋倍數(shù)不得超過MVD)作為供試品管， 2 支分別加人 0.1mll 或 0.2ml 用 BET水將 CSE制成的20 則需進(jìn)行適當(dāng)處理