實(shí)驗(yàn)二真菌形態(tài)觀察(一)

1、實(shí)驗(yàn)二、真菌形態(tài)觀察（一）1目的：認(rèn)識(shí)真菌營養(yǎng)體及變態(tài)，認(rèn)識(shí)真菌無性和有性孢子類型。掌握鞭毛菌亞門和接合菌亞門的主要形態(tài)特征。掌握臨時(shí)玻片的制作方法和繪圖技術(shù)。2原理： 真菌營養(yǎng)生長階段的結(jié)構(gòu)稱為營養(yǎng)體，當(dāng)營養(yǎng)生長進(jìn)行到一定時(shí)期，就開始轉(zhuǎn)入繁殖階段，形成繁殖體，即子實(shí)體。營養(yǎng)體主要為菌絲體，主要變態(tài)有吸器、假根、菌核、子座以及根狀索菌等。繁殖體主要包括無性孢子和有性孢子。 通常制作臨時(shí)玻片來觀察病原物在植物上著生的情況以及病原物的形態(tài)特征。3材料用具番茄晚疫病菌裝片，辣椒疫霉病菌裝片，黑根霉裝片，酵母菌懸浮液等培養(yǎng)真菌，植物病害組織。挑針，刀片，木塊，酒精燈，火柴，載玻片，蓋玻片，紗布，乳酚油

2、，二甲苯，顯微鏡，吸水紙，擦鏡紙。投影儀，多媒體課件等。4內(nèi)容與方法（自己寫，包括主要內(nèi)容即可）4.1 臨時(shí)玻片41 .1浮載劑 制作臨時(shí)玻片都要使用浮載劑，浮載劑的作用是防止材料干燥和集中光線，以利于顯微鏡下觀察。浮載劑的種類很多，最常用的是水和乳酚油，其次是甘油、甘油明膠，希爾浮載劑等。(1)水：水浮載劑一般使用蒸餾水，應(yīng)用最為方便。對(duì)細(xì)菌、真菌孢子等無不利影響。觀察細(xì)菌、線蟲活動(dòng)，真菌孢子萌發(fā)都必須用水作浮載劑。測(cè)量真菌菌絲直徑和真菌孢子大小時(shí)也以水作浮載劑為好。但是用水作浮載劑制片時(shí)較易形成氣泡，制成的玻片也易干燥而不能保存。 (2)乳酚油：乳酚油長期以來一直是真菌學(xué)和植物病理學(xué)工作者

3、習(xí)慣使用的浮載劑。乳酚油的組成如下：苯酚結(jié)晶(加熱熔化)20ml，乳酸20ml，甘油40ml、水20ml。各成分混合后成為油狀粘稠液體，具殺死和固定病原物的作用，可使干癟的真菌孢子膨脹復(fù)原，還可使病組織變得略為透明。如在乳酚油中加入005-01的染料制成棉藍(lán)乳酚油，藏紅乳酚油等，還能使菌絲或孢子略微著色，更便于觀察。用乳粉油制作的玻片可長期保持濕潤不會(huì)干燥，它的缺點(diǎn)中，很難精確測(cè)量病原物的大小。另外，乳酚油能與許多封固劑起作用，蓋玻片也易滑動(dòng)，不易封固。41.2 臨時(shí)玻片的制作 臨時(shí)玻片制作方法很多，如涂，撕、粘，挑和切片等，可根據(jù)病原物的類型選擇使用。(1)涂抹法，細(xì)菌和酵母菌的培養(yǎng)物常用涂

4、抹法制片。將細(xì)菌或酵母菌的懸浮液均勻地涂在潔凈的載玻片上，在酒精燈火焰上烘干，固定，再加蓋玻片封固。加蓋玻片前還可進(jìn)行染色處理，使菌體或鞭毛著色而易于觀察。(2)撕取法，用小金屬鑷子仔細(xì)撕下病部表皮或表皮毛制成臨時(shí)玻片。此法可以觀察著生在寄主或基物表面的菌絲和孢子，寄主表皮細(xì)胞內(nèi)的真菌菌絲、吸器和休眠孢子囊堆，以及病毒病的內(nèi)含體等。試以小麥白粉病葉，煙草花葉病病葉，蠶豆花葉病葉，受禾谷多粘茵為害的小麥病根等為材料，用撕取法制作臨時(shí)玻片，觀察病原物的形態(tài)。(3)粘貼法：將塑料膠帶紙剪成邊長5mm左右的小塊，使膠面朝下貼在病部，輕按一下后揭下制成玻片。粘貼法用于菌絲或子實(shí)體著生于病組織或基物衷面的

5、材料制片，特別適用于觀察分生袍子在分生抱子梗上的著生情況。(4)挑取法，采用挑取法可以直接用挑針從病組織或基物(如培養(yǎng)基)上挑取表面的霉?fàn)钗?、粉狀物或孢子團(tuán)制成玻片。也可以先將埋生或半埋生的真菌子實(shí)體(如子座、分生孢子器，于囊殼等)連同部分病組織一同排列在載玻片上，再用挑針將病菌子實(shí)體剝離出來制片。還可以用刀片刮取或用小鑷子鑷取病部子實(shí)體來制片。(5)組織透明法：用水合氯醛或乳酚油或氫氧化鉀液將病組織整體透明后再制成玻片。用于觀察寄主組織內(nèi)的細(xì)菌、真菌菌絲。吸器，子實(shí)體等，可以觀察到病原物在寄主內(nèi)的原有狀態(tài)。取病組織小塊浸在乳酚油內(nèi)煮30分鐘，材料透明后取出制片。如病原物結(jié)構(gòu)無色時(shí)還可加棉藍(lán)，

6、苯胺藍(lán)或酸性品紅等染料染色。少量病組織材料可以放在載玻片上，滴加乳酚油后在酒精燈上徐徐加熱至蒸氣出現(xiàn)。如此處理數(shù)次，待組織透明后加蓋玻片進(jìn)行鏡檢。(6)徒手切片：徒手切片是日常制作臨時(shí)玻片時(shí)最常用的一種方法。制成的玻片可保持寄主組織和病原物原有的色澤，還可以觀察病組織和病原物的解剖結(jié)構(gòu)。切得好的徒手切片并不比石蠟切片差，而且非常方便。用樹脂，指甲油或油漆封固后還可以作為半永久玻片保存。選取病狀典型，病征明顯的病組織材料制作徒手切片，先在病健交界處切取病組織小塊(邊長58mm)，一般的葉片或莖稈皮層組織可直接放在載玻片上或小木塊上，用食指輕輕壓住，隨著手指慢慢地后退，用刀片將壓住的病組織小塊切成

7、很薄的絲或片，切下的薄片立即放在盛有清水的培養(yǎng)皿或載玻片上的水滴中，用挑針或接種針挑取薄而合適的材料放在另一干凈載玻片上的浮載劑液滴中央，蓋上蓋玻片，仔細(xì)擦去多余的浮載劑，即制成一張臨時(shí)玻片。病材料較粗大堅(jiān)硬的，可用手指捏緊后用鋒利的剃刀或單面刀片切。材料較小而柔軟的，可夾在新鮮的胡蘿卜或馬鈴薯塊中間，連同夾持物一起切成薄片， 以下的制作步驟同葉片病組織制片。病組織材料很干燥的， 為防止切片時(shí)發(fā)生破碎，可先沾少量水濕潤軟化后再切。徒手切片獲得的是病組織及病原物的剖面薄片， 因而能夠觀察著生于寄主表面的病原物形態(tài)，也能夠觀察寄主組織內(nèi)部的病原物。如寄主薄壁細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌、埋生于寄主組織內(nèi)的真菌子實(shí)體結(jié)構(gòu)等等。此外，徒手切片還可以用來觀察和研究寄主組織的病理變化情況。如分期或分段取病組織材料做徒手切片，能夠觀察病原物的侵染過程，病原物在寄主組織內(nèi)的擴(kuò)展情況，以及寄主組織本身的病理反應(yīng)和變化等。4.2 鞭毛菌疫霉屬(Phytophthora)：觀察番茄晚疫病裝片和辣椒疫霉病裝片。觀察無隔菌絲，孢子囊是什么形狀?孢囊梗和菌絲的形態(tài)有何不同?晚疫菌的孢子囊梗與菌絲的形態(tài)有明顯區(qū)別。致病疫霉鏡下圖疫霉屬，示孢子囊、孢囊梗、孢子馬鈴薯晚疫病4.3 接合菌觀察黑根霉裝片，觀察菌絲，匍匐枝