色譜柱的故障診斷與維護(hù)

1、色譜柱的故障診斷與維護(hù)色譜柱的故障診斷與維護(hù)液相色譜柱八方世紀(jì)科技有限公司Authoring Division Name File NameSecurity Notice (if required) HLC與與GC 色譜柱問題用戶調(diào)查色譜柱問題用戶調(diào)查 色譜柱問題色譜柱問題百分率百分率Back Pressure, Plugged Frits24%Poor Reproducibility16Sample Recovery14Loss of Resolution13Instability11Voids8.1Leaks, Fittings4.8pH Range2.0Low Plate Count2.

2、0Column Overload2.0Cost1.7Miscellaneous15介紹提綱介紹提綱I. 常見問題， 現(xiàn)象及排除方案- 基線漂移/噪音- 峰型- 壓力變化- 保留漂移II. 日常維護(hù)/ 良好的實踐- 在線裝置- 樣品制備- 操作的限制III. 再生/維修已損壞的色譜柱 -物理方法 -化學(xué)方法I. 常見問題常見問題 基線噪音基線噪音可能的原因：流動池臟流動池臟檢測器燈有問題檢測器燈有問題如果是周期性的，則起源于泵的脈沖如果是周期性的，則起源于泵的脈沖溫度對檢測器的影響溫度對檢測器的影響氣泡經(jīng)過檢測器氣泡經(jīng)過檢測器Time (min.)基線漂移基線漂移 梯度洗脫梯度洗脫 溫度不穩(wěn)定溫

3、度不穩(wěn)定 (示差檢測器）示差檢測器） 流動相中有污染物流動相中有污染物 柱中的流動相沒有平衡柱中的流動相沒有平衡 體系中有污染物流出體系中有污染物流出可能的原因：可能的原因：鬼鬼 峰峰 鬼峰鬼峰即使不樣也會出現(xiàn)的峰即使不樣也會出現(xiàn)的峰20% - 100% MeOH沒有進(jìn)樣沒有進(jìn)樣601530150371517問題問題1- 流動相臟流動相臟問題問題2- 樣品過量樣品過量(也可能是回收率太差也可能是回收率太差)峰峰 型型雙雙 峰峰柱柱 塌塌 陷陷正正 常常 峰峰 雙雙 峰峰柱中有死體積柱中有死體積 過濾片部分堵塞過濾片部分堵塞只有一個雙峰只有一個雙峰組分的共洗脫組分的共洗脫可能原因：樣品與溶劑不匹

4、配樣品與溶劑不匹配峰峰 型型所有的峰都展寬柱效降低柱效降低柱死體積柱死體積大進(jìn)樣量大進(jìn)樣量 / 質(zhì)量質(zhì)量高捻度流動相高捻度流動相部分峰展寬前次進(jìn)樣后流出的組分前次進(jìn)樣后流出的組分大分子量樣品大分子量樣品蛋白或聚合物蛋白或聚合物峰展寬樣品與流動相不匹配樣品與流動相不匹配峰峰 型型拖尾峰對稱性 1.2NormalTailingNormalTailing原因：部分峰拖尾二次保留效應(yīng)二次保留效應(yīng)殘留硅醇基的反應(yīng)殘留硅醇基的反應(yīng)小峰緊跟在大峰的后面流出小峰緊跟在大峰的后面流出柱頭有污染柱頭有污染金屬金屬所有峰拖尾額外的柱效應(yīng)額外的柱效應(yīng)柱損壞柱損壞不適當(dāng)?shù)臉悠妨坎贿m當(dāng)?shù)臉悠妨?溶劑溶劑峰峰 型型Norm

5、alFronting前伸峰不對稱性 強有機(jī)溶劑) 通常最有效l低 pH 流動相, 如 0.1% TFA or 0.01M H3PO4, 也是有效的l升高溫度（60-80）色譜柱修復(fù)和再生色譜柱修復(fù)和再生 - 化學(xué)變化化學(xué)變化-Il6M鹽酸胍、異硫氰酸胍、尿素等溶液可用于清除蛋白質(zhì)的沉積lXDB, 有機(jī)聚合物等填料可使用高pH 水溶液 /有機(jī)溶液，如： 0.01M NaOH 50% 異丙醇 /水溶液，硅膠基質(zhì)應(yīng)盡量減少接觸時間 (15-30 min).色譜柱的修復(fù)和再生色譜柱的修復(fù)和再生 - 化學(xué)變化化學(xué)變化 -IIExample: 4.6 mm ID x 15 cm Zorbax 300SB-

6、C18Flow rate: 1 mL / min; Temp: 80A: 0.1% TFA in water B: 0.1% TFA in acetonitrile100% A for 30 min.; 0-100% B over 30 min.; Hold 100% B for 30 min., Return to 100% A in 5 min.Repeat 3 times. 總總 結(jié)結(jié) 如果使用時加以注意，大部分的液相色譜柱的問題是可以預(yù)防的如果使用時加以注意，大部分的液相色譜柱的問題是可以預(yù)防的- 流動相必須是互溶的，無顆粒流動相必須是互溶的，無顆粒- 使用保護(hù)柱和在線過濾器，并定期更換使用保護(hù)柱和在線過濾器，并定期更換- 使用恰當(dāng)?shù)臉悠分苽浞椒ㄊ褂们‘?dāng)?shù)臉悠分苽浞椒? 使用恰當(dāng)?shù)纳V柱清洗程序使用恰當(dāng)?shù)纳V柱清洗程序- 不同類型的色譜柱，請選擇不同的操作條件不同類型的色譜柱，請選擇不同的操作條件 (如：如： SB: pH 1-6