國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)非滅菌產(chǎn)品微生物檢查ICH(11版)

1、非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)法（ICH）概述本檢查法可用于好氧的嗜溫細(xì)菌和真菌的計(jì)數(shù)。當(dāng)本檢查法用于確定非規(guī)定滅菌制劑及其原、輔料是否符合相應(yīng)的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，按下列規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)，包括其取樣量和結(jié)果判斷等。本檢查法不適用于以活菌作為活性成分的制劑的微生物限度檢查。本檢查法可采用替代的微生物計(jì)數(shù)方法，包括自動(dòng)測(cè)定方法，但必須驗(yàn)證替代方法優(yōu)于或與藥典方法相當(dāng)。一般程序本檢查應(yīng)在嚴(yán)格避免外來微生物污染供試品的實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行，防止微生物污染的措施不得影響供試品中污染微生物的檢出如果供試品具有抗菌活性，應(yīng)盡可能去除或中和。供試品檢查時(shí)，如果使用了滅活劑，應(yīng)對(duì)其有效性及對(duì)微生物的無毒性進(jìn)行驗(yàn)證。如果

2、在供試液制備時(shí)使用了表面活性劑，應(yīng)驗(yàn)證其對(duì)微生物無毒性及與滅活劑的相容性。計(jì)數(shù)方法檢查時(shí)可采用薄膜過濾法或下列平板計(jì)數(shù)法中的一種。最大可能數(shù)法（Most-Probabl -Number, MPN）用于微生物計(jì)數(shù)其精確度較低，但當(dāng)供試品的微生物污染程度極低時(shí)，MPN法可能是最適宜的方法。檢查時(shí)根據(jù)供試品的特性和其微生物限度標(biāo)準(zhǔn)選擇計(jì)數(shù)方法。該方法應(yīng)滿足所用的供試品檢驗(yàn)量足以符合試驗(yàn)結(jié)果的判斷。供試品計(jì)數(shù)方法的適用性必須確定。培養(yǎng)基促生長(zhǎng)試驗(yàn)驗(yàn)和計(jì)數(shù)方法適用性確定試驗(yàn)總則供試品中污染的微生物計(jì)數(shù)方法的適用性應(yīng)進(jìn)行確認(rèn)。若檢驗(yàn)程序或供試品發(fā)生變化可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，計(jì)數(shù)方法的適用性應(yīng)重新進(jìn)行確認(rèn)。菌

3、液制備試驗(yàn)菌液可用標(biāo)準(zhǔn)穩(wěn)定的菌懸液（商品化）或按下列規(guī)定程序制備。試驗(yàn)菌應(yīng)采用適宜的保存技術(shù)保存，試驗(yàn)所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代（從菌種保存中心獲得的菌種為第0代）。各試驗(yàn)菌株的培養(yǎng)及接種量見表1。使用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或者pH7.2磷酸鹽緩沖液制備菌懸液，黑曲霉孢子懸液可用含0.05（v/v）聚山梨酯80的緩沖液。菌懸液應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用，若保存在28的菌懸液可以在24小時(shí)內(nèi)使用。相對(duì)體積的黑曲霉和枯草芽孢桿菌的穩(wěn)定孢子懸液可替代新鮮的孢子懸液，穩(wěn)定孢子懸液可保存在28，并在驗(yàn)證過的貯存期內(nèi)使用。表1 實(shí)驗(yàn)用菌液的制備和使用培養(yǎng)基促生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)計(jì)數(shù)方法適用性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)菌株菌液制備

4、需氧菌總數(shù)測(cè)定霉菌及酵母菌總數(shù)測(cè)定需氧菌總數(shù)測(cè)定霉菌及酵母菌總數(shù)測(cè)定金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CMCC(B)26 003胰酪胨大豆瓊脂或胰酪胨大豆肉湯，3035培養(yǎng)1824小時(shí)胰酪胨大豆瓊脂和胰酪胨大豆肉湯100cfu3035，3天胰酪胨大豆瓊脂/MPN胰酪胨大豆肉湯100cfu3035，3天銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)CMCC(B)10104胰酪胨大豆瓊脂或胰酪胨大豆肉湯，3035培養(yǎng)1824小時(shí)胰酪胨大豆瓊脂和胰酪胨大豆肉湯100cfu3035，3天胰酪胨大豆瓊脂/MPN胰酪胨大豆肉湯100cfu3035，3天枯草芽孢桿菌(

5、Bacillus subtilis)CMCC（B）63501胰酪胨大豆瓊脂或胰酪胨大豆肉湯，3035培養(yǎng)1824小時(shí)胰酪胨大豆瓊脂和胰酪胨大豆肉湯100cfu3035，3天胰酪胨大豆瓊脂/MPN胰酪胨大豆肉湯100cfu3035，3天白色念珠菌(Candida albicans)CMCC(F)98001沙氏葡萄糖瓊脂或沙氏葡萄糖肉湯，2025培養(yǎng)23天胰酪胨大豆瓊脂100cfu3035，5天沙氏葡萄糖瓊脂100cfu2025，5天胰酪胨大豆瓊脂100cfu3035，5天不采用MPN法沙氏葡萄糖瓊脂100cfu2025，5天黑曲霉(Aspergillus niger)CMCC(F)98 003沙

6、氏葡萄糖瓊脂或馬鈴薯葡萄糖瓊脂，2025培養(yǎng)57天，或直到大量孢子產(chǎn)生胰酪胨大豆瓊脂100cfu3035，5天沙氏葡萄糖瓊脂100cfu2025，5天胰酪胨大豆瓊脂100cfu3035，5天不采用MPN法沙氏葡萄糖瓊脂100cfu2025，5天陰性對(duì)照試驗(yàn)為確認(rèn)實(shí)驗(yàn)條件是否符合要求，應(yīng)設(shè)立陰性對(duì)照組，以稀釋劑代替供試品， 陰性對(duì)照組應(yīng)無菌生長(zhǎng)。培養(yǎng)基促生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)每批成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按培養(yǎng)基處方配制的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基促生長(zhǎng)試驗(yàn)。接種如表1所示的少量微生物（100cfu）至胰酪胨大豆肉湯管或胰酪胨大豆瓊脂平板，每一批培養(yǎng)基分別制備一管/皿；接種如表1所示的少量微生物（100cfu）至沙氏

7、葡萄糖瓊脂平板，每一批培養(yǎng)基分別制備一皿，按表1所列條件培養(yǎng)。對(duì)于固體培養(yǎng)基，從被測(cè)試培養(yǎng)基獲得的菌落數(shù)不得大于或小于來自驗(yàn)證過的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基菌落數(shù)的2倍，并且其新鮮培養(yǎng)物的菌落形態(tài)應(yīng)與之前驗(yàn)證過的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)一致；對(duì)于液體培養(yǎng)基，被測(cè)試培養(yǎng)基管出現(xiàn)清晰可見微生物的時(shí)間和形態(tài)應(yīng)與之前驗(yàn)證過的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基管一致。計(jì)數(shù)方法實(shí)用性實(shí)驗(yàn)供試液制備根據(jù)供試液供試品的理化特性選擇供試液制備方法 ，若下列制備方法經(jīng)確認(rèn)均不適宜，應(yīng)采用適宜的替代方法。水溶性產(chǎn)品：取規(guī)定量，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液、pH7.2磷酸鹽緩沖液或胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基溶解或稀釋 ，一般制成110供試液。如果需要，調(diào)節(jié)

8、供試液pH值至68。必要時(shí)，用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步稀釋。水不溶性非油酯類產(chǎn)品：取規(guī)定量，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液、pH7.2磷酸鹽緩沖液或胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基10倍混懸。分散能力較差的供試品，可在稀釋劑中加入表面活性劑助懸，如0.1%(g/v)的聚山梨酯80。如果需要，調(diào)節(jié)供試液pH值至68。必要時(shí)，用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步稀釋。油酯類產(chǎn)品：取規(guī)定量，溶解于經(jīng)過濾除菌的無菌十四烷酸異丙酯中，或與最少量并能使供試品乳化的無菌聚山梨酯80或其他無抑菌性無菌表面活性劑充分混合，必要時(shí)可采用加熱的試劑幫助溶解，溫度一般不超過40，特殊情況下最多不超過45，若需要乳化可在水浴中進(jìn)行，然

9、后加入預(yù)熱的稀釋劑使成110供試液，保持溫度，小心混合，并在最短時(shí)間內(nèi)形成乳液狀。必要時(shí)，用含適宜濃度的無菌聚山梨酯80或其他非抑制性無菌表面活性劑的稀釋劑進(jìn)一步10倍系列稀釋。氣霧劑：取規(guī)定容器數(shù)，從每一供試品容器中取全量或一定量樣品無菌轉(zhuǎn)移至薄膜過濾器過濾或無菌容器中進(jìn)一步取樣檢查。貼劑：取規(guī)定數(shù)量貼劑，去除貼劑的保護(hù)層，放置在無菌培養(yǎng)皿或塑料皿中，粘貼面朝上。用適宜的無菌多孔材料（如無菌紗布）覆蓋貼劑的粘貼面以避免貼劑粘貼在一起。然后將其置于適宜體積并含有滅活劑（如聚山梨酯80或卵磷脂）的稀釋劑中，劇烈振搖至少30分鐘。接種和稀釋取上述制備的供試液，接入含不超過100cfu的實(shí)驗(yàn)菌懸液，

10、所加的菌懸液的體積應(yīng)不超過供試液體積的1。同時(shí)用稀釋劑做對(duì)照組。為證明樣品中的微生物能被充分檢出，應(yīng)選擇最低稀釋級(jí)的供試液進(jìn)行方法確認(rèn)試驗(yàn)。如果由于樣品的抗菌活性或溶解性較差原因?qū)е聶z驗(yàn)方法無法確定，應(yīng)進(jìn)一步建立消除的方法。試驗(yàn)時(shí)，如果樣品的抑菌作用無法避免，樣品經(jīng)過中和、稀釋或薄膜過濾處理后再加入菌懸液進(jìn)一步試驗(yàn)?？咕钚缘娜コ蛑泻?當(dāng)供試液接種后，按計(jì)數(shù)方法中的要求進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù)，將樣品組回收的微生物數(shù)量與對(duì)照組回收的微生物數(shù)量進(jìn)行比較。若供試液中微生物生長(zhǎng)被抑制（比值小于2），應(yīng)修訂計(jì)數(shù)方法并進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)以保證結(jié)果的有效性。方法修訂可以包括以下幾個(gè)方面：（1） 增加稀釋劑或培養(yǎng)基用量；（

11、2） 在稀釋劑中加入專用或通用的中和劑；（3） 采用薄膜過濾法；（4） 上述幾種方法的聯(lián)合使用。中和劑：中和劑可以用于中和抗菌劑的抗菌活性（表2）。中和劑可在稀釋劑或培養(yǎng)基的滅菌前加入。若使用中和劑，應(yīng)確定其有效性和對(duì)微生物的毒副作用，可通過設(shè)定一組不含樣品而含有中和劑的對(duì)照組進(jìn)行確認(rèn)。表2 常見干擾物的中和劑或中和方法干擾物可選用的中和劑或滅活方法戊二醛、汞制劑硫氫化鈉（硫化鈉）酚類、乙醇、醛類、吸附物稀釋醛類甘氨酸季銨化合物、對(duì)羥基苯甲酸、雙胍類化合物卵磷脂季銨化合物、碘、對(duì)羥基苯甲酸聚山梨醇酯水銀巰基乙酸鹽水銀，汞化物，醛類硫代硫酸鹽EDTA鎂或鈣離子若沒有適宜的方法消除供試品中的抑菌作

12、用，那么確認(rèn)試驗(yàn)中的微生物回收失敗可看成是由于供試品的抗菌活性引起的，同時(shí)表明該供試品不能被試驗(yàn)菌污染。然而，供試品也可能僅對(duì)試驗(yàn)用菌株具有抑制作用，而對(duì)其他菌株沒有抑制作用。因此，根據(jù)應(yīng)符合的限度標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)采用使微生物能生長(zhǎng)的更高稀釋級(jí)的供試液進(jìn)行方法確認(rèn)試驗(yàn)。供試品中微生物的計(jì)數(shù) 每一試驗(yàn)微生物應(yīng)分別進(jìn)行方法確認(rèn)試驗(yàn)對(duì)每一列舉的微生物分別加以測(cè)定，只對(duì)加入的試驗(yàn)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。薄膜過濾法：試驗(yàn)所使用的薄膜過濾器的濾膜的孔徑不得大于0.45m 。薄膜過濾器的選擇應(yīng)能有效的截留微生物，同時(shí)供試品的組分對(duì)其沒有影響。每一試驗(yàn)菌株使用一個(gè)薄膜過濾器。取上述已加菌的供試液適量（相當(dāng)1g供試品的量，若供試品

13、中菌數(shù)較高，可相應(yīng)減少試驗(yàn)量）至濾器中，立即過濾，并用適量的沖洗液沖洗濾膜。若測(cè)定總需氧菌數(shù)（TAMC），轉(zhuǎn)移濾膜至胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基平板上；若測(cè)定霉菌和酵母總數(shù)（TYMC），轉(zhuǎn)移濾膜至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上。按表1要求的溫度和時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng)并計(jì)數(shù)。平板計(jì)數(shù)法：平板計(jì)數(shù)法每一培養(yǎng)基至少平行測(cè)定兩個(gè)平板，以算術(shù)均值作為計(jì)數(shù)結(jié)果。澆碟法取上述經(jīng)消除作用消除處理及加菌的供試液1ml，置于直徑9cm的無菌平皿中，加入1520mL溫度不超過45胰酪胨大豆瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。如果使用直徑更大的平皿，培養(yǎng)基體積應(yīng)相應(yīng)增加。每一試驗(yàn)菌應(yīng)至少制備兩個(gè)平板。按表1要求的溫度和時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng)并計(jì)數(shù)。計(jì)算每

14、一試驗(yàn)菌平板計(jì)數(shù)的算術(shù)平均值，并計(jì)算接種的試驗(yàn)菌數(shù)。表面涂抹法取直徑9cm的無菌平皿，加入1520mL溫度不得超過45胰酪胨大豆瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，凝固，制成平板。如果使用直徑更大的平皿，培養(yǎng)基體積應(yīng)相應(yīng)增加。在無菌層流臺(tái)或培養(yǎng)箱中使制備的瓊脂平板表面干燥。取上述經(jīng)消除作用消除處理及加菌的供試液不少于0.1ml接種于瓊脂平板表面，用無菌玻棒涂抹使試驗(yàn)菌均勻分布在瓊脂平板表面，每一試驗(yàn)菌至少接種兩個(gè)瓊脂平板。培養(yǎng)和計(jì)數(shù)同澆碟法。最大或然數(shù)法（MPN）：最大或然數(shù)計(jì)數(shù)法（MPN）精度和準(zhǔn)確度比薄膜過濾法和平板計(jì)數(shù)法差，若用于霉菌計(jì)數(shù)，結(jié)果是不可信的。因此，MPN法僅在總需氧菌沒有適宜的測(cè)定

15、方法時(shí)使用。若規(guī)定使用MPN法，按如下程序進(jìn)行。取上述經(jīng)消除作用消除處理及加菌的供試液按10倍系列稀釋，制備至少連續(xù)3個(gè)稀釋級(jí)的供試液，從 每一稀釋級(jí)的供試液中各吸取1g或1mL供試液3份分別加至3管裝有910mL胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基的試管中，若需要可在培養(yǎng)基中添加聚山梨酯80等表面活性劑或抗菌劑的滅活劑。3個(gè)稀釋級(jí)共接種9管培養(yǎng)基，培養(yǎng)。所有接種管在3035培養(yǎng)不超過3天，如果由于供試品特性使結(jié)果判斷困難或不確定，可將該管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接種至胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基或胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基，在同一溫度條件下培養(yǎng)12天，在進(jìn)行結(jié)果判斷。根據(jù)生長(zhǎng)管數(shù)從表3查對(duì)每1g或每1mL供試品中最大可能的菌落數(shù)。表3

16、微生物最大或然數(shù)（Most-Probable-Number, MPN）值每組生長(zhǎng)管數(shù)MPN/g(mL)95%可信限每管含樣品的g或mL數(shù)0.10.010.00100030-9.400130.1-9.501030.1-100116.11.2-170206.21.2-170309.43.5-351003.60.2-171017.21.2-17102114-351107.41.3-20111114-35120114-35121155-38130165-382009.21.5-35201144-35202205-38210154-38211203-38212279-94220215-40221289-

17、94222359-94230299-94231369-94300235-94301389-1043026416-181310439-1813117517-19931212030-36031316030-3803209318-36032115030-38032221030-40032329090-99033024040-99033146090-19803321100200-40003331100結(jié)果判斷供試品污染微生物數(shù)測(cè)定時(shí)，若采用薄膜過濾法或平板計(jì)數(shù)法，方法確認(rèn)時(shí)，當(dāng)供試品組中回收的微生物數(shù)與不含供試品的對(duì)照組回收的微生物數(shù)的比值不小于50時(shí)，表明薄膜過濾法或平板計(jì)數(shù)法適合該供試品的微生物計(jì)

18、數(shù)；若采用MPN法，當(dāng)供試品組中回收的微生物數(shù)與不含供試品的對(duì)照組回收的微生物數(shù)相比在最大可能值的95可信限內(nèi)，表該MPN 法適合該供試品的微生物計(jì)數(shù) 。計(jì)數(shù)方法確認(rèn)時(shí)，若采用上述任何一種計(jì)數(shù)方法總存在一株或多株微生物試驗(yàn)菌的回收達(dá)不到要求，那么選擇回收情況最接近要求的方法和試驗(yàn)條件進(jìn)行供試品的微生物計(jì)數(shù)。供試品檢驗(yàn)檢驗(yàn)量除另有規(guī)定外，一般供試品的檢驗(yàn)量為10g或10mL，并按上述要求取樣，防止污染。 氣霧劑為10個(gè)包裝容器；貼劑為10貼。含生物活性的供試品，若處方中活性物質(zhì)的含量符合下列要求，其檢驗(yàn)量可以適當(dāng)減少：每一劑量單位（片、膠囊、注射劑）小于或等于1mg，或者每g或每mL（指制劑）含

19、活性物質(zhì)量低于1mg。這種情況下，檢驗(yàn)量應(yīng)不少于10個(gè)劑量單位，或者10g或10mL。樣品量有限或批產(chǎn)量極小（如小于1000mL或1000g）的活性物質(zhì)供試品，除另有規(guī)定更少的檢驗(yàn)量外，其檢驗(yàn)量為批產(chǎn)量的1 。批產(chǎn)量少于200的供試品（如臨床診斷用），檢驗(yàn)量最少為2個(gè)單位； 批產(chǎn)量少于100的供試品，檢驗(yàn)量最少為1個(gè)單位。隨機(jī)抽取原料或制劑單位的供試品，取充足的容器數(shù)混合取規(guī)定量供試品進(jìn)行檢驗(yàn)。供試品測(cè)定薄膜過濾法采用薄膜過濾法進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)選擇可以將濾膜轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基的薄膜過濾器，按促生長(zhǎng)試驗(yàn)和計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的程序進(jìn)行供試液制備，分別轉(zhuǎn)移適量的供試液到兩個(gè)薄膜過濾器，立即過濾，按

20、方法適用性試驗(yàn)確定的程序沖洗濾膜。沖洗后，轉(zhuǎn)移一張濾膜到胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基表面測(cè)定總需氧菌數(shù)（TAMC）；轉(zhuǎn)移另一張濾膜到沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基表面測(cè)定霉菌和酵母總數(shù)計(jì)數(shù)（TYMC）。胰酪胨大豆瓊脂平板在3035培養(yǎng)35天；沙氏葡萄糖瓊脂平板在2025培養(yǎng)57天。計(jì)數(shù)，計(jì)算1g或1mL供試品中的微生物數(shù)。當(dāng)檢查貼劑時(shí)，分別轉(zhuǎn)移10%供試液到兩個(gè)薄膜過濾器，轉(zhuǎn)移一張濾膜到胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基表面測(cè)定總需氧菌數(shù)（TAMC）；轉(zhuǎn)移另一張濾膜到沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基表面測(cè)定霉菌和酵母總數(shù)計(jì)數(shù)（TYMC）。平板計(jì)數(shù)法澆碟法：按促生長(zhǎng)試驗(yàn)和計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的程序進(jìn)行供試液制備，每一供試液稀釋級(jí)每種培養(yǎng)

21、基至少制備兩個(gè)平板。胰酪胨大豆瓊脂平板在3035培養(yǎng)35天；沙氏葡萄糖瓊脂平板在2025培養(yǎng)57天。計(jì)數(shù)，總需氧菌計(jì)數(shù)（TAMC）選擇平板菌落數(shù)小于250cfu、霉菌和酵母總數(shù)計(jì)數(shù)（TYMC）選擇平板菌落數(shù)小于50cfu的菌稀釋級(jí)作為菌數(shù)報(bào)告依據(jù)，根據(jù)每一培養(yǎng)基平板計(jì)數(shù)的算術(shù)平均值計(jì)算1g或1mL供試品中的微生物數(shù)。表面涂抹法：按促生長(zhǎng)試驗(yàn)和計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的程序進(jìn)行供試液制備，每一供試液稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基至少制備兩個(gè)平板。培養(yǎng)和菌落計(jì)數(shù)同上述澆碟法。最大或然數(shù)法（MPN） 按促生長(zhǎng)試驗(yàn)和計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的程序進(jìn)行供試液制備，所有培養(yǎng)基接種管在3035培養(yǎng)35天。如果需要轉(zhuǎn)種培養(yǎng)，按

22、方法適用性確認(rèn)試驗(yàn)要求的程序進(jìn)行。記錄每一稀釋級(jí)微生物生長(zhǎng)的管數(shù)，從表3查對(duì)1g或1mL供試品含有最大可能的微生物數(shù)。結(jié)果判斷總需氧菌計(jì)數(shù)（TAMC）是指胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的總菌落數(shù)，包括真菌菌落數(shù)；霉菌和酵母總數(shù)計(jì)數(shù)（TYMC）是指沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的總菌落數(shù)，包括細(xì)菌菌落數(shù)。若因沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的細(xì)菌造成霉菌和酵母總數(shù)（TYMC）超過規(guī)定的限值，可使用含有抗生素的沙氏瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行霉菌和酵母總數(shù)測(cè)定。若采用MPN方法計(jì)數(shù)，測(cè)定的結(jié)果為總需氧菌數(shù)（TAMC） 。微生物限度標(biāo)準(zhǔn)解釋如下：101cfu：最大可接受限值20；102cfu：最大可接受限值200；103cfu

23、：最大可接受限值2000；以此類推。計(jì)數(shù)方法中的溶液和培養(yǎng)基見XIIIC.2非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：控制菌檢查法部分。非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：控制菌檢查法概述本檢查法用于在規(guī)定試驗(yàn)條件下，檢查供試品中是否存在特定的微生物。當(dāng)本檢查法主要用于確定非規(guī)定滅菌制劑及其原、輔料是否符合相應(yīng)的微生物標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，按下列規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)，包括其取樣量和結(jié)果判斷等。本檢查法可采用替代的控制菌檢查方法，包括自動(dòng)測(cè)定方法，但必須驗(yàn)證替代方法優(yōu)于或與藥典方法相當(dāng)。一般程序供試液制備同非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)法。若供試品具有抗菌活性，應(yīng)盡可能去除或中和，方法同 非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)法 如果在供試液制備時(shí)使用了

24、表面活性劑，應(yīng)驗(yàn)證其對(duì)微生物無毒性及與滅活劑的相容性。方法同 非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)法 培養(yǎng)基促生長(zhǎng)和抑制試驗(yàn)和方法適用性確定試驗(yàn)供試品中的控制菌檢查方法適用性應(yīng)進(jìn)行確認(rèn)。若檢驗(yàn)程序或供試品發(fā)生變化可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，檢查方法的適用性應(yīng)重新進(jìn)行確認(rèn)。菌液制備按如下程序制備標(biāo)準(zhǔn)的、穩(wěn)定的菌懸液。試驗(yàn)菌應(yīng)采用適宜的保存技術(shù)保存，試驗(yàn)所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代（從菌種保存中心獲得的菌種為第0代）。需氧菌將各試驗(yàn)細(xì)菌分別于胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基或在胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基中，3035培養(yǎng)1824小時(shí)；將白色念珠菌接種于沙氏葡萄糖瓊脂或沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基中，2025培養(yǎng)23天。金黃色葡萄球菌(

25、Staphylococcus aureus)如：ATCC6538,NCIMB9518,CIP4.83,NBRC13276銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)如：ATCC9027,NCIMB8626,CIP82.118,NBRC13275大腸埃希菌(Escherichia coli)如：ATCC8739,NCIMB8545,CIP53.126,NBRC3972腸沙門菌(Salmonella enteria)如：ATCC14028, NBRC100797,NCTC6017,CIP80.39白色念珠菌(Candida albicans)如：ATCC10231,NCPF3179

26、,IP48.72,NBRC1594上述接種物培養(yǎng)后，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或者pH7.2磷酸鹽緩沖液制備成菌懸液，若放置在室溫下，菌懸液應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用；若放置在28，菌懸液可以在24小時(shí)內(nèi)使用。梭菌以生孢梭菌（Clostridium sporogenes）ATCC11437NBRC14293,NCIMB12343,CIP100651或ATCC19404NCTC532或CIP79.3作為試驗(yàn)菌株。接種梭菌于梭菌增菌培養(yǎng)基中置厭氧條件下3035培養(yǎng)2448小時(shí)。穩(wěn)定孢子懸液可替代新鮮的菌懸液，穩(wěn)定孢子懸液可保存在28，并在驗(yàn)證過的貯存期內(nèi)使用。 陰性對(duì)照為確認(rèn)實(shí)驗(yàn)條件是否符合要求，

27、應(yīng)設(shè)立陰性對(duì)照組，以稀釋劑代替供試品， 陰性對(duì)照組應(yīng)無菌生長(zhǎng)。培養(yǎng)基促生長(zhǎng)和抑制試驗(yàn)每批成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按培養(yǎng)基處方配制的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基促生長(zhǎng)和抑制試驗(yàn)。有關(guān)培養(yǎng)基應(yīng)具備的促生長(zhǎng)能力、指示和抑制特性見下表1。表1 培養(yǎng)基促生長(zhǎng)、抑制和指示特性控制菌檢查培養(yǎng)基特性試驗(yàn)菌株耐膽鹽革蘭陰性菌腸道菌增菌肉湯促生長(zhǎng)能力E.coli、P.aeruginosa抑制能力S.aureus紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂促生長(zhǎng)能力+指示能力E.coli、P.aeruginosa大腸埃希菌麥康凱肉湯促生長(zhǎng)能力E.coli抑制能力S.aureus麥康凱瓊脂促生長(zhǎng)能力+指示能力E.coli沙門菌RV沙門菌增菌肉湯促生長(zhǎng)

28、能力S paratyphi B抑制能力S.aureus木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂促生長(zhǎng)能力+指示能力S paratyphi BE.coli銅綠假單胞菌溴化十六烷基三甲銨瓊脂促生長(zhǎng)能力P.aeruginosa抑制能力E.coli金黃色葡萄球菌甘露醇高鹽瓊脂促生長(zhǎng)能力+指示能力S.aureus抑制能力E.coli梭菌梭菌增菌培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力Cl. sporogenes哥倫比亞瓊脂促生長(zhǎng)能力Cl. sporogenes白色念珠菌沙氏葡萄糖肉湯促生長(zhǎng)能力C.albicans沙氏葡萄糖瓊脂促生長(zhǎng)能力+指示能力C.albicans液體培養(yǎng)基促生長(zhǎng)試驗(yàn)：接種少量（不大于100cfu）試驗(yàn)菌株至上述液體培養(yǎng)基中

29、，在規(guī)定溫度下培養(yǎng)，時(shí)間應(yīng)少于試驗(yàn)規(guī)定的最短培養(yǎng)時(shí)間，與之前已確認(rèn)過符合要求的培養(yǎng)基比較，若培養(yǎng)基管中生長(zhǎng)良好，判該批培養(yǎng)基符合規(guī)定 。固體培養(yǎng)基促生長(zhǎng)試驗(yàn)：按非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)法中平板計(jì)數(shù)表面涂抹法，每一平板接種不大于100cfu的試驗(yàn)菌，在規(guī)定溫度下培養(yǎng)，時(shí)間應(yīng)少于試驗(yàn)規(guī)定的最短培養(yǎng)時(shí)間，平板上生長(zhǎng)的菌落與之前已確認(rèn)過符合要求的培養(yǎng)基比較應(yīng)一致。液體和固體培養(yǎng)基抑制試驗(yàn)： 接種至少100cfu的試驗(yàn)菌于相應(yīng)的培養(yǎng)基中，按在規(guī)定溫度下培養(yǎng)，時(shí)間不得少于試驗(yàn)規(guī)定的最短培養(yǎng)時(shí)間，試驗(yàn)菌應(yīng)不得生長(zhǎng)。培養(yǎng)基菌落特征指示試驗(yàn)：按非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)法中平板計(jì)數(shù)表面涂抹法，每一

30、平板接種少量（不大于100cfu）的試驗(yàn)菌株 ，在規(guī)定溫度和時(shí)間下培養(yǎng)，平板上生長(zhǎng)的菌落形態(tài)特征與之前已確認(rèn)過符合要求的培養(yǎng)基比較應(yīng)一致。方法適用性確定試驗(yàn) 按供試品檢查中的規(guī)定制備供試液。依控制菌檢查的方法在規(guī)定的促生長(zhǎng)培養(yǎng)基中接入供試品和相應(yīng)的試驗(yàn)菌懸液，接種量不大于100cfu 。在規(guī)定溫度下培養(yǎng)，時(shí)間應(yīng)少于試驗(yàn)規(guī)定的最短培養(yǎng)時(shí)間，所加的試驗(yàn)菌依反應(yīng)特征而被檢出，。 供試品若有抗菌活性進(jìn)行處理（見 非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)法抗菌活性的去除或中和）。對(duì)于經(jīng)試驗(yàn)確認(rèn)的供試品，若對(duì)試驗(yàn)菌的抗菌作用按規(guī)定方法無法取消，那么可認(rèn)為該供試品不可能受抑制的微生物污染。供試品檢查耐膽鹽革蘭陰性菌

31、供試液制備與預(yù)增菌：取不少于1g的供試品，用胰酪胨大豆肉湯作為稀釋劑按非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)法的規(guī)定制成1：10供試液，混勻，在2025培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)間要控制在使細(xì)菌充分恢復(fù)，但不增殖的范圍內(nèi)（通常25小時(shí)）。未檢出試驗(yàn)：除另有規(guī)定外，取上述含有1g供試品的預(yù)增菌液接種至腸道菌增菌肉湯，3035培養(yǎng)2448小時(shí)。取上述培養(yǎng)物劃線接種于紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂平板上，3035培養(yǎng)1824小時(shí)。如果平板上無菌落生長(zhǎng)，判供試品未檢出耐膽鹽革蘭陰性菌。定量試驗(yàn)選擇和分離培養(yǎng)：取相當(dāng)于0.1g、0.01g和0.001g（或0.1mL、0.01mL和0.001mL）供試品的預(yù)增菌液或其稀釋液分別接種至腸

32、道菌增菌肉湯中，3035培養(yǎng)2448小時(shí)。上述每一培養(yǎng)物分別劃線接種于紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂平板上，3035培養(yǎng)1824小時(shí)。結(jié)果判斷；如果平板上有菌落生長(zhǎng)，該培養(yǎng)物為陽(yáng)性。記錄供試品出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果的最小量和出現(xiàn)陰性結(jié)果的最大量，從表2查對(duì)供試品最大可能含有的菌數(shù)。表2 耐膽鹽革蘭陰性菌檢查結(jié)果判斷每管含樣品的g或mL數(shù)每1g(1mL)供試品最大可能的菌數(shù)（N）0.10.010.001N103 102N10310N102N10大腸埃希菌供試液制備與預(yù)增菌：取不少于1g的供試品，按非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)法的規(guī)定制成1：10供試液，取10mL供試液，或相當(dāng)于1g或1mL供試品的供試液，接種到適

33、宜體積（經(jīng)方法適用性試驗(yàn)確定）的胰酪胨大豆肉湯中，混勻，3035培養(yǎng)1824小時(shí)。選擇和分離培養(yǎng)：振搖容器，取1mL上述胰酪胨大豆肉湯預(yù)培養(yǎng)物至100mL麥康凱肉湯中，4244培養(yǎng)2448小時(shí)。取少量麥康凱肉湯培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂平板上，3035培養(yǎng)1872小時(shí)。結(jié)果判斷：麥康凱瓊脂平板上若有菌落生長(zhǎng)，表明可能存在大腸埃希菌（E.coli），應(yīng)進(jìn)一步試驗(yàn)確定。如果平板上沒有菌落生長(zhǎng)，或者雖有菌落生長(zhǎng)但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。沙門菌供試液制備與預(yù)增菌：取不少于1g的供試品，按非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)法的規(guī)定制成1：10供試液，取10mL供試液，或相當(dāng)于1g或1mL

34、供試品的供試液，接種到適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗(yàn)確定）的胰酪胨大豆肉湯中，混勻，3035培養(yǎng)1824小時(shí)。選擇和分離培養(yǎng)：取0.1mL上述胰酪胨大豆肉湯預(yù)培養(yǎng)物至10mL RV沙門增菌肉湯中，3035培養(yǎng)1824小時(shí)。取少量RV沙門增菌肉湯培養(yǎng)物劃線接種于木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂平板上，3035培養(yǎng)1848小時(shí)。結(jié)果判斷：若木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂平板上的菌落生長(zhǎng)良好，紅色、菌落中心帶黑色或無黑色，表明可能為沙門菌。如果平板上沒有上述形態(tài)的菌落生長(zhǎng)，或者雖有生長(zhǎng)但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出沙門菌。銅綠假單胞菌供試液制備與預(yù)增菌：取不少于1g的供試品，按非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)法的規(guī)

35、定制成1：10供試液，取10mL供試液，或相當(dāng)于1g或1mL供試品的供試液，接種到適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗(yàn)確定）的胰酪胨大豆肉湯中，混勻。供試品若為透皮貼劑，用薄膜過濾器濾過相當(dāng)于1貼供試品的供試液（按XIIIC.1非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)法透皮貼劑供試液制備方法），取除濾膜轉(zhuǎn)移至100mL胰酪胨大豆肉湯中，3035培養(yǎng)1824小時(shí)。選擇和分離培養(yǎng)：取上述培養(yǎng)物劃線接種于溴化十六烷基三甲銨瓊脂平板上，3035培養(yǎng)1872小時(shí)。結(jié)果判斷：溴化十六烷基三甲銨瓊脂平板上若有菌落生長(zhǎng)，表明可能存在銅綠假單胞菌，應(yīng)進(jìn)一步試驗(yàn)確定。如果平板上沒有菌落生長(zhǎng)，或者雖有菌落生長(zhǎng)但鑒定結(jié)果為陰性，判供試

36、品未檢出銅綠假單胞菌。金黃色葡萄球菌供試液制備與預(yù)增菌：取不少于1g的供試品，按非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)法的規(guī)定制成1：10供試液，取10mL供試液，或相當(dāng)于1g或1mL供試品的供試液，接種到適宜體積（經(jīng)方法適用性試驗(yàn)確定）的胰酪胨大豆肉湯中，混勻。供試品若為透皮貼劑，用薄膜過濾器濾過相當(dāng)于1貼供試品的供試液（按XIIIC.1非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)法透皮貼劑供試液制備方法），取除濾膜轉(zhuǎn)移至100mL胰酪胨大豆肉湯中，3035培養(yǎng)1824小時(shí)。選擇和分離培養(yǎng)：取上述培養(yǎng)物劃線接種于甘露醇鹽瓊脂平板上，3035培養(yǎng)1872小時(shí)。結(jié)果判斷：甘露醇鹽瓊脂平板上若有黃色菌落或周圍有黃色

37、色素帶的白色菌落生長(zhǎng)時(shí)，表明可能存在金黃色葡萄球菌，應(yīng)進(jìn)一步試驗(yàn)確定。如果平板上沒有上述形態(tài)的菌落生長(zhǎng)，或者雖有生長(zhǎng)但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出金黃色葡萄球菌。梭菌供試液制備與熱處理：按XIIIC.1非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)法規(guī)定制備供試液，取兩份相當(dāng)于不少于1g或1mL供試品的供試液，其中一份80加熱10min后迅速冷卻，另一份不加熱。選擇和分離培養(yǎng)：從兩份供試液中各取10mL至兩個(gè)容器（38mm×200mm試管）或其他盛有100mL梭菌增菌培養(yǎng)基的容器中，在厭氧條件下3035培養(yǎng)48小時(shí)。在哥倫比亞瓊脂平板上對(duì)每一培養(yǎng)物進(jìn)行傳代培養(yǎng)，并在厭氧條件下3035培養(yǎng)48小時(shí)

38、。結(jié)果判斷：有過氧化氫酶反應(yīng)陰性的（帶或不帶芽孢）厭氧桿菌生長(zhǎng)時(shí)，表明存在梭菌（Clostridia）。如果哥倫比亞瓊脂平板上沒有厭氧菌落生長(zhǎng)，或者雖有菌落生長(zhǎng)但過氧化氫酶實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，該供試品檢查結(jié)果符合規(guī)定。白色念珠菌供試液制備與預(yù)增菌：檢查不少于1g或1mL的供試品，按XIIIC.1非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：微生物計(jì)數(shù)法規(guī)定制備供試液，取10mL供試液，或相當(dāng)于1g或1mL供試品，接種到100mL沙氏葡萄糖肉湯，混勻，3035培養(yǎng)35天。選擇和傳代培養(yǎng)：在沙氏葡萄糖瓊脂平板上對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行傳代培養(yǎng)，3035培養(yǎng)2448小時(shí)。結(jié)果判斷：有白色菌落生長(zhǎng)表明可能存在白色念珠菌（C.albicans ）可

39、采用適當(dāng)?shù)蔫b定實(shí)驗(yàn)加以證實(shí)。如果沙氏葡萄糖瓊脂平板上沒有菌落生長(zhǎng)，或者雖有菌落生長(zhǎng)但鑒定結(jié)果陰性，該供試品檢查結(jié)果符合規(guī)定。推薦溶液和培養(yǎng)基推薦溶液和培養(yǎng)基是藥典規(guī)定的溶液和培養(yǎng)基，能滿足污染微生物檢測(cè)的需要，也可以使用其他和推薦培養(yǎng)基具有相似促生長(zhǎng)能力和抑制特性的培養(yǎng)基。緩沖儲(chǔ)備液：取34g磷酸二氫鉀到1000mL量瓶，用500mL純化水溶解，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至7.2±0.2，加入純化水至量，混勻，分裝至適宜容器、滅菌，28保存。pH7.2磷酸鹽緩沖液：取純化水和上述緩沖儲(chǔ)備液按800:1(v/v)比例混合、滅菌。1、pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液磷酸二氫鉀3.6g二水合磷酸氫

40、二鈉7.2g(相當(dāng)于0.067M磷酸鹽)氯化鈉4.3g（肉或酪蛋白）胨1.0g純化水1000mL按驗(yàn)證過的高壓滅菌程序滅菌。2、胰酪胨大豆肉湯胰酪胨17.0g大豆木瓜蛋白酶水解物3.0g氯化鈉5.0g磷酸氫二鈉（鉀）2.5g一水合葡萄糖2.5g純化水1000mL調(diào)節(jié)pH值使滅菌后25pH值為7.3±0.2，按驗(yàn)證過的高壓滅菌程序滅菌。3、胰酪胨大豆瓊脂胰酪胨15.0g大豆木瓜蛋白酶水解物5.0g氯化鈉5.0g瓊脂15.0g純化水1000mL調(diào)節(jié)pH值使滅菌后25pH值為7.3±0.2，按驗(yàn)證過的高壓滅菌程序滅菌。4、沙氏葡萄糖瓊脂葡萄糖40.0g動(dòng)物組織胃蛋白酶水解物和胰酪

41、胨等量混合物10.0g瓊脂15.0g純化水1000mL調(diào)節(jié)pH值使滅菌后25pH值為5.6±0.2，按驗(yàn)證過的高壓滅菌程序滅菌。5、馬鈴薯葡萄糖瓊脂從200g馬鈴薯中的浸出物葡萄糖20.0g瓊脂15.0g純化水1000mL調(diào)節(jié)pH值使滅菌后25pH值為5.6±0.2，按驗(yàn)證過的高壓滅菌程序滅菌。6、沙氏葡萄糖肉湯葡萄糖20.0g動(dòng)物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物10.0g純化水1000mL調(diào)節(jié)pH值使滅菌后25pH值為5.6±0.2，按驗(yàn)證過的高壓滅菌程序滅菌。7、腸道菌增菌肉湯明膠胰酶水解物10.0g一水合葡萄糖5.0g脫水牛膽汁20.0g磷酸二氫鉀2.0

42、g二水合磷酸氫二鈉8.0g亮綠15mg純化水1000mL調(diào)節(jié)pH值使加熱后25pH值為7.2±0.2，加熱至100 30分鐘，立即冷卻。8、紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂酵母浸出粉3.0g明膠胰酶水解物7.0g復(fù)合膽鹽1.5g氯化鈉5.0g一水合葡萄糖10.0g瓊脂15.0g中性紅30mg結(jié)晶紫2mg純化水1000mL調(diào)節(jié)pH使加熱后25pH值為7.4±0.2。加熱煮沸，不能在高壓滅菌器中加熱。9、麥康凱肉湯明膠胰酶水解物20.0g一水合乳糖10.0g脫水牛膽汁5.0g溴甲酚紫10mg純化水1000mL調(diào)節(jié)pH值使滅菌后25pH值為7.3±0.2，按驗(yàn)證過的高壓滅菌程序滅菌。

43、10、麥康凱瓊脂明膠胰酶水解物17.0g（肉或酪蛋白）胨3.0g一水合乳糖10.0g氯化鈉5.0g復(fù)合膽鹽1.5g瓊脂13.5g中性紅30.0mg結(jié)晶紫1mg純化水1000mL調(diào)節(jié)pH值使滅菌后25pH值為7.1±0.2，煮沸一分鐘，并持續(xù)搖動(dòng)，按驗(yàn)證過的高壓滅菌程序滅菌。11、RVS肉湯大豆胨4.5g六水合氯化鎂29.0g氯化鈉8.0g磷酸氫二鉀0.4磷酸二氫鉀0.6孔雀綠36mg純化水1000mL微熱溶解，按驗(yàn)證過的高壓滅菌程序滅菌，滅菌溫度不能超過115。調(diào)節(jié)pH值使加熱和滅菌后25pH值為5.2±0.2。12、木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂木糖3.5gL-賴氨酸5.0g一

44、水合乳糖7.5g蔗糖7.5g氯化鈉5.0g酵母浸出粉3.0g酚紅80mg瓊脂13.5g脫氧膽酸鈉2.5g硫代硫酸鈉6.8g梮櫞酸鐵銨0.8g純化水1000mL調(diào)節(jié)pH值使加熱后25pH值為7.4±0.2，加熱至沸騰，冷至50傾注平皿，不能在高壓滅菌器中加熱。13、溴化十六烷基三甲銨瓊脂明膠胰酶水解物20.0g氯化鎂1.4g硫酸鉀10.0g溴化十六烷基三甲銨0.3g瓊脂13.6g甘油10mL純化水1000mL加熱煮沸1分鐘，并振搖。調(diào)節(jié)pH使滅菌后25pH值為7.4±0.2，按驗(yàn)證過的高壓滅菌程序滅菌。14、甘露醇鹽瓊脂胰酪胨5.0g動(dòng)物組織胃蛋白酶水解物5.0g牛肉浸出粉1

45、.0gD-甘露醇10.0g氯化鈉75.0g瓊脂15.0g酚紅25mg純化水1000mL攪拌加熱，煮沸1分鐘，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后25pH值為7.4±0.2，按驗(yàn)證過的高壓滅菌程序滅菌。15、梭菌增菌培養(yǎng)基牛肉浸出粉10.0g胨10.0g酵母浸出粉3.0g可溶淀粉1.0g一水合葡萄糖5.0g鹽酸半胱氨酸0.5g氯化鈉5.0g乙酸鈉3.0g瓊脂0.5g純化水1000mL取上述成分，加熱煮沸使溶解，并持續(xù)振搖。如需要，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后25pH值為6.8±0.2。按驗(yàn)證過的高壓滅菌程序滅菌。16、哥倫比亞瓊脂胰酪胨10.0g肉胃蛋白酶消化物5.0g心胰酶消化物3.0g酵母浸出粉5.0g玉米淀粉1.0g氯化鈉5.0g瓊脂10.015.0g（視凝膠強(qiáng)度）純化水1000mL取上述成分，加熱煮沸使溶解，并持續(xù)振搖。如需要，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為25pH值7.3±0.2，按驗(yàn)證過的高壓滅菌程序滅菌。如有必要，冷至4550加入相當(dāng)于20mg慶大霉素的無菌硫酸慶大霉素，混勻，傾注平皿。XIIIC.3非滅菌產(chǎn)品微生物檢查：藥品及藥用材料微生物標(biāo)準(zhǔn)非滅菌制劑中存在的某些微生物可能降低藥物活性，或使得藥品喪失療效，這些微生物也可能直接威脅到患者健康。因