抗-轉(zhuǎn)鐵蛋白-納米金探針的制備及對(duì)轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫識(shí)別的光譜分析 - 圖文-

1、 第5期光譜學(xué)與光譜分析1399新分散PBS緩沖液中,制得修飾有抗一轉(zhuǎn)鐵蛋白的納米金探針(anti-Tf-Au,于4保存待用。制備過(guò)程如圖1所示。1Schematic diagram for the anti-Tf-Aufabrication and Tf immlme recognition1.2.3共振瑞利散射(RRS光譜室溫下,分別取適量的納米金、aIlti-Tf-Au探針溶液于石英比色皿中,置于熒光分光光度計(jì)上,同步掃描(k= A。,記錄RRS光譜,同樣方法測(cè)定納米金探針與Tf識(shí)別的光譜變化(反應(yīng)10rain,測(cè)定470IlrIl處的RRS強(qiáng)度JR娼和試劑空白的RRS強(qiáng)度Jo,fR娼=

2、J脯一Jo。2結(jié)果與討論2.1antbTf-Au探針的表征2.1.1刪對(duì)納米顆粒的表征圖2分別為納米金和anti-T-Au探針的TEM圖。所制備的納米金為表面圓滑的球形粒子,分散性良好,粒度在20 25nm。經(jīng)過(guò)anti-Tf修飾后,納米顆粒的粒度增加到45 65nlil,且顆粒邊緣出現(xiàn)棱角形狀,表明抗體分子已被固定到納米金顆粒表面。.2TEM i日薩of aat盱Au(aand anti-Tf-Au probe(b2.1.2激光散射的表征采用激光散射儀分別對(duì)納米金和anti-Tf-Au探針進(jìn)行表征,納米金的平均粒度為21.9Rill,粒度分布均勻;anti-Tf 修飾后,anti-Tf-Au

3、探針的平均粒度增加到61.6nrll,與TEM結(jié)果基本一致。2.1.3納米顆粒的Uv-s吸收光譜納米金于525nm處有一吸收峰,顯示其粒徑應(yīng)為20 30n“¨】,經(jīng)antiTf修飾的antkTb Au探針在280nm處出現(xiàn)蛋白質(zhì)的特征吸收峰,并且525nnl處的吸收峰下降、變寬并紅移,說(shuō)明anti-Tf已經(jīng)被修飾到納米金表面。2.2納米顆粒的RRS光譜圖3曲線1和2分別為納米金及其修飾了Cys的I璐光譜,曲線3和4分別是不加人及加入引發(fā)刺EDC,Cys-Au 與anti'Tf結(jié)合的RRS光譜?？梢?jiàn),納米金在470腫處有一尖銳的較弱的RRS峰,在EDC引發(fā)下,能夠引發(fā)抗體末端F

4、c區(qū)域的羧基【ls與半胱胺表面的氨基共價(jià)結(jié)合形成較穩(wěn)定的肽鍵,更多的anti-TI得以穩(wěn)定連接到納米金上。使納米粒的平均粒徑增大,導(dǎo)致其470nm處RRS峰明顯增大。因此,本文以修飾上anti-Tf的納米金為探針,以470nrnRRS峰為分析信號(hào),對(duì)抗原轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫識(shí)別進(jìn)行分析。500400300200100O400洲800Wave.1engthhtmFi昏3RRS spectra at"nanoparticles at different stages1:6.6×105molL一1nano-Au,2;6.6×105molL一1Cys-Au; 3:6.6X105m

5、o卜L一1antiTf-Au probe in absence of E阢l4:6.6×105molL一1antiTf-Au probe in preaence of0.251710lLl EDC2.3anti-Tf-Au探針對(duì)抗原1rf免疫識(shí)別及信號(hào)放大作用Tf在一定濃度下于470nin處有較弱的RRS峰信號(hào)(見(jiàn)圖4。當(dāng)Tf濃度較高時(shí)(1.o5.0×10-9molL叫,濃度與RRS峰強(qiáng)度有一定的線性關(guān)系,但靈敏度及選擇性較差;而在低濃度范圍(10“omolL一數(shù)量級(jí),峰信號(hào)很弱,且與Tf濃度線性關(guān)系很差。將anti-Tf修飾在納米金表面后,其470nm處的特征峰尖銳靈敏。

6、當(dāng)anti-Tf-Au探針與溶液中低濃度的Tf特異性識(shí)別,使470nnl處的散射峰明顯增強(qiáng)Wavelength/ran陋4RRS恥ctra of"I f,anti-'IT-An pmbeand antFTf-An probe recognition Tf1:2.5×109molLl Tf;2:6.6×105腫IL一1antiTf.Au probe;3:6.6×105molL一1antiTf-Au probe+2.5×109molLl Tf 抗-轉(zhuǎn)鐵蛋白-納米金探針的制備及對(duì)轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫識(shí)別的光譜分析作者:楊培慧, 韋煒, 蔡懷鴻, 馮竟

7、, 蔡繼業(yè), YANG Pei-hui, WEI Wei, CAI Huai-hong , FENG Jing, CAI Ji-ye作者單位:暨南大學(xué)化學(xué)系,廣東,廣州,510632刊名: 光譜學(xué)與光譜分析英文刊名:SPECTROSCOPY AND SPECTRAL ANALYSIS年,卷(期:2009,29(5參考文獻(xiàn)(15條1.Savka I Storva;Fengwei Huo;Jae-Seung查看詳情 20052.Sangyeop Lee;Sungyong Kim查看詳情 20073.Kyungsuk Yum K S;Han Na Cho H N;Hu H查看詳情 2007(054.

8、Liu S P;Yang Z;Liu Z F查看詳情 2006(015.石登榮;張濤;任麗萍阿特拉津與蛋白質(zhì)結(jié)合反應(yīng)及其在測(cè)定蛋白質(zhì)中的應(yīng)用期刊論文-光譜學(xué)與光譜分析2006(036.鄧俊耀;孫雙嬌;蔣治良免疫球蛋白G的免疫共振散射光譜分析期刊論文-光譜學(xué)與光譜分析 2006(087.Long X F;Miao Q;Bi S P查看詳情 2004(028.劉江濤;劉忠芳;劉紹璜查看詳情 2007(029.Jiang Z L;Liu Q Y;Liu S P查看詳情 2002(1210.何佑秋;劉紹璞;劉忠芳金納米微粒作探針共振瑞利散射光譜法測(cè)定卡那霉素期刊論文-化學(xué)學(xué)報(bào) 2005(1111.魯群

9、岷;劉忠芳;劉紹璞金納米微粒作探針共振瑞利散射法測(cè)定某些蒽環(huán)類(lèi)抗癌藥物期刊論文-化學(xué)學(xué)報(bào)2007(0912.Peter T Gomme;Karl B查看詳情 2005(0413.Frens G查看詳情 197314.蔣治良;李芳;李廷盛共振散射光強(qiáng)度與金粒子粒徑的關(guān)系期刊論文-高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào) 2000(1015.Manuel Fuentes;Cesar Mateo;Guisan J M查看詳情 2005本文讀者也讀過(guò)(3條1.王楠.徐淑坤.王文星.Wang Nan.Xu Shukun.Wang Wenxing納米金生物探針及其應(yīng)用期刊論文-化學(xué)進(jìn)展2007,19(22.鄧俊耀.張聲森.蔣治良.DENG Jun-yao.ZHANG Sheng-