龐霖畢業(yè)論文

1、川麥冬多糖對糖尿病小鼠血糖影響的研究摘要： 目的：觀察川麥冬多糖對血糖、體重的影響,為臨床實驗提供實驗依據(jù)。方法：用四氧嘧啶灌服正常小白鼠，建立高血糖小鼠模型。選取建模成功的小鼠，隨機分成4組，分別用蒸餾水、優(yōu)降糖10mg/Kg、麥冬多糖（200和 400mg/Kg）灌胃14d，觀測川麥冬多糖對糖尿病小鼠血糖、體重的影響。結(jié)果： 麥冬多糖(200和400mg/kg)能夠降低糖尿病小鼠的血糖值，并且能顯著減緩小鼠的體重的降低。 結(jié)論：川麥冬可用于糖尿病的輔助治療，在臨床上有一定的應(yīng)用價值。關(guān)鍵詞：川麥冬多糖；降血糖；體重；高血糖Ophiopogon japonicus polysaccharid

2、es on blood glucose of diabetic miceAbstract Objective: Chachuan polysaccharides on blood sugar, weight, providing experimental evidence for the clinical trial. Methods: Normal mice fed with alloxan, to establish a mouse model of high blood sugar. the successful model mice were randomly divided into

3、 4 groups, and during14d each with group was raised with distilled water, glibenclamide 10mg/kg, polysaccharides (200 and 400mg/kg) ,respectively.To observe the Ophiopogon japonicus polysaccharide have influence on of diabetic mice blood glucose levels and weight.Results: polysaccharides (200,400mg/

4、kg) can reduce blood glucose levels in diabetic mice and significantly slow the reduction of body weight in mice. Conclusion: Ophiopogon japonicus polysaccharides can be used for the treatment of diabetic, there should be some clinical value. Key words ：Ophiopogon japonicus polysaccharide,hypoglycem

5、ic,weight,high blood sugar目錄第1章 緒論11.1麥冬植物概述1植物形態(tài)1生長特性1川麥冬的采收與加工21.2麥冬的應(yīng)用現(xiàn)狀21.3研究現(xiàn)狀及存在問題3抗心肌缺血作用3抗血栓形成作用4免疫活性4降血糖5其他作用51.4研究的目的及意義5第2章 材料和方法62.1 實驗材料62.2實驗方法6 標(biāo)記6 糖尿病小鼠模型的建立：7試驗小鼠的分組及處理7統(tǒng)計學(xué)處理7第3章 結(jié)果與討論83.1結(jié)果8四氧嘧啶制備小鼠糖尿病不同給藥方式比較8川麥冬多糖對糖尿病小鼠血糖的影響比較9川麥冬多糖對糖尿病小鼠體重的影響比較93.2 討論11糖尿病模型的建立11川麥冬多糖對四氧嘧啶所致小鼠糖尿

6、病血糖的影響11結(jié) 論15致謝16參考文獻17第1章 緒論1.1麥冬植物概述麥冬，英文名Ophiopogon japonicus，又名沿階草、書帶草、麥門冬，為百合科沿階草屬多年生常綠草本植物，具有養(yǎng)陰生津、潤肺清心的功效，主治肺燥干咳，津傷口渴等癥1，為我國傳統(tǒng)著名的常用地道藥材，始載于神農(nóng)本草經(jīng)，麥冬為中華人民共和國藥典收載的著名優(yōu)質(zhì)地道藥材，以塊根入藥。須根較粗壯，根的頂端或中部常膨大成為紡錘狀肉質(zhì)小塊，麥冬的草根有須，像麥，它的葉似韭菜葉，冬天并不凋枯，故名麥冬。植物形態(tài)百合科多年生草本，成叢生長，高30厘米左右。葉基生成叢, 細長條形, 長 15 30cm, 寬 24mm, 兩面光滑

7、無毛,暗綠色，形如韭菜。花葶從葉叢中生出, 短于葉, 長 712cm; 總狀花序頂生, 長 2 4cm, 具 8 10朵花, 常 13 朵聚生, 花被 6 片, 花小，淡紫色或白色, 長約 5mm, 稍下垂; 雄蕊 6 個; 子房半下位, 花柱長約4mm?；ㄆ?8月。果為漿果，圓球形，成熟后為深綠色或黑藍色。根莖短，有多數(shù)須根，在部分須根的中部或尖端常膨大成紡錘形的肉質(zhì)塊根，即藥用的麥冬。本品呈紡錘形，兩端略尖，長1.53cm，直徑0.30.6cm。表面黃白色或淡黃白，有細縱紋。質(zhì)柔韌，斷面黃白色，半透明，中柱細小。氣微香，味甘、微苦。生長特性喜溫暖和濕潤氣候，四川、浙江兩省麥冬主產(chǎn)區(qū)年平均氣

8、溫都在1617之間，年降雨量在1000毫米以上。稍耐寒，冬季-10的低溫植株不會受凍害，但生長發(fā)育受到抑制，影響塊根生長，在常年氣溫較低的山區(qū)或華北地區(qū)，雖亦能生長良好，但塊根較小而少。宜稍蔭蔽，在強烈陽光下，葉片發(fā)黃，對生長發(fā)育不利。但過于蔭蔽，易引起地上部分徒長，對生長發(fā)育也不利。干旱和澇洼積水對麥冬生長發(fā)育都有顯著的不良影響。宜土質(zhì)疏松、肥沃、排水良好的壤上和沙質(zhì)壤土，過沙和過黏的土壤，均不適于栽培麥冬。忌連作3年及三年以上，需隔34年才能再種。川麥冬的采收與加工麥冬于栽后翌年的 4 月上中旬收獲。 全株挖出, 抖去泥沙, 摘下塊根, 放框內(nèi)洗凈泥土。 加工方法有曬干和炕干 2種。 曬干

9、: 將洗凈的麥冬立即放在曬席或曬場上, 曬至 67成干后, 堆集回潤發(fā)汗, 經(jīng) 12d 后攤開再曬, 曬至足干,除去須根、雜質(zhì)即可。烘干: 將洗凈的麥冬按大小分開, 放至炕上, 用4050的文火烘 15 20h, 取出放幾天, 再烘至全干,除去雜質(zhì)。功能主治 養(yǎng)陰生津，潤肺清心。用于肺燥干咳，陰虛癆嗽，喉痹咽痛，津傷口渴，內(nèi)熱消渴，心煩失眠，腸燥便秘。1.2麥冬的應(yīng)用現(xiàn)狀（一）地理標(biāo)志的保護，國家質(zhì)檢總局依據(jù)地理標(biāo)志產(chǎn)品保護規(guī)定等相關(guān)文件, 先后于2006 年5 月24 日、 2008 年 5 月 7 日, 分別宣布對涪城麥冬、 襄麥冬實施地理標(biāo)志產(chǎn)品保護，涪城麥、 冬襄麥冬分別成了全國第21

10、9、 432 個國家地理標(biāo)志產(chǎn)品，從此麥冬成為一項國際公認(rèn)的知識產(chǎn)權(quán)而受到保護。2（二）產(chǎn)品麥冬在經(jīng)濟中的價值，麥冬已有1200年栽培歷史，也是我國出口物資，遠銷世界各國。商品主要產(chǎn)于四川、浙江，產(chǎn)量占到全國的50。近幾年來，麥冬年需求量約1000萬kg，而實際產(chǎn)量還不到1萬噸，可見市場缺口很大。另外，麥冬的價格也一直處在一個較為理想的水平,一般情況下,平均價格在100元/kg,比種植糧食作物高20多倍,使得麥冬成為一種高產(chǎn)、高效的經(jīng)濟作物,發(fā)展麥冬已成為當(dāng)?shù)剞r(nóng)民致富的一條新途徑。（三）麥冬在食品工業(yè)中的應(yīng)用及開發(fā)現(xiàn)狀。有關(guān)麥冬的安全性，國家衛(wèi)生部已于1996年第46號令公布批準(zhǔn)麥冬為可用于保

11、健食品的物品，說明麥冬在保健食品上的前景很廣。麥冬果實中鈣、鐵、鎂、錳、鋅、鈉、鉀等含量極為豐富,其中鈣是人體最需要的元素之一,它對肌肉應(yīng)激、神經(jīng)沖動傳遞等生理過程起著重要的作用,攝入量不足可導(dǎo)致血鈣降低,會引發(fā)一系列的生理反應(yīng)。麥冬果實富含多種營養(yǎng)元素,對于滿足生長發(fā)育,防治貧血非常有益,尤其是鈣含量高,可開發(fā)出極具潛力的天然補鈣功能食品。且麥冬中K含量遠高于Na含量,這對高血壓、糖尿病患者是一種理想的保健食品。（四）麥冬在制藥工業(yè)中的應(yīng)用及開發(fā)現(xiàn)狀。首載于神農(nóng)本草經(jīng)，為我國常用中藥材，廣泛用于中醫(yī)臨床，89種中成藥及保健食品原料。廣大醫(yī)藥工作者就麥冬應(yīng)用于制藥方面做了大量的研究工做，其中作

12、為一種治療糖尿病的新藥有著很多的研究報道，有待于進一步開發(fā)和利用。（五）麥冬在飼料工業(yè)中的應(yīng)用。麥冬不但是一種藥用植物，同時由于麥冬肉質(zhì)豐厚，富含淀粉及糖分，也非常適合作為飼料加工原料及飼料添加劑?，F(xiàn)在有不少文獻報道：在動物飼料中添加麥冬等中藥成分可以快速育肥畜禽；在動物復(fù)合飼料里添加麥冬成分還可以有效防治畜禽哮喘、增強動物機體的免疫力、抵抗流行性疾病3。近年來，隨著世界人口的老齡化，導(dǎo)致糖尿病、腦血栓等疾病發(fā)病年齡提前，麥冬因其含有多種生物功能性物質(zhì)在治療這些病癥方面有良好的功效，從而引起國內(nèi)外醫(yī)藥工作者的一致好評。麥冬不僅可以入藥，還可作為保健食品的理想來源。麥冬作為新型食品、藥源將越來越

13、受到人們的關(guān)注。1.3研究現(xiàn)狀及存在問題現(xiàn)代研究證明，麥冬含多種甾體皂苷、-谷甾醇、豆甾醇等。麥冬煎劑能顯著提高實驗動物耐缺氧能力，增加冠狀動脈血流量，對心肌缺血有明顯保護作用，并能抗心律失常及改善心肌收縮力；還能協(xié)調(diào)胰島素功能，降低血糖，促使胰島細胞恢復(fù)正常。對白色葡萄球菌、大腸桿菌和傷寒桿菌有較強的抑制作用。有一定的鎮(zhèn)靜作用。能提高機體的免疫功能。目前，對麥冬主要藥理作用及其有效部位的研究 ,現(xiàn)已取得階段性成果。但對于麥冬多糖降血糖的作用機理處于實驗研究階段，仍有待進一步探討?？剐募∪毖饔矛F(xiàn)代研究顯示麥冬多糖可以抗心肌缺血，增加心肌營養(yǎng)血流量，使缺血氧的心肌細胞較快獲得恢復(fù)與保護，減少心

14、肌細胞的受損。異丙腎上腺素誘導(dǎo)大鼠心肌壞死實驗結(jié)果表明,麥冬多糖抗心肌缺血的活性部位為分子量10000以下的多糖。進一步研究表明,麥冬活性多糖可拮抗垂體后葉素引起的S - T段抬高,可使結(jié)扎大鼠冠脈后升高的S - T段明顯降低,同時降低動物血清中CK和LDH 含量升高,提示可保護心肌細胞，增加細胞的抗缺血抗缺氧能力，提高膜的穩(wěn)定性，防止心肌進一步的壞死，而且麥冬多糖對心肌缺血造成的SOD降低和MDA增加有一定的抑制作用。由此可見,麥冬活性多糖可保護心肌細胞,同時具有抑制心肌缺血造成的自由基生成增加和清除氧自由基的作用。其機制可能涉及冠脈擴張和冠脈流量的增加4?？寡ㄐ纬勺饔糜捎谘ㄐ纬捎谘軆?nèi)

15、皮細胞（簡稱VEC）損傷密切相關(guān)，因此為了進一步探討麥冬保護VEC的分子機制，做如下實驗，取人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC) ,用內(nèi)毒素造成凋亡細胞模型,研究麥冬藥物血清抗其凋亡的保護作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn)，麥冬煎劑以人臨床用量 ×動物等效劑量比值 ×血清稀釋度為參考濃度制備的含藥血清可明顯保護人臍靜脈內(nèi)皮細胞( HUVEC)，減少內(nèi)毒素對其的損傷，而且以麥冬藥物作用血清后，HUVEC活細胞明顯增多，死亡細胞與凋亡細胞數(shù)目明顯減少，并降低其MDA水平并增加SOD含量。其作用機理與減少自由基，增加超氧化物歧化酶有關(guān)。5血管內(nèi)皮細胞的損傷,促進血栓形成,加重以“瘀血”為主要病機的疾病。麥

16、冬能滋補陰液，抗HUVEC凋零，并且通過抗氧化作用、抑制鈣離子跨膜流動,對血管內(nèi)皮細胞的保護作用,防止“血瘀”證的發(fā)生，進而有效的防止血栓病的發(fā)生。免疫活性多糖作為一種生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑(BRMS),對免疫系統(tǒng)有重要的調(diào)節(jié)作用,主要表現(xiàn)為免疫增強和刺激作用。國內(nèi)外大量的研究表明,多糖對體液免疫有作用。研究山麥冬多糖對免疫低下小鼠的保護作用，采用小白鼠60Co-射線全身照射和注射環(huán)磷酰胺,形成免疫損傷模型,觀察山麥冬多糖對模型小鼠的免疫活性的影響.結(jié)果表明，與模型小鼠相比較,山麥冬多糖高劑量組(1600mg/kg)和低劑量組(400mg/kg)對60Co-全身照射和環(huán)磷酰胺造成的小鼠免疫器官損傷有一

17、定的保護或者恢復(fù)作用,能顯著增強免疫低下小鼠的胸腺和脾臟重量,還能在一定程度上升高注射環(huán)磷酰胺小鼠外周血的白細胞數(shù)，麥冬多糖可能具有促使T 淋巴細胞和B淋巴細胞增殖的作用。6另外，小鼠體內(nèi)實驗表明,山麥冬多糖還對小鼠原發(fā)性肝癌實體瘤有一定的抑制作用。 此研究顯示山麥冬多糖作為一種低毒多效的免疫增強劑,在臨床上應(yīng)有一定的應(yīng)用價值。降血糖在研究麥冬多糖對正常和試驗性糖尿病小鼠血糖的影響中發(fā)現(xiàn) ,麥冬多糖為75 mg/ kg、150mg/ kg 和300mg/ kg 的劑量灌胃對蔗糖、鏈脲霉素誘發(fā)高血糖引起的小鼠高血糖均有抑制作用, 其對正常小鼠血糖無明顯影響，但能推遲大鼠口服蔗糖后血糖升高時間，能

18、降低自發(fā)性高血糖及升高血清胰島素，并且能降低鏈脲霉素誘發(fā)高血糖大鼠的血糖及糖化血紅蛋白7。 其他作用麥冬具有多種藥理作用,有很高的藥用和保健價值,研究表明，麥冬還具有多種藥理活性,如平喘、抗過敏、耐缺氧、抗衰老、保肝、對胃腸道等作用8-9。然而，其藥理作用是否僅限于上述幾個方面，還有待于我們進行更深入細致的研究。綜上所述，麥冬中的多糖成分具有多種生物活性，具有很高的應(yīng)用價值。麥冬作為主要組成藥物，廣泛應(yīng)用于心腦血管，免疫調(diào)節(jié)和腫瘤治療及糖尿病等方面已經(jīng)取得了很大的進展。麥冬不但作為單味藥對疾病的治療取得顯著成效,而且作為主藥與其它中藥組成復(fù)方藥對疾病治療也取得了一定的發(fā)展。而作為中藥對疾病起作

19、用的具體成分多糖的研究也倍受廣大科研工作者的關(guān)注。隨著對麥冬及其主要有效成分多糖的深入研究，麥冬不僅在中醫(yī)治療，而且在細胞分子水平中應(yīng)用前景更加光明。 1.4研究的目的及意義近年來，有文獻報道單味麥冬全草可以治療糖尿病10，麥冬的水提取物和正丁醇提取物可降低正常及糖尿病家兔的血糖11，這引起國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界的重視，紛紛轉(zhuǎn)向中醫(yī)藥麥冬在糖尿病治療中的作用, 希望從中能找到有效的解決方法。本實驗通過四氧嘧啶制備小鼠糖尿病模型，進一步探討川麥冬多糖對糖尿病小鼠血糖、體重的影響，為臨床實驗提供實驗依據(jù)。第2章 材料和方法2.1 實驗材料實驗動物 ：NIH小鼠, 雌雄兼用, 雌鼠未孕, 體質(zhì)量2224g ,

20、由四川大學(xué)醫(yī)學(xué)院試驗動物場提供。主要儀器與試劑 ： 眼科剪、鑷子、低溫冰箱、移液器及吸頭、電子天平、手套、5ml及10ml離心管、1ml注射器、灌胃針、標(biāo)記筆、Tips等。優(yōu)降糖片, 天津太平洋生制藥有限公司,批號040502。四氧嘧啶( Alloxan) , 美國 Sigma 化學(xué)公司產(chǎn)品，批號068K1131。強生穩(wěn)步型ONETOUCH SureStep 血糖試紙及測試儀 (美國強生公司)麥冬多糖 選取四川綿陽三臺麥冬塊莖1kg，將麥冬放于瓷盤中60°C烘干至恒重。 然后將粉碎好后的麥冬盛于1000ml圓底燒瓶中，加入6倍量的95%乙醇，90°C的水浴鍋里回流提取90m

21、in，連續(xù)3次，醇提后殘渣揮干乙醇, 殘渣用8倍水煎提取后,用紗布過濾混合液再用活性炭脫色。脫色后使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將液體濃縮到原來的1/5左右，所得到的濃縮液在進行脫蛋白。脫蛋白利用三氯甲烷和正丁醇5:1混合液，用量為濃縮液的1/5混合于300ml三角燒瓶中于雙層搖瓶機在240r/min的轉(zhuǎn)速下?lián)u轉(zhuǎn)20-30min,轉(zhuǎn)入500ml分液漏斗中靜置2小時，去掉下層沉淀和有機液，保留上層澄清液。上層澄清液依次用乙醚、丙酮依次洗滌并50-60真空干燥器干燥、即得麥冬多糖。使用時用蒸餾水配制成所需濃度。2.2實驗方法 標(biāo)記將購自四川大學(xué)醫(yī)學(xué)院NIH小鼠，進行如下方式標(biāo)記：依次為左耳（為1號）、左前肢（為2

22、號）、左后肢（為3 號）、右耳（為 4號）、右前肢（為5號）、右后肢（為 6號）、背部（為7號）、腹部（為8 號）做標(biāo)記，然后用電子天平稱量每只小鼠體重,多次稱量求平均值；再將稱量好的小白鼠放于飼養(yǎng)箱中喂養(yǎng)，最后為每組飼養(yǎng)箱做標(biāo)記。 糖尿病小鼠模型的建立：取用小鼠80只, 雌雄各40只，總共為10組，每組8只，15組為雄鼠，610組為雌鼠。通過四氧嘧啶處理建立糖尿病小鼠模型。將小白鼠禁食12小時，然后用手術(shù)剪剪去小鼠尾部尾端采血，使用血糖試紙及測試儀測定小鼠基礎(chǔ)血糖值。造模分一次腹腔注射和兩次腹腔注射，即隨機在雄鼠和雌鼠中取一半的小鼠，一次注射在禁食12小時后按220mg/kg體重一次性注射四

23、氧嘧啶水溶液；兩次腹腔注射，在禁食12小時后按220mg/kg體重四氧嘧啶總量的70第一次注射，12小時后再在禁食12小時后第二次注射余下的30%。3天后，將小白鼠禁食12小時后尾部尾端采血，使用血糖試紙及測試儀測定小鼠血糖，并測定體重。選取建模成功的小白鼠，即小鼠血糖值為正?？崭怪档?3倍時，表明建模成功。結(jié)果統(tǒng)計，建模成功的小鼠總共63只，實驗中途死亡的小鼠共12只，建模失敗的小鼠共5只。試驗小鼠的分組及處理將成功建立糖尿病模型的小鼠63只隨機分為4組，每組15只，分別為 模型組（陽性對照組）, 試驗期灌胃蒸餾水0.30.4ml/只 ；優(yōu)降糖組，試驗期灌胃優(yōu)降糖（10mg/Kg）麥冬200

24、組，試驗期灌胃麥冬多糖200mg/Kg；麥冬400組，試驗期灌胃麥冬多糖400mg/Kg ；陰性對照組，正常小鼠在試驗期灌胃蒸餾水0.30.4ml/只，各組 雌雄各半，正常喂食。試驗期14天，試驗結(jié)束時各組空腹12 h, 然后小鼠取血，使用血糖試紙及測試儀測定小鼠血糖。在試驗期間，分別在造模后7d、11d、17d，測定體重。然后求整個實驗過程中增量，即增量（%）=（小鼠此次體重-小鼠前次體重）/小鼠前次體重。統(tǒng)計學(xué)處理用 SPSS17.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析,組間顯著性檢驗采用獨立樣本t 檢驗。s。第3章 結(jié)果與討論3.1結(jié)果四氧嘧啶制備小鼠糖尿病不同給藥方式比較腹腔注射220mg/kg濃度

25、的四氧嘧啶溶液后,大部分小鼠在2448h后出現(xiàn)多飲、多食、多尿、呆滯、皮毛松散、體重下降等癥狀，小部分死亡。采用一次注射四氧嘧啶的小鼠造模成功26只，成功率86.7%，死亡10只，死亡率25.0%；采用二次注射四氧嘧啶的小鼠造模成功37只，成功率97.3%，死亡2只，死亡率5.0%。結(jié)果見表3-1。表3-1四氧嘧啶制備小鼠糖尿病不同給藥方式比較造模前造模后（3天后）注射次數(shù)一次二次鼠數(shù)4040平均血糖值（s）2.30.432.71.07鼠數(shù)2637平均血糖值（s）22.65.424.33.59從表中可以分析出，一次注射與分二次劑量注射在小鼠造模成功數(shù)量上比較差異有顯著性，說明分二次劑量注射四氧

26、嘧啶比一次注射造模成功率更高，而一次注射與分二次劑量注射在致小鼠死亡數(shù)量上比較差異不顯著，說明分二次劑量注射在在降低小鼠死亡率上僅有這個趨勢。從血糖值上對比，一次注射與分二次劑量注射差異性不顯著。在四氧嘧啶制備小鼠糖尿病中，其中造模成功的雄鼠32只，成功率91.4%，死亡5只，死亡率12.5%；雌鼠造模成功的有32只，成功率96.97%，死亡7只，死亡率17.5%。結(jié)果見表3-2。表3-2四氧嘧啶對糖尿病小鼠性別的影響造模前造模后（3天后）性別雄鼠雌鼠鼠數(shù)4040平均血糖值（s）2.60.752.51.09鼠數(shù)3232平均血糖值（s）25.22.1623.84.65在造模成功數(shù)量上，雌雄鼠數(shù)目

27、相等；從成功率上分析，雌鼠的成功率高于雄鼠；但在死亡率上雌鼠的死亡率高于雄鼠。從血糖值上對比，四氧嘧啶對雌雄鼠的血糖值影響不是很大。3.1.2川麥冬多糖對糖尿病小鼠血糖的影響比較將分組的小鼠按試驗設(shè)計進行處理，17天后測的小鼠血糖值如下：如下表3-3表3-3.川麥冬多糖對糖尿病小鼠血糖的影響（s）組別劑量N血糖值（mmol/l)基礎(chǔ)血糖造模后3d血糖試驗17d血糖正常對照組0.30.4ml102.23±0.376.3±0.50模型組0.30.4ml82.75±1.1823.1±1.5121.47±0.13優(yōu)降糖組10mg/kg82.13

28、7;0.403 25.65±1.0612.13±1.6麥冬200200mg/kg72.1±0.2825.71±1.9613.8±3.7麥冬400400mg/kg82.35±0.2126.3±1.836.98±1.81注：與模型組比較，* P<0.05 * P<0.01從表3-3中可見：與模型組比較，用優(yōu)降糖處理糖尿病小鼠在試驗17d能夠極顯著地降低小鼠的血糖濃度；從試驗17d血糖值的測定，麥冬多糖200mg/對小鼠血糖濃度也有顯著地降低；用麥冬多糖400mg/kg處理的糖尿病小鼠在試驗17d也能夠極顯著

29、地降低小鼠的血糖濃度； 綜上所述：麥冬多糖及優(yōu)降糖在試驗17d對糖尿病小鼠血糖濃度有顯著地降低作用。3.1.3川麥冬多糖對糖尿病小鼠體重的影響比較在整個實驗過程中，除去實驗中途死亡的小鼠，將所測的小鼠體重數(shù)據(jù)通過整理后，統(tǒng)計如下表3-4。與模型組比較，從表3-4中可見：在造模后3d17d期間，模型組體重增長為-6.14%，優(yōu)降糖組體重增長為-1.7%，麥冬200組體重增長為20.4%，麥冬400組體重增長為10.6%。在各個階段各組別體重變化：優(yōu)降糖處理高血糖小鼠在試驗717d 期間小鼠體重變化不明顯；在造模后3d7d、711d內(nèi)，能顯著地增加小鼠的體重，11d17d期間小鼠體重的變化，麥冬多

30、糖200mg/能明顯地抑制小鼠體重的降低；從造模處理后37d 、7d11d，麥冬400mg/對小鼠體重的影響能夠明顯地增加，但11d17d，此段時間內(nèi)對小鼠體重增加有一定的減緩趨勢；在造模03d，各組別小鼠體重都有一定下降。綜合上述，在試驗3d17d，麥冬多糖能夠明顯的減緩對小鼠體重的降低。優(yōu)降糖有降低小鼠體重的減少的趨勢。繪制折線圖，通過對各組別小鼠從建模0d、3d、7d、11d、17d多次稱量小鼠，然后求平均值，以小鼠造模的實驗進程為為橫坐標(biāo),小鼠的平均值體重為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見表3-4表3-4.在造模017d各組別小鼠體重變化的折線圖從表3-4可見，在造模03d，各組別小鼠體重均有所

31、下降；在造模3d試驗7d，各組別小鼠體重又有所增加；在試驗711d灌胃麥冬多糖組的小鼠體重繼續(xù)增加，而優(yōu)降糖組與模型組小鼠體重下降；到了試驗1117d, 各組別小鼠體重又有所降低。3.2 討論3.2.1糖尿病模型的建立由于四氧嘧啶誘導(dǎo)的大鼠糖尿病模型與人類型即胰島素依賴性糖尿病類似，故四氧嘧啶是制備大鼠糖尿病模型的常用藥物。其作用機制是通過產(chǎn)生超氧自由基選擇性地破壞胰島B 細胞,使細胞內(nèi)DNA 損傷,同時激活多聚ADP 核糖體合成酶的活性,從而使輔酶含量下降,兩者共同作用導(dǎo)致mRNA 功能受損,引起細胞死亡，導(dǎo)致血中胰島素濃度下降及高血糖產(chǎn)生，形成胰島素依賴性糖尿病12。隨著臨床上型糖尿病發(fā)病

32、率的逐年增加,研究型糖尿病的治療和研究型糖尿病動物模型制備也隨之增多。型糖尿病小鼠模型中, 四氧嘧啶制備大鼠糖尿病模型在試驗中最常用，最經(jīng)濟。因此，研究建立較為規(guī)范的四氧嘧啶制備糖尿病大鼠模型具有普遍的意義。本實驗僅對不同注射方式和劑量四氧嘧啶對小鼠糖尿病制備的影響加以研究。結(jié)果表明，分次劑量注射四氧嘧啶比一次劑量注射在造模成功率上更高，而在降低死亡率上僅有一種趨勢。另外，在成功率、死亡率上，雌鼠都高于雄鼠，這可能是不同性別的小鼠對四氧嘧啶的耐受力有關(guān)。此次實驗所做的對比分析還算太少，所得到的數(shù)據(jù)太有限，分次劑量注射在使用四氧嘧啶制備小鼠糖尿病模型上，還需期待更進一步的研究。川麥冬多糖對四氧嘧

33、啶所致小鼠糖尿病血糖的影響麥冬多糖是麥冬塊莖的主要提取物, 具有麥冬的藥性,有很高的醫(yī)用價值。通過上述實驗證明，川麥冬多糖與陽性藥優(yōu)降糖一樣與模型組比較差異均具有顯著性，說明川麥冬多糖對四氧嘧啶致糖糖尿病小鼠具有顯著降血糖作用，而且也證實麥冬多糖是麥冬中降血糖的主要成分之一。近年來，關(guān)于麥冬多糖對糖尿病的相關(guān)研究有很多，王智杰研究的結(jié)果為麥冬多糖（150、300 mg /kg）能在給藥后 3、 6、 12 及 24h明顯抑制四氧嘧啶所致小鼠血糖升高13，而且何陵湘也做過相關(guān)實驗分析得出，NOD小鼠口服麥冬多糖 ( 75、150、300 mg /kg ), 12d能降低血糖及升高血清胰島素7；吳

34、忠忱也通過研究的表明，麥冬多糖 l00 200 m g /kg 有明顯降糖作用14；陳衛(wèi)輝在麥冬多糖對正常和實驗性糖尿病小鼠血糖的影響的所有中得出結(jié)論，即劑量為100和300mg/kg的麥冬多糖灌胃對葡萄糖、四氧嘧啶及腎上腺索引起的小鼠高血糖均有抑制作用,對正常小鼠的血糖亦有降低作用15。這一系列的研究都表明，麥冬多糖能夠降低血糖，這些結(jié)論與本實驗所得出的結(jié)論一致。但是筆者在做這實驗時，方法有與他們又有很大差異，如在選材上，筆者所用的是川麥冬；在實驗的設(shè)計上，筆者又選取的是不同劑量上麥冬多糖（200、400 mg /kg )對糖尿病小鼠的影響，這些都為以后麥冬多糖的臨床試驗提供參考價值。麥冬多

35、糖對胰島素依賴四氧嘧啶所致的小鼠血糖升高有明顯的抑制作用，說明麥冬多糖具有減輕四氧嘧啶對胰島B 細胞的損傷程度或?qū)@種損傷具有一定的保護和修復(fù)作用，從而降低了血糖水平,并且緩解糖尿病小鼠消瘦,多飲多食的癥狀, 使其逐步好轉(zhuǎn)。從本實驗可以發(fā)現(xiàn)，400mg/kg麥冬多糖組在抑制血糖濃度上比200mg/kg麥冬多糖組要強，療效隨麥冬多糖含量的增加有增強的趨勢。推測，增加麥冬多糖的含量在降血糖方面可能療效會更好一些，尚需要進一步的實驗證實。本實驗在作對比實驗上選擇的陽性藥優(yōu)降糖(格列本脲 )，為臨床上治療糖尿病的常用化學(xué)藥劑,該藥片的主要機理是通過增加門靜脈胰島素水平或?qū)Ω闻K直接作用，抑制肝糖原分解和

36、糖原異生作用，肝生成和輸出葡萄糖減少，進而達到治療效果。臨床上這類藥物雖然降血糖作用好，但長期應(yīng)用毒副作用較多, 且對免疫器官無保護作用。中藥毒副作用小,穩(wěn)定性強，但起效一般較慢。從實驗中也可以看出，400mg/kg麥冬多糖組在造模后3天的血糖濃度高于優(yōu)降糖組，但在造模后14天的血糖濃度明顯低于優(yōu)降糖組，說明在治療糖尿病上中藥應(yīng)成為首選。本實驗直接從川麥冬中提取出麥冬多糖，并未進一步分離分析其化學(xué)成分, 實驗研究到底是多聚糖、 某一單糖或者單萜糖苷哪種多糖所起的藥理作用，其降血糖作用機制又如何等,也都并未進一步去分析研究，也希望同行共同研究突破。使這麥冬多糖降血糖新中藥能更好更早造福于人類。對

37、麥冬多糖降血糖機理的實驗研究，有助于確定中藥麥冬的有效作用部位及作用機理，并對相關(guān)的中藥開發(fā)和臨床應(yīng)用提供依據(jù)。有關(guān)麥冬多糖降血糖作用機理的研究仍有待進一步探討。川麥冬多糖對四氧嘧啶所致小鼠糖尿病體重的影響糖尿病的根本是代謝異常,而代謝直接影響著身體的體重大小，因此,從某種程度上來說，糖尿病小鼠的體重變化可以反映病情變化的好壞。臨床上，將糖尿病癥狀總結(jié)為“三多一少”，所謂“三多”是指“多食、多飲、多尿”，“一少”指“體重減少”。所謂體重減少，就是由于患者胰島素分泌不足，機體不能充分利用葡萄糖，使脂肪和蛋白質(zhì)分解加速來補充能量和熱量。其結(jié)果使體內(nèi)碳水化合物、脂肪及蛋白質(zhì)被大量消耗，再加上水分的丟

38、失，病人體重減輕、形體消瘦，嚴(yán)重者體重可下降數(shù)十斤，以致疲乏無力，精神不振。同樣，病程時間越長，血糖越高;病情越重，消瘦也就越明顯從本實驗中表3-1可看出，在造模03d，四氧嘧啶致使小鼠糖尿病，由于未給小鼠灌任何藥物，再加上腹腔穿刺、斷尾測血糖的刺激，因此所有組小鼠體重下降；在造模3d試驗7d，給各組小鼠灌喂藥物，腹腔穿刺、斷尾測血糖等刺激因素減弱，此段時間各組小鼠體重有一定的增加；在試驗711d，灌喂麥冬多糖的小鼠在這段時間體重繼續(xù)增加，而模型組、優(yōu)降糖組小鼠由于未灌喂任何藥物，故小鼠體重下降；在試驗1117d，優(yōu)降糖組與模型組小鼠體重繼續(xù)下降；麥冬200mg/Kg組、麥冬400mg/Kg組

39、小鼠的體重不在增長，反而下降，我認(rèn)為主要原因是由于：a. 后期實驗小鼠飼料用光，未能及時補上，雖后期補上，但是將前期小鼠食用的精料改換用玉米，營養(yǎng)供應(yīng)不全面; b.麥冬多糖能夠?qū)μ悄虿⌒∈笥幸欢ǖ闹委熥饔?，它對小鼠的體重上具有一定的減緩作用，但是否能夠持續(xù)增加小鼠體重，還需要進一步研究；在造模0試驗17d，灌喂麥冬多糖的糖尿病小鼠體重整體趨勢上是增加的，但灌喂麥冬多糖200mg/Kg組的小鼠體重增長趨勢高于麥冬多400mg/Kg組的小鼠,這說明麥冬200mg/Kg劑量在減緩糖尿病小鼠體重上優(yōu)于麥冬400mg/Kg劑量。而灌喂優(yōu)降糖、蒸流水的小鼠體重整體趨勢上降低，但灌喂優(yōu)降糖的小鼠體重降低趨勢

40、低于灌喂蒸流水的的小鼠，這可能是優(yōu)降糖起到一定的作用。在建立糖尿病小鼠模型3d后，給予不同藥物灌喂小鼠，在造模3d試驗17d麥冬多糖能夠明顯地減緩小鼠體重的降低，優(yōu)降糖在小鼠體重降低上也有一定的減緩趨勢，而模型組明顯地反映出糖尿病消瘦的特點，從而得出結(jié)論，麥冬多糖在治療糖尿病小鼠過程中，能夠有效的減緩小鼠體重的降低。對于糖尿病的治療，體重變化只是一個方面，更重要的血糖、血脂、血壓的控制，但體重也能夠從側(cè)面反映出在藥物在治療過程中的所起到的作用。實驗注意問題 本實驗所探究的問題是結(jié)合前人的探索基礎(chǔ)上對實驗過程的改進，對臨床應(yīng)用具有一點的參考意義.下面在實驗過程中所遇到的問題和心得體會與大家分享，

41、希望能給大家進行相關(guān)實驗和研究過程中帶來一定的啟發(fā)和幫助。a.麥冬多糖溶液是現(xiàn)配現(xiàn)制，在配制其溶液的時候，由于麥冬多糖是由單糖組成的聚合糖高分子碳水化合物，所以水溶性一般比單糖低，不易溶于水，可以適當(dāng)在水浴中加熱一下，多攪拌一會，就可以完全溶解；b.在小鼠斷尾采血過程中，部分小鼠血液豐富或者缺乏，為避免測試紙采到的血液量過多或過少，而影響實驗的精確性，可以在小鼠斷尾前用50左右熱水燙一下小鼠的尾巴，燙完后及時用紗布擦干小鼠尾巴，防止水分稀釋血液，造成誤差，這種方法可以加速小鼠血液循環(huán)，以采到合適的血液；c.灌胃時，抓住小鼠，使其頭、頸和身體呈一直線。抓小鼠的動作很簡單，左手的小指和無名指抓住小

42、鼠的尾巴，另外三個手指抓住小鼠的頸部即可。抓好小鼠就可以灌胃了，一般用1ml的注射器配灌胃針頭。灌胃針頭從小鼠的嘴角進入，壓住舌頭，抵住上顎，輕輕向內(nèi)推進，進入食管后會有一個刺空感，進入食道后就可以推注藥液了；d.在給小鼠稱量體重時，可以采用將小鼠放在燒杯中用電子天平稱量，然后瞬間讀數(shù)，多次稱量求平均值。結(jié) 論從本試驗可以分析出以下結(jié)論：a. 分二次劑量注射四氧嘧啶比一次劑量注射造模成功率更高，分二次劑量注射有降低小鼠死亡率的趨勢；b. 川麥冬多糖對四氧嘧啶致糖糖尿病小鼠具有顯著降血糖作用，而且也證實麥冬多糖是麥冬中降血糖的主要有效成分；c.400mg/kg麥冬多糖組在降低血糖濃度上比200mg/kg麥冬多糖組要低，療效隨麥冬多糖含量的增加有增強的趨勢；d.中藥麥冬比西藥優(yōu)降糖穩(wěn)定性強，但起效較慢；e.麥冬多糖能夠明顯減緩糖尿病小鼠體重的降低。致謝光陰似箭，歲月如梭，來不及感嘆，大學(xué)生活已近尾聲，四年多的努力與付出，隨著本次論文的完成，將要劃下完美的句號。首先，我要衷心感謝一直以來給予我無私幫助和關(guān)愛的老師們，謝謝你們這四年以來對我的關(guān)心和照顧，從你們身上，我學(xué)會了如何學(xué)習(xí)，如何工作，如何做人。特別是我的導(dǎo)師茍興能老師 ，從課題選擇到具體的寫作過程，無不凝聚著他的心血和汗水。老師要指