提取法用于伊曲康唑膠囊微生物限度方法檢查

1、最新精品提取法用于伊曲康唑膠囊微生物限度方法檢查更多專業(yè)、稀缺文檔請訪問一一此文檔的上傳用戶主頁提取法用于伊曲康唑膠囊微生物限度方法檢查提取法用于伊曲康唑膠囊微生物限度方法檢查【摘要】目的:探討伊曲康唑膠囊微生物限度方法學驗證。方法:采用十四烷酸異丙脂提取法，將有抑菌成分的物質轉移至油相，水相用于試驗。結果:白色念珠菌、黑曲霉菌的回收率達到70,以上。結論:提取法可以用于伊曲康唑膠囊微生物限度方法檢查，簡單易行?！娟P鍵詞】提取法;伊曲康唑膠囊文章編號:1009-5519(2007)03-0343-02中圖分類號:R9文獻標識碼:A伊曲康唑膠囊是抗真菌的藥物，在水中不溶，其內容物為包衣顆粒，進行

2、微生物限度方法學驗證時發(fā)現(xiàn)真菌的回收率不到70,，選用離心薄膜過濾法無法濾過，我們利用油水相分層原理選用適宜的提取液提取供試品的稀釋液，將水相用于試驗。1 儀器與材料1.1 玻璃器皿:培養(yǎng)皿，量筒，輸液瓶(100ml,250ml)，一次性注射器。1.2 試劑:十四烷酸異丙脂(國產和進口)。培養(yǎng)基:營養(yǎng)肉湯、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液。對照菌:枯草桿菌CMCC(B)63501第三代；金黃色葡萄球菌CMCC(B)260031三代；大腸埃希菌CMCC(B)441021三代；白色念珠菌CMCC(F)98001第三代；黑曲霉菌CMCC(F)980031三代。供

3、試品：伊曲康口膠囊(批號20060106生產廠家；成都倍特藥業(yè)有限公司)。2 試驗方法更多專業(yè)、稀缺文檔請訪問一一此文檔的上傳用戶主頁2.1 常規(guī)法2.1.1 菌液制備:(1)取經35?培養(yǎng)24小時，金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌的肉湯培養(yǎng)物1ml加9ml無菌生理鹽水，10倍稀釋至10-5,10-7，細菌數(shù)約為50,100cfu/ml，做活菌計數(shù)備用。(2)取經25?培養(yǎng)24小時的白色念珠菌霉菌液體培養(yǎng)物1ml加9ml無菌生理鹽水，10倍稀釋至10-5,10-7，細菌數(shù)約為50,100cfu/ml，做活菌計數(shù)備用。(3)取經25?培養(yǎng)1周的黑曲霉菌斜面培養(yǎng)物，加5ml鹽水洗下霉菌孢子，吸

4、取出菌液，然后取1ml加9ml無菌生理鹽水，逐管10倍稀釋為10-4，細菌數(shù)約為50,100cfu/ml，做活菌計數(shù)備用。2.1.2 供試液的制備：取伊曲康唾10g,加pH值為7.0的無菌氯化鈉-蛋白陳緩沖液200ml，45?保溫，使膠囊溶解，使分散均勻，制得1?20供試液，分別人工污染上述5種代表試驗菌株。再加15,20ml瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)24,72小時觀察結果細菌與霉菌計數(shù)，測定回收率。2.1.3 該供試品對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌的回收率試驗均高于70%，可采用常規(guī)方法檢驗。對白色念珠菌、黑曲霉菌有很強的抗菌活性，供試品回收率為0%，均低于70%。2.2

5、采用十四烷酸異丙脂提取將有抑菌成分的物質轉移至油相、水相用于試驗。2.2.1 提取液的篩選試驗:取本品10g，加45?pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液200ml，使分散均勻，取該1?20供試液上清液10ml置于100ml輸液瓶中，分別加無菌十四烷酸異丙脂20 ml 、 30 ml 、 40 ml 、 50 ml ，充分振搖，將輸液瓶倒置，靜置使油水明顯分層，分別取其水層1ml加入平皿，分別人工污染白色念珠菌、黑曲霉菌2種試驗菌株，再加15,20ml瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)72小時觀察結果細菌與霉菌計數(shù)，測定回收率。結果見表1。2.2.2 稀釋液回收率試驗:十四烷酸異丙脂50ml中

6、加入稀釋液（pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液）10ml共5瓶，分別人工污染枯草桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌5更多專業(yè)、稀缺文檔請訪問一一此文檔的上傳用戶主頁種試驗菌株，振搖5分鐘，倒置分層，分別取其水層1ml加入平皿。再加15,20ml瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)48,72小時觀察結果細菌與霉菌計數(shù)，測定回收率。結果見表2。另取十四烷酸異丙脂油層平皿計數(shù)，均無菌生長。表1結果證明，采用提取法加入提取液50ml時可消除供試品對人工污染白色念珠菌和黑曲霉菌的抑菌作用，回收率達到70%以上。表2結果說明，細菌和真菌基本上存在水相，稀釋液回收率80,以上。因此，提取

7、法可用于伊曲康唑膠囊的霉菌檢查。3 討論3.1 供試品為膠囊劑，需45?水浴保溫使囊殼溶解;其內容物為包衣顆粒，需用勻漿儀或研細方法讓供試品分散均勻;1?10的濃度比較黏稠，雖然伊曲康唑對細菌沒有抑菌作用，也將細菌和大腸埃希菌檢查都采用1?20。3.2 霉菌檢查時不能將十四烷酸異丙脂直接加入供試品中;十四烷酸異丙脂用量太大，成本太高。吸取上清液10ml時應注意不要吸入顆粒，否則會堵塞注射器針頭;分層后用注射器緩慢吸取下層水相，注意不要吸取到十四烷酸異丙脂層。3.3 伊曲康唑在十四烷酸異丙脂中有紫外吸收，我們用紫外檢查的方法對提取液油相進行測定，以檢查提取液是否提取完全，20ml，30ml，40ml，50ml，提取后，取水相又用十四烷酸異丙脂第二次提取，測定十四烷酸異丙脂層的吸收值，理論上提取液應有線性關系，但試驗結果不理想。微生物限度檢查的供試品制備主要目的是檢查微生物，在制樣時與含量測定要求不同，所用溶劑不同。3.4 進口與國產的十四烷酸異丙脂回收率進行