手針刺激大鼠腎俞穴對下丘腦室旁核功能狀態(tài)的影響

1、    手針刺激大鼠腎俞穴對下丘腦室旁 核功能狀態(tài)的影響         摘要目的為探討PVN與“腎俞”穴針刺效應(yīng)的關(guān)系提供形態(tài)學證據(jù)。方法以大鼠為對象，采用免疫細胞化學ABC法，探討了手針刺激大鼠右“腎俞”穴誘導的c-fos在PVN中的表達。結(jié)果PVN中FLN密度值組間、組內(nèi)差異顯著(P0.01)，手針組對照組空白組；手針組對側(cè)同側(cè)。結(jié)論手針刺激右“腎俞”穴對PVN神經(jīng)元具有激活作用；PVN神經(jīng)元對同一方法刺激單側(cè)“腎俞”穴的這種反應(yīng)上的兩側(cè)差異，可能是導致“腎俞

2、”穴針刺效應(yīng)同側(cè)與對側(cè)差異的重要環(huán)節(jié)之一。關(guān)鍵詞手針腎俞穴下丘腦室旁核c-fos動物實驗中國書分類號R224.1Effect of acupuncturing Shenshuon Point PVN in RatsChen Zebin, et alDept. of Anatomy, HuBei TCM, 430061Abstract:By observing the expressions of c-fos gene in PVN,the effect of acupuncturing“Shenshu”on PVN of rats was studied with immunocytochem

3、ical way of ABC. The results showed that the densities of FLN in PVN had significantly differences between different groups(P0.01);the acupuncture groupcontrol groupblank group,non-acupuncture side acupuncture side.The results indicated that acupuncturing“Shenshu”can activate the neuron in PVN and P

4、VN plays an certain role in the affectwing of acupuncturing “Shenshu”.研究顯示，針刺“腎俞”穴具有影響機體下丘腦垂體腎上腺皮質(zhì)軸功能，影響腎的泌尿功能等多方面的效應(yīng)，提示神經(jīng)體液因素在這一效應(yīng)中的重要作用1，2，而作為神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)關(guān)鍵中樞核團之一的下丘腦室旁核(Hypothalanic Paraventricular nucleus, PVN，下同)對針刺“腎俞”穴反應(yīng)如何卻未見報道。為此，本文采用免疫細胞化學技術(shù)，著重觀察了手針刺激大鼠右“腎俞”穴誘導的c-fos在PVN中的表達，并對PVN及其各部分c-fos陽性神經(jīng)元

5、(Fos like immunoreactive neuron,FLN,下同)密度進行了比較，擬探討手針刺激大鼠“腎俞”穴對PVN功能狀態(tài)的影響，并為進一步探討PVN與“腎俞”穴針刺效應(yīng)的關(guān)系提供形態(tài)學依據(jù)。1材料和方法1.1材料Wistar大鼠15只，重量220250g，雌雄不限。隨機分成三組：手針組，對照組，空白組。每組5只。1.2方法3，于第二腰椎棘突下右側(cè)旁開7mm取右“腎俞”穴，直刺8mm。采用甲氧氟烷吸入加1%戊巴比妥鈉腹腔注射的復(fù)合麻醉方式。手針組：麻醉加手針；對照組：只麻醉，不刺激；空白組：不麻醉，不刺激。手針參照蔡乃真的方法，手捻針刺激10分鐘，留針20分鐘，運針頻率控制在4

6、次/秒，捻針幅度360°左右，中等強度42O25型0.5網(wǎng)形目鏡尺(實際劃刻面積為5mm×5mm，400倍鏡下劃刻面積為156.25?m2)進行，記數(shù)與任一測點外上角和測線(橫線)上緣交叉的FLN(核著色均勻、深染、邊界清晰)。每片于PVN各部相應(yīng)處取二視野，分別計數(shù)，取均值即為該片該部的FLN密度值。將三片的相應(yīng)值累加取均值，依此即得該鼠一側(cè)PVN各部、一側(cè)PVN和雙側(cè)PVN的FLN密度值。終值單位為：個/156.25?m22實驗結(jié)果2.1鏡下觀察Fos陽性細胞表達呈現(xiàn)在細胞核上，呈深藍色，胞漿未著色，核為圓形或卵圓形，背景基本無色。2.2FLN在PVN及其各部(雙側(cè))的

7、表達密度及其組間兩兩比較(見表1)。2組別nPaVPaMPPaLMPaDCPVN手針組512.38±0.4116.34±0.538.75±0.8413.30±0.5012.75±0.31對照組58.55±0.1614.13±1.136.51±0.305.54±0.218.71±0.19空白組52.42±0.844.05±0.251.59±0.221.88±0.292.43±0.30*     注：F檢驗P0

8、.01，*組間比較P0.01。PaV：室旁核腹側(cè)部。PaMP：室旁核內(nèi)側(cè)小細胞。.PaLM：室旁核外側(cè)大細胞部。PaDC：室旁核背側(cè)小帽。由表中可以看出，F(xiàn)LN在各組PVN及其各部雙側(cè)(指兩側(cè)合并的平均密度)的密度存在差異。在F檢驗(P0.01)基礎(chǔ)上進行的Q檢驗，顯示彼此間差異顯著(P0.01)。說明麻醉刺激對PVN神經(jīng)元具有影響；但手針組刺激對PVN神經(jīng)元的激活作用是在麻醉刺激基礎(chǔ)上的進一步加強，且對PVN各部分神經(jīng)元均具有激活作用。2.3FLN 在PVN及其各部(單側(cè))的分布密度及組內(nèi)同側(cè)、對側(cè)比較(見表2) 2組別n側(cè)別PaVPaMPPaLMPaDCPVN手針組5同側(cè)10.17

9、7;0.43*15.92±0.747.83±0.43*13.08±0.5711.75±0.38*對側(cè)14.59±0.4216.75±0.3210.17±0.4313.50±0.4313.75±0.24對照組5同側(cè)8.73±0.5414.25±0.886.59±0.425.58±0.578.79±0.10對側(cè)8.58±0.5714.00±1.476.42±0.575.50±0.438.63±0.41空白組5同

10、側(cè)2.45±0.834.25±0.321.50±0.432.00±0.272.50±0.24對側(cè)2.59±0.923.83±0.431.67±0.272.00±0.272.44±0.37     注：*與對側(cè)比較P0.01由表中可以看出，F(xiàn)LN在各組PVN及其各部的密度值是不一致的。手針組對側(cè)顯著高于同側(cè)(P0.01)，主要表現(xiàn)在PaV，PaLM兩部分，對照組和空白組同側(cè)、對側(cè)間無差異(P>0.05)。以上說明：手針組刺激激活了PVN雙側(cè)各部神經(jīng)元，

11、但以對側(cè)更為明顯，重點表現(xiàn)在對側(cè)PaV和PaLM兩部分。麻醉刺激不導致兩側(cè)差異。2.4各組PLN照片見72頁片。    3討論3.1c-fos癌基因的誘導和顯示是一種反映神經(jīng)通路的新方法，是神經(jīng)元被激活的標志5，國內(nèi)少數(shù)學者將這一方法用于針刺研究6。本研究在實施過程中，采取多項措施以防止非特異性應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生，并設(shè)立實驗對照組和空白對照組，使得能從實驗結(jié)果中有效分離出非特異性刺激所致的應(yīng)激反應(yīng)。結(jié)果顯示針刺“腎俞”穴所致PVN中FLN密度值的組間差異、組內(nèi)同側(cè)、對側(cè)差異十分顯著，甚至在同一側(cè)PVN的不同部分差異也非常明顯。因此提示：(1)手針刺激右“腎俞

12、”穴對PVN神經(jīng)元具有激活作用，PVN參與了“腎俞”穴的針刺效應(yīng)過程；(2)PVN神經(jīng)元對同一方法刺激單側(cè)“腎俞”穴的這種反應(yīng)上的兩側(cè)差異，可能是導致“腎俞”穴針刺效應(yīng)同側(cè)、對側(cè)差異的重要環(huán)節(jié)之一。3.2關(guān)于“腎俞”穴針刺效應(yīng)機理，國內(nèi)外已有一些研究報道，雖各自的研究方法和著重點不同，但結(jié)果基本一致，即神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)在針刺效應(yīng)中具有極其重要的作用1，2，4。神經(jīng)生物學研究揭示，PVN是神經(jīng)體液調(diào)節(jié)的關(guān)鍵部位之一，它既具有神經(jīng)內(nèi)分泌的功能，又參與植物神經(jīng)的控制，在實現(xiàn)交感腎上腺髓質(zhì)和下丘腦垂體腎上腺皮質(zhì)兩大系統(tǒng)的整合中起著重要作用。神經(jīng)電生理學研究顯示，電刺激PVN可引起ACTH的分泌，PVN參與調(diào)節(jié)腎交感神經(jīng)節(jié)前神經(jīng)元的傳出活動7，參與腎神經(jīng)傳入所引起的升血ACTH效應(yīng)等等8。鑒于本實驗研究的結(jié)果證明PVN參與了“腎俞”穴的針刺效應(yīng)，因而可以設(shè)想：“腎俞”穴的針刺信息，在觸發(fā)以背根節(jié)和交感神經(jīng)節(jié)為中心的中樞外反射通路和脊髓低級中樞反射通路的同時可經(jīng)背根節(jié)和脊髓的兩次整合，上行(直接或間接)入PVN，并使其神經(jīng)元激活，被激活的PVN神經(jīng)元一方面由其投射到正中隆起的纖維分泌CRF和AVP，引起垂體前葉ACTH和EP的分泌，進而影響下丘腦垂體腎上腺皮質(zhì)