一氧化氮在大鼠單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后對側(cè)睪丸早期損傷中的作用

1、一氧化氮在大鼠單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后對側(cè)睪丸早期損傷中的作用    【摘要】  目的:了解單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)后對側(cè)睪丸早期的病理改變及組織中一氧化氮（NO）含量的變化，闡明NO與對側(cè)睪丸早期損傷之間的關(guān)系。方法:將56只青春期前SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組和扭轉(zhuǎn)組，每組28只。假手術(shù)組將左側(cè)陰囊打開分離暴露睪丸后，不予扭轉(zhuǎn)，即將睪丸再固定于陰囊壁上，并縫合陰囊。扭轉(zhuǎn)組則依Turner法建立左側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)模型，均于扭轉(zhuǎn)4 h后復(fù)位。兩組分別于復(fù)位后1 h、4 h、24 h、1周各處死大鼠7只，取右側(cè)睪丸行一氧化氮合酶（NOS）活性、NO含量、丙二醛（MDA）含量

2、檢測及病理評分。結(jié)果:與假手術(shù)組比較，扭轉(zhuǎn)組對側(cè)睪丸的MDA含量、NO含量、NOS活性、病理評分等均有不同程度升高，且生精細(xì)胞層數(shù)結(jié)合精細(xì)小管直徑所示的預(yù)后情況亦較差。結(jié)論:單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)后對側(cè)睪丸早期即可出現(xiàn)繼發(fā)性損傷，過量NO在單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后對側(cè)睪丸早期損傷中起主導(dǎo)作用。 【關(guān)鍵詞】  一氧化氮 一側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn) 對側(cè)睪丸損傷 機(jī)制    Abstract:  Objective: To investigate the biochemical and histological changes in contralateral testes o

3、f rats with unilateral testicular torsion and elucidate the effects of nitric oxide (NO) in early mechanism of contralateral testis injury. Methods:56 prepubertal Sprague-Dawley rats were randomly divided into 2 groups, 28 rats in each group. Rats in group 1 underwent a sham operation of the left te

4、stes under general anaesthesia. Rats in Group 2 underwent a similar operation but the left testes was rotated 720 °clockwise for 4 h, maintained by fixing the testes to the scrotum, then detorsion was performed. All the right(untwisted) testes were removed from rats at 1 hour, 4 hour, 24 hour,

5、1 week intervals after surgery, seven rats were taken from each group each time. Then the biochemical parameters such as malondialdehyde (MDA), nitric oxide (NO), nitric oxide synthase (NOS) activity were evaluated; histology and seminiferous tubule diameter were assessed. Results:Compared with Grou

6、p 1 (the sham operation group), the biochemical parameters and histological grades which were used to show the prognoses of the testicular function in group 2(the torsion/detorsion group) were increased with different levels, and associated with the decreased mean seminiferous tubule diameter, there

7、 were a worse prognoses in group 2. Conclusion: These results suggest the injury of contralateral testes may occur in early time after unilateral testicular torsion/detorsion, and the profuse tissue NO concentration may play a significant role in the contralateral testis.    Key words

8、:   NO; unilateral testicular torsion; contralateral testis injury; mechanism    睪丸扭轉(zhuǎn)，即精索扭轉(zhuǎn)，可引發(fā)精索內(nèi)營養(yǎng)血管箝閉，除致同側(cè)睪丸急性缺血損傷外1，還可能致對側(cè)睪丸不同程度的受損2。據(jù)Skoglund統(tǒng)計，該病主要集中于青春期前發(fā)病，平均發(fā)病年齡為14.9歲3。本研究擬通過動物實(shí)驗(yàn)證明單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)后對側(cè)睪丸早期是否可出現(xiàn)損傷，并試圖闡明過量NO在對側(cè)睪丸早期損傷中的作用。    1  材料和方法 

9、0;  1.1  動物分組  選取出生約2830 d（青春期前）的健康雄性SD大鼠56只，體重150200 g，隨機(jī)分為假手術(shù)組、安慰劑組，每組28只。    1.2  動物模型建立  所有大鼠均在術(shù)前以25%烏拉坦行腹腔注射全麻。假手術(shù)組將左側(cè)陰囊打開，分離暴露左側(cè)睪丸后即予固定縫合。扭轉(zhuǎn)組依Turner法建立左側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)模型4:左下腹小切口，游離左側(cè)睪丸，切斷睪丸引帶，分離周圍組織至附睪頭。睪丸順時針扭轉(zhuǎn)720°，固定扭轉(zhuǎn)側(cè)睪丸防止自然復(fù)位，維持4 h后原切口打開復(fù)位扭轉(zhuǎn)睪丸,關(guān)閉切口。 &

10、#160;  1.3  標(biāo)本制備  各組大鼠分別于術(shù)后1 h、4 h、24 h、1周時快速脫頸法處死7只，采集未扭轉(zhuǎn)側(cè)睪丸標(biāo)本，將所有睪丸標(biāo)本沿中軸切開分為兩部分，一部分睪丸用于制備組織勻漿，另一部分睪丸迅速置于10%的中性福爾馬林中待制作石蠟切片常規(guī)HE染色。    1.4  檢測方法    1.4.1 生化指標(biāo)檢測：按試劑盒要求制備組織勻漿；以硝酸還原酶法測定NO含量，化學(xué)比色法測定丙二醛（MDA）含量與NOS活性。均嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。    1.4.2

11、  睪丸組織病理學(xué)檢查：置于光鏡下鏡檢，觀察睪丸曲細(xì)精管結(jié)構(gòu)，計數(shù)生精上皮層數(shù)，測量平均曲細(xì)精管直徑（MSTD），對睪丸組織結(jié)構(gòu)依Cosentino法5評分，詳見圖14。    1.5  統(tǒng)計學(xué)處理方法  用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，相關(guān)性用Pearson法檢驗(yàn)，多組比較用單因素方差分析，組間兩兩比較方差齊性用LSD檢驗(yàn)，方差不齊性用Dunnett T3檢驗(yàn)。    2  結(jié)果    扭轉(zhuǎn)組中NO含量與病理評分呈正相關(guān)（P<0.05），NO含量與NOS

12、活性間無明顯相關(guān)(P>0.05)，MDA與病理評分間無明顯相關(guān)(P>0.05)。    相對于假手術(shù)組，扭轉(zhuǎn)組MDA含量、NO含量、NOS活性、病理評分等均在術(shù)后有明顯升高。其中，MDA含量于術(shù)后4 h起增加，NOS活性、NO含量于術(shù)后1 h起增加，病理評分于術(shù)后4 h起增加（均P<0.05），詳見表1。    按大鼠生長周期，早期生精上皮層計數(shù)及MSTD無明顯統(tǒng)計學(xué)意義，故取1周時進(jìn)行比較。結(jié)果示術(shù)后1周時，假手術(shù)組生精上皮層計數(shù)及MSTD分別為(3.41±0.45)和(202.61±22.64

13、)，扭轉(zhuǎn)組為(1.97±0.75)和(137.22±28.05)，兩組同類項(xiàng)相比差異有顯著性（均P      3  討論    當(dāng)前關(guān)于單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后是否可致對側(cè)睪丸損傷尚存在爭論，部分學(xué)者認(rèn)為早期對側(cè)睪丸無損傷6，多數(shù)學(xué)者則認(rèn)為對側(cè)睪丸早期即可出現(xiàn)病理性改變7-10。本實(shí)驗(yàn)扭轉(zhuǎn)組中，MDA作為細(xì)胞膜脂質(zhì)受氧自由基攻擊后的產(chǎn)物自復(fù)位后4 h起升高，提示睪丸組織存在過氧化損傷；病理評分則在復(fù)位后24 h起升高，提示存在光鏡下可見的生殖細(xì)胞損傷；復(fù)位后1周時扭轉(zhuǎn)組的生精上皮層計數(shù)與MSTD明顯降

14、低，提示生精功能預(yù)后不良。結(jié)合上述現(xiàn)象，我們認(rèn)為單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后可致對側(cè)睪丸早期出現(xiàn)損傷。    單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后對側(cè)睪丸早期損傷機(jī)制復(fù)雜，爭議頗多。近年來多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，對側(cè)睪丸損傷是由于扭轉(zhuǎn)側(cè)睪丸復(fù)位后再灌注損傷引起的，再灌注時生成的氧自由基、由NOS激活合成的NO均可直接或間接引起對側(cè)睪丸組織損傷11。本實(shí)驗(yàn)中，MDA濃度高低可間接反映氧自由基攻擊睪丸組織（即脂質(zhì)過氧化反應(yīng)）的強(qiáng)度，但其與直接反應(yīng)睪丸損害的病理評分相關(guān)性并不顯著；而NO含量則與病理評分呈正相關(guān)，提示NO濃度越高，組織損傷越大；表明單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后對側(cè)睪丸早期損傷中，相比于氧自由基，過量N

15、O的損傷作用占了主導(dǎo)地位。結(jié)合研究資料12，我們對NO的損傷作用進(jìn)行總結(jié)：當(dāng)單側(cè)睪丸扭轉(zhuǎn)復(fù)位后，一方面扭轉(zhuǎn)側(cè)生成過量的NO與氧自由基結(jié)合形成更具毒性的ONOO-，導(dǎo)致對側(cè)睪丸組織的損傷;另一方面通過NO的促炎癥遞質(zhì)聚集、過度擴(kuò)張血管、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等作用于對側(cè)睪丸組織；同時，上述損傷可以激活更多的NOS致NO大量合成，形成惡性循環(huán)，造成更大的損傷。    此外，我們發(fā)現(xiàn)在24 h1周時扭轉(zhuǎn)組的NO值繼續(xù)上升，而合成NO的NOS卻沒有相應(yīng)增加；統(tǒng)計學(xué)檢驗(yàn)示無明顯相關(guān)，估計24 h1周時增加的NO可能是由對側(cè)睪丸通過局部血運(yùn)轉(zhuǎn)移而來。【參考文獻(xiàn)】  1 姜濤,

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