人教教學(xué)專題課題微生物的實驗室培養(yǎng)學(xué)案

1、微生物的實驗室培養(yǎng)復(fù)習(xí)學(xué)案 【復(fù)習(xí)目標(biāo)】知識目標(biāo)：1.舉例說明有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識2.概述無菌操作技術(shù)包括的主要內(nèi)容能力目標(biāo)：掌握純化大腸桿菌的基本操作【復(fù)習(xí)重難點】重點：說出有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識難點：微生物培養(yǎng)中的有關(guān)實驗操作一、基礎(chǔ)知識（一）培養(yǎng)基1.培養(yǎng)基的種類：按物理性質(zhì)分類包括 培養(yǎng)基、 培養(yǎng)基和 培養(yǎng)基，按化學(xué)性質(zhì)分為 培養(yǎng)基和 培養(yǎng)基，按功能分類分為 培養(yǎng)基和 培養(yǎng)基。2.培養(yǎng)基的化學(xué)成分一般都含有 、 、 、 四類營養(yǎng)成分。3.在提供上述幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對 、 _ 以及 等的要求。例如：培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加 ；培養(yǎng)霉菌時需要將培養(yǎng)

2、基的PH調(diào)至 ；培養(yǎng)細(xì)菌時需要將培養(yǎng)基的PH調(diào)至 ；培養(yǎng)厭氧微生物時需要提供 的條件。（二）無菌技術(shù)1.獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止 。避免雜菌污染的方法主要包括以下四個內(nèi)容：對實驗操作的 、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和 。將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行 。 為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在_附近進(jìn)行。 實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與_相接觸。 2.消毒和滅菌（1）消毒是指使用_僅殺死物體表面或_的部分微生物（不包括_和_）。常用的消毒方法有 、 。此外，人們也常使用化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒，如用 、 等。此外，實驗室里還用 或 進(jìn)行消毒。（2）滅菌是指使用強烈的理

3、化因素殺死物體_的微生物，包括芽孢和孢子。常用的滅菌方法有 、 、 ，二、實驗操作本實驗用_培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌的純化培養(yǎng)，可分成_和_兩個階段進(jìn)行。1.制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 倒平板2.純化大腸桿菌微生物接種的方法中最常用的是 和 。（1）平板劃線法是指接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面_的操作，將聚集的菌種_到培養(yǎng)基的表面。(2)稀釋涂布平板法是指將菌液進(jìn)行一系列的_，然后將不同_的菌液分別涂布在瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度 的菌液時，聚集在一起的微生物將被分散成_，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的_。三、結(jié)果分析與評價1.如果接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上生長的菌落顏色、形狀、大小基本一致，說

4、明接種符合要求。2.若培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中_未達(dá)到要求。3._的作為對照的培養(yǎng)基，在培養(yǎng)過程中出現(xiàn)了菌落，則說明培養(yǎng)基_不徹底，實驗失敗。四、菌種的保存1.對于頻繁使用的菌種，我們可以采用 法，菌落長成后放入 的冰箱中保藏。2.對于需要長期保存的菌種，可以采用 法，菌液與甘油充分混勻后放在 的冷凍箱中保存。填表：消毒與滅菌的比較課后練習(xí)1.下列措施中不屬于消毒的是（ ）A.酒精擦拭雙手 B.向水中通入少量Cl2 C.皮膚受傷處涂紫藥水 D.灼燒接種環(huán)2.有關(guān)平板劃線操作的敘述，正確的是（ ）A.使用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)皿，操作過程中不再滅菌B.打開含菌種的試管需通過火焰滅菌

5、，取出菌種后需馬上塞上棉塞C.把皿蓋打開，將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線即可D.最后將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3.下列有關(guān)平板劃線接種法的操作錯誤的是（ ）A.將接種環(huán)放在火焰上燃燒 B.將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液C.蘸取菌液和劃線要在火焰旁進(jìn)行 D. 接種環(huán)劃線要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連4.關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述錯誤的是（ ）A.操作順序為計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌 B.將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯C.等培養(yǎng)基冷卻至500C左右時進(jìn)行倒平板 D.將平板冷卻凝固5-10分鐘后將平板倒過來放置5.細(xì)菌培養(yǎng)過程分別采用了高壓蒸汽

6、、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理，這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌（ ）A. 接種環(huán)、手、培養(yǎng)基 B.高壓鍋、手、接種環(huán) C.培養(yǎng)基、手、接種環(huán) D.接種環(huán)、手、高壓鍋6.有關(guān)稀釋涂布平板法的敘述錯誤的是()A.首先將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋 B.然后將不同稀釋度的菌液分別涂布在瓊脂固體培養(yǎng)基的表面C.適宜條件下培養(yǎng) D.結(jié)果都可在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落7. 如右圖是微生物平板劃線示意圖。劃線的順序為12345。下列操作方法正確的是()A操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌 B劃線操作須在火焰上進(jìn)行C在5區(qū)域中才可以得到所需菌落 D在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)滅菌8.為了保

7、持菌種的純凈需要進(jìn)行菌種的保藏，下列有關(guān)敘述不正確的是()A.對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法 B.臨時保藏的菌種一般接種到試管的斜面培養(yǎng)基上 C.臨時保藏的菌種容易被污染或產(chǎn)生變異 D.對于需要長期保存的菌種，可以采用低溫-40C保藏的方法9涂布平板操作需要用到 (    ) A接種環(huán)、滴管、酒精燈 B接種環(huán)、移液管、酒精燈C涂布器、移液管、酒精燈 D涂布器、接種環(huán)、酒精燈 10作為自養(yǎng)生物唯一碳源的是（  ） A糖類  B 石油   C 二氧化碳    D 花生粉餅11.（2009

8、·寧夏理綜，40）（1）在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮、和滲透壓等條件。（2）在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行 處理（消毒、滅菌），其中對培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌常用的方法是；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗。（3）若用稀釋涂布平板法計數(shù)大腸桿菌活菌的個數(shù)，要想使所得估計值更接近實際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測樣品稀釋的。（4）通常，對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對細(xì)菌進(jìn)行初步的。（5）培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是 。（6）若用大腸桿菌進(jìn)行實驗，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)

9、物必須經(jīng)過處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴散。12. （2010年重慶理綜）炭疽病是由炭疽桿菌引起的一種人畜共患傳染病。炭疽桿菌兩端截平、呈竹節(jié)狀排列，菌落呈卷發(fā)狀。對炭疽病疑似患者，可根據(jù)噬菌體的宿主專一性，通過實驗確診。（1）細(xì)菌培養(yǎng)：采集疑似患者的樣本，分離培養(yǎng)，獲得可疑菌落。（2）細(xì)菌鑒定：實驗流程如下圖所示。對配制的液體培養(yǎng)基等需采取 方法滅菌；實驗所用液體培養(yǎng)基的碳源為 （填“無機碳”或“有機碳”）。挑選可疑菌落制片后，用 觀察，可看到呈竹節(jié)狀排列的桿菌。接種可疑菌后，35培養(yǎng)24小時，液體培養(yǎng)基變渾濁，原因是 。對照組試管中應(yīng)加入 ，與實驗組同時培養(yǎng)6小時后，若實驗組液體培養(yǎng)基的

10、渾濁度比對照組 （填“高”或“低”），則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染；反之則排除。對排除的疑似患者及易感人群，可接種炭疽桿菌疫苗，刺激機體產(chǎn)生相應(yīng)抗體，與產(chǎn)生抗體相關(guān)的細(xì)胞除T細(xì)胞、B細(xì)胞外，還有 。答案：1-10 DDDAC DDDCC11.（1）PH 溫度（2）滅菌 干熱滅菌 消毒（3）比例合適（4）鑒定（5）將未接種的培養(yǎng)基在適宜溫度下放置適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生（6）滅菌12.（2）高壓蒸汽 有機碳 顯微鏡 細(xì)菌大量繁殖 等量生理鹽水 低 吞噬細(xì)胞、漿細(xì)胞 答案：1-10 DDDAC DDDCC11.（1）PH 溫度（2）滅菌 干熱滅菌 消毒（3）比例合適（4）鑒定（5）

11、將未接種的培養(yǎng)基在適宜溫度下放置適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生（6）滅菌12.（2）高壓蒸汽 有機碳 顯微鏡 細(xì)菌大量繁殖 等量生理鹽水 低 吞噬細(xì)胞、漿細(xì)胞 答案：1-10 DDDAC DDDCC11（1）PH 溫度（2）滅菌 干熱滅菌 消毒（3）比例合適（4）鑒定（5）將未接種的培養(yǎng)基在適宜溫度下放置適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生（6）滅菌12.（2）高壓蒸汽 有機碳 顯微鏡 細(xì)菌大量繁殖 等量生理鹽水 低 吞噬細(xì)胞、漿細(xì)胞 答案：1-10 DDDAC DDDCC11.（1）PH 溫度（2）滅菌 干熱滅菌 消毒（3）比例合適（4）鑒定（5）將未接種的培養(yǎng)基在適宜溫度下放置適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生（6）滅菌12.（2）高壓蒸汽