腫瘤免疫治療思考和對策

1、關(guān)于腫瘤免疫治療思考和對策第一頁，共25頁幻燈片第二頁，共25頁幻燈片第三頁，共25頁幻燈片第四頁，共25頁幻燈片第五頁，共25頁幻燈片第六頁，共25頁幻燈片第七頁，共25頁幻燈片一、樹突狀細胞在腫瘤免疫中的應(yīng)用一、樹突狀細胞在腫瘤免疫中的應(yīng)用第八頁，共25頁幻燈片z樹突狀細胞（DC）是機體內(nèi)最重要的一群抗原提呈細胞，是機體免疫應(yīng)答的有力啟動者，以DC為物質(zhì)基礎(chǔ)的免疫療法是近年來新發(fā)展起來的一種新的生物治療手段。第九頁，共25頁幻燈片DC激發(fā)腫瘤特異性免疫應(yīng)答的三個環(huán)節(jié)激發(fā)腫瘤特異性免疫應(yīng)答的三個環(huán)節(jié)z 1. 腫瘤特異性抗原的遞呈；腫瘤特異性抗原的遞呈；z2. 腫瘤特異性腫瘤特異性CTL細胞和

2、非特異性殺傷細胞的活細胞和非特異性殺傷細胞的活化；化；z 3. 效應(yīng)細胞向腫瘤部位的遷移和清除腫瘤的限制效應(yīng)細胞向腫瘤部位的遷移和清除腫瘤的限制因素的識別。因素的識別。z主要目的是誘導(dǎo)患者機體產(chǎn)生腫瘤特異性的、主要目的是誘導(dǎo)患者機體產(chǎn)生腫瘤特異性的、持久的免疫應(yīng)答。持久的免疫應(yīng)答。第十頁，共25頁幻燈片主要治療策略主要治療策略z（1）直接輸注）直接輸注DCs，以激發(fā)機體免疫功能的，以激發(fā)機體免疫功能的主動免疫；主動免疫；z（2）以經(jīng)自體）以經(jīng)自體DCs體外擴增、激活的體外擴增、激活的T淋巴淋巴細胞（細胞（CTL）為物質(zhì)基礎(chǔ)的過繼免疫療法，）為物質(zhì)基礎(chǔ)的過繼免疫療法，使腫瘤患者產(chǎn)生有效、持久的抗

3、腫瘤免疫效使腫瘤患者產(chǎn)生有效、持久的抗腫瘤免疫效應(yīng)。應(yīng)。第十一頁，共25頁幻燈片 3.DC體外擴增的方法z DC 在組織中含量甚微，細胞表面缺乏特征性的標(biāo)志，不易與其它細胞分離。細胞來源的困難一度限制了對DC生物學(xué)特性等方面的深入研究。z 在應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)治療時使用的DC可能并不完全成熟，相當(dāng)一部分回輸?shù)腄C是非功能性的幼稚DC，從而大大降低了治療效果；而如果僅僅應(yīng)用未成熟的DC往往只能導(dǎo)致機體的免疫耐受。 國內(nèi)外許多實驗室都致力于研究通過體外培養(yǎng)獲得大量高純度功能性成熟DC的方法第十二頁，共25頁幻燈片 z 目前用于臨床和實驗研究的DC 大多是通過體外分離DC的前體細胞，在含有有關(guān)細胞因子的培養(yǎng)

4、體系中誘導(dǎo)獲得。z 骨髓、臍血、外周血CD34+細胞或外周血單個核細胞均可作為體外培養(yǎng)DC的來源。z 適當(dāng)?shù)募毎蜃优湮楹蛻?yīng)用順序?qū)C的培養(yǎng)具有重要作用。 第十三頁，共25頁幻燈片腫瘤抗原特異性腫瘤抗原特異性DCs的制備的制備z細胞性腫瘤抗原體外沖擊DC：包括采用滅活的腫瘤細胞或凋亡的腫瘤細胞負載DC; z合成的腫瘤細胞抗原或抗原肽體外沖擊DC;z腫瘤抗原提取物負載DC：目前常用的提取物包括腫瘤細胞碎片、酸性洗脫肽及mRNA抽提物; z 基因修飾的DC：包括腫瘤抗原編碼的基因及某些細胞因子（GM-CSF、IL-7、IL-12等）通過病毒導(dǎo)入DC。 第十四頁，共25頁幻燈片二、細胞毒性二、細胞

5、毒性T細胞在腫瘤免疫中的運用細胞在腫瘤免疫中的運用第十五頁，共25頁幻燈片zCTL抗凋亡能力測定 FLIP、Bcl-2、Baxz51Cr釋放試驗 對相應(yīng)腫瘤細胞的殺傷作用 對自體PBMC的殺傷作用zT細胞趨化實驗第十六頁，共25頁幻燈片A病人選擇病人選擇z 已經(jīng)病理組織學(xué)確診為非小細胞肺癌z 已失去手術(shù)機會或不愿接受手術(shù)治療z 住院病人z 臨床分期（TNM）：期及期以上 z 年齡65歲z 預(yù)計生存期1.0年z 生存質(zhì)量評分60分z 心、肝、腎等臟器功能基本正常z 知情同意的志愿受試者第十七頁，共25頁幻燈片B腫瘤治療腫瘤治療za）將病人隨機分為A、B、C三組，zA組：對照組，行常規(guī)的正規(guī)放療或

6、化療；zB組：試驗組，正規(guī)化療+腫瘤抗原特異性自體T細胞過繼免疫治療；zC組：試驗組，正規(guī)放療+腫瘤抗原特異性自體T細胞過繼免疫治療；zb) 腫瘤抗原特異性CTL輸注程序：在減瘤治療后，分3次回輸體外擴增的自體T淋巴細胞（1109/次），即在最大程度降低機體的腫瘤負荷后，重建患者的細胞免疫功能。第十八頁，共25頁幻燈片C療效評價療效評價z a) 二個療程后，按WHO的判定標(biāo)準(zhǔn)，評定療效z l CR（完全緩解）z l PR（部分緩解）z l MR（穩(wěn)定）z l NC或PD（無變化或進展）z b) 生存質(zhì)量評分（Karnofsky的標(biāo)準(zhǔn)）z 根據(jù)腫瘤患者治療前后的精神、睡眠、食欲、疲乏、疼痛、家庭

7、理解與配合、同事的理解與配合、自身對癌癥的認識、對治療的態(tài)度、行為狀態(tài)、日?；顒觶 情況、面部的表情等進行等級綜合評分。z c） 臨床癥狀體征改變的分析。z d） 生存期、中位生存期的分析。z e） 免疫功能狀況的分析z 采用免疫熒光標(biāo)記法分析患者治療前后的T細胞及其亞群功能變化（CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD4+/CD28+、CD8+/CD28+、CD4+-IFN-+、CD8+-IFN-+、 CD4+-IL-10+、CD8+-IL-10+、CD56、CD40L、CD95L） z 采用ELISA法分析患者治療前后的血清細胞因子水平變化（IL-2、sIL-2R、IL-10、IL

8、-12、IFN-）z 患者治療前后自體T淋巴細胞對相應(yīng)腫瘤細胞的殺傷效應(yīng)測定（51Cr釋放試驗）z 肽-MHC四聚體的測定第十九頁，共25頁幻燈片三、免疫分子的分析及臨床意義三、免疫分子的分析及臨床意義第二十頁，共25頁幻燈片Dual Parameter HistogramsFSC SizeSSCgranularityLymphsMonosGrans25第二十一頁，共25頁幻燈片CD3CD4CD3CD8HumanLymphocytesMouse-anti-CD4Mouse-anti-CD3Mouse-anti-CD8CD3CD4CD3CD8Immunophenotyping第二十二頁，共25頁幻燈片抗體的基本結(jié)抗體的基本結(jié)構(gòu)是一個構(gòu)是一個Y Y型的多型的多肽鏈，由兩條完肽鏈，由兩條完全相同的重鏈和全相同的重鏈和輕鏈組成。輕鏈組成。第二十三頁，共25頁幻燈片抗體抗體（Antibody,AbAntibody,Ab）是血液和組織液是血液和組織液中的一類糖蛋白，以中的一類糖蛋白，以球蛋白的形式存在球蛋白的形式存在血清中，也是血清中，也是B B淋巴細胞識別抗原后增殖淋巴細胞識別抗原后增殖分化為漿細胞所產(chǎn)生的體液免疫應(yīng)答效分化為漿細胞所