免疫層析技術(shù)在微囊藻毒素檢測(cè)中的應(yīng)用

1、免疫層析技術(shù)在微囊藻毒素檢免疫層析技術(shù)在微囊藻毒素檢測(cè)中的應(yīng)用測(cè)中的應(yīng)用指導(dǎo)教師：答辯人：班級(jí)： 學(xué)號(hào)：一、選題背景一、選題背景 近年來(lái)近年來(lái), 水體富營(yíng)養(yǎng)化已經(jīng)成為全球關(guān)注水體富營(yíng)養(yǎng)化已經(jīng)成為全球關(guān)注的環(huán)境熱點(diǎn)問(wèn)題。富營(yíng)養(yǎng)化直接導(dǎo)致藻類的環(huán)境熱點(diǎn)問(wèn)題。富營(yíng)養(yǎng)化直接導(dǎo)致藻類大量生長(zhǎng)大量生長(zhǎng), 藻類會(huì)產(chǎn)生毒素。微囊藻毒素是藻類會(huì)產(chǎn)生毒素。微囊藻毒素是其中的最常見的一種具有肝毒性，腎毒性，其中的最常見的一種具有肝毒性，腎毒性，生殖毒性，免疫系統(tǒng)毒性的環(huán)狀七肽化合生殖毒性，免疫系統(tǒng)毒性的環(huán)狀七肽化合物。物。 而微囊藻毒素是一種化學(xué)性質(zhì)和化學(xué)結(jié)而微囊藻毒素是一種化學(xué)性質(zhì)和化學(xué)結(jié)構(gòu)都很穩(wěn)定的化合物，常規(guī)

2、飲用水處理技術(shù)構(gòu)都很穩(wěn)定的化合物，常規(guī)飲用水處理技術(shù)不能直接有效地脫除水體中的微囊藻毒素，所以不能直接有效地脫除水體中的微囊藻毒素，所以目前快速檢測(cè)和控制微囊藻毒素顯得極為重要。目前快速檢測(cè)和控制微囊藻毒素顯得極為重要。 二、微囊藻毒素的研究現(xiàn)狀二、微囊藻毒素的研究現(xiàn)狀 就目前來(lái)說(shuō)針對(duì)微囊藻毒素的檢測(cè)方法有就目前來(lái)說(shuō)針對(duì)微囊藻毒素的檢測(cè)方法有生物生物測(cè)試法測(cè)試法，化學(xué)分析法化學(xué)分析法，生物化學(xué)分析法生物化學(xué)分析法等等。生物等等。生物測(cè)試法操作快速、簡(jiǎn)便，靈敏度較低，專一性不高。測(cè)試法操作快速、簡(jiǎn)便，靈敏度較低，專一性不高。化學(xué)分析法準(zhǔn)確度和靈敏度高，但該方法儀器昂貴，化學(xué)分析法準(zhǔn)確度和靈敏度高

3、，但該方法儀器昂貴，操作繁瑣。生物化學(xué)分析法靈敏度高，但選擇性差。操作繁瑣。生物化學(xué)分析法靈敏度高，但選擇性差。為了適應(yīng)我國(guó)環(huán)保工作的現(xiàn)狀要求，水體中微囊藻為了適應(yīng)我國(guó)環(huán)保工作的現(xiàn)狀要求，水體中微囊藻毒素的檢測(cè)方法的發(fā)展趨勢(shì)是低成本、便于攜帶、毒素的檢測(cè)方法的發(fā)展趨勢(shì)是低成本、便于攜帶、準(zhǔn)確快速、操作簡(jiǎn)便和靈敏度高。準(zhǔn)確快速、操作簡(jiǎn)便和靈敏度高。三、免疫層析技術(shù)三、免疫層析技術(shù) 免疫層析技術(shù)是一種將免疫技術(shù)和色譜層析免疫層析技術(shù)是一種將免疫技術(shù)和色譜層析技術(shù)相結(jié)合的快速免疫分析方法。其原理是以條技術(shù)相結(jié)合的快速免疫分析方法。其原理是以條狀纖維層析材料為固相，借助毛細(xì)作用使樣品溶狀纖維層析材料為

4、固相，借助毛細(xì)作用使樣品溶液在層析條上移動(dòng)，同時(shí)，液在層析條上移動(dòng)，同時(shí)， 使樣品中的待測(cè)物與使樣品中的待測(cè)物與層析材料上針對(duì)待測(cè)物的受體（如抗體或抗原）層析材料上針對(duì)待測(cè)物的受體（如抗體或抗原）發(fā)生高特異、高親和性的免疫反應(yīng)，發(fā)生高特異、高親和性的免疫反應(yīng)， 層析過(guò)程中層析過(guò)程中免疫復(fù)合物被富集或截留在層析材料的一定區(qū)域免疫復(fù)合物被富集或截留在層析材料的一定區(qū)域（檢測(cè)帶），通過(guò)酶促顯色反應(yīng)或直接使用可目（檢測(cè)帶），通過(guò)酶促顯色反應(yīng)或直接使用可目測(cè)著色標(biāo)記物短時(shí)間便可得到直觀的試驗(yàn)結(jié)果。測(cè)著色標(biāo)記物短時(shí)間便可得到直觀的試驗(yàn)結(jié)果。 免疫層析技術(shù)又叫做免疫層析試紙條技術(shù)，免疫層析試紙條的結(jié)構(gòu)主要包

5、括PVC底板，樣品墊，結(jié)合墊，NC膜，吸收墊。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、金納米籠的制備、金納米籠的制備 2、金納米籠標(biāo)記抗體的制備、金納米籠標(biāo)記抗體的制備 3、免疫層析試紙條的制備、免疫層析試紙條的制備4、不同濃度的微囊藻毒素的檢測(cè)、不同濃度的微囊藻毒素的檢測(cè) 金納米籠的制備實(shí)質(zhì)上是往一定量的金溶金納米籠的制備實(shí)質(zhì)上是往一定量的金溶液中加入一定量的還原劑使金離子變成金原液中加入一定量的還原劑使金離子變成金原子。我們本次做的實(shí)驗(yàn)是往子。我們本次做的實(shí)驗(yàn)是往HAuCl4溶液中加溶液中加入還原劑抗壞血酸。入還原劑抗壞血酸。 金標(biāo)抗體的制備實(shí)質(zhì)上是蛋白質(zhì)等生物大分子在等于或略高于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)時(shí)容易與金納米籠結(jié)合形成牢固的復(fù)合物。我們本次實(shí)驗(yàn)是先把金納米籠溶液的pH調(diào)至9，再往里加微囊藻毒素抗體。不同濃度的微囊藻毒素的檢測(cè)不同濃度的微囊藻毒素的檢測(cè) 該圖表明不同濃度的抗原，所得到的峰面積不同，可以以此為根據(jù)進(jìn)行微囊藻毒素的定量檢測(cè)。 緩沖底液對(duì)檢測(cè)的影響 由以上圖可以看出，用PBS+Tween作為緩沖底液來(lái)稀釋抗原對(duì)檢測(cè)的效果最好。五、總結(jié) 免疫層析技術(shù)可以高效快速的對(duì)微囊藻免疫層析技術(shù)可以高效快速的對(duì)微囊藻 毒素進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。免疫層析技術(shù)毒素進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。免疫層析技術(shù)的這些特點(diǎn)克服了傳統(tǒng)檢測(cè)方法時(shí)間長(zhǎng)，的這些特點(diǎn)克服了傳統(tǒng)檢測(cè)方法時(shí)間長(zhǎng)，操作過(guò)程復(fù)雜，需要大型