β內(nèi)酰胺酶分類

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上-內(nèi)酰胺酶百科名片內(nèi)酰胺類抗生素療效好而毒性小，是目前治療感染性疾病的重要藥物。該類藥物包括青霉素類、頭孢菌素類、青霉烯類、單環(huán)內(nèi)酰胺類和內(nèi)酰胺酶抑制劑，它們的共同特點(diǎn)是都具有抗菌活性部分內(nèi)酰胺環(huán)。內(nèi)酰胺酶通常指的是內(nèi)酰胺酶。目錄 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 展開臨床應(yīng)用-內(nèi)酰胺類抗生素被用來進(jìn)行預(yù)防和治療受此類抗生素打擊的細(xì)菌的感染力。過去-內(nèi)酰胺類抗生素只被用來對付革蘭氏陽性菌，但是通過發(fā)展

2、可以對付不同的革蘭氏陰性菌的廣譜-內(nèi)酰胺類抗生素提高了其作用范圍。 作用原理內(nèi)酰胺類抗生素是一種殺菌劑，它抑制細(xì)菌細(xì)胞壁中肽聚糖的形成。肽聚糖對于細(xì)胞壁、尤其革蘭陽性菌的細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)強(qiáng)度。肽聚糖合成的最后一步是被稱為青霉素結(jié)合蛋白的轉(zhuǎn)肽酶形成的。 內(nèi)酰胺酶內(nèi)酰胺類抗生素與D-丙氨酰-D-丙氨酸類似，其終結(jié)的氨基酸吸附在正在形成的肽聚糖的前兆NAM-NAG肽單元上。內(nèi)酰胺類抗生素與D-丙氨酰-D-丙氨酸結(jié)構(gòu)上的相似使得它們與青霉素結(jié)合蛋白結(jié)合。-內(nèi)酰胺核不可逆地與青霉素結(jié)合蛋白的Ser403單元結(jié)合。這個不可逆的結(jié)合使得青霉素結(jié)合蛋白無法鏈接正在形成的肽聚糖層。此外這個結(jié)合可能還激活細(xì)胞壁中的自

3、溶酶。 耐藥性原理說有-內(nèi)醘胺類抗生素有一個-內(nèi)酰胺環(huán)。這些抗生素的效應(yīng)取決于它們是否能夠完整地達(dá)到青霉素結(jié)合蛋白以及是否能與青霉素結(jié)合蛋白結(jié)合。因此細(xì)菌有兩種抵抗-內(nèi)醘胺類抗生素的方法。 第一個抵抗方法是使用酶水解-內(nèi)酰胺環(huán)。通過生產(chǎn)等酶細(xì)菌可以解開抗生素中的-內(nèi)酰胺環(huán)，使得抗生素失效。這些酶的基因可能本身就在細(xì)菌的染色體上，也可能通過質(zhì)粒交換而獲得。其基因表達(dá)可能是在接觸抗生素后開始的。細(xì)菌生產(chǎn)-內(nèi)酰胺酶并不表示使用任何-內(nèi)醘胺類抗生素均無效。有時-內(nèi)醘胺類抗生素可以與內(nèi)酰胺酶抑制劑同時使用。 內(nèi)酰胺酶不過在對付任何懷疑生產(chǎn)-內(nèi)酰胺酶的細(xì)菌時在使用-內(nèi)醘胺類抗生素前要仔細(xì)思考。尤其是使用-

4、內(nèi)醘胺類抗生素可能導(dǎo)致細(xì)菌生產(chǎn)-內(nèi)酰胺酶。假如在治療開始時使用-內(nèi)醘胺類抗生素導(dǎo)致-內(nèi)酰胺酶的生產(chǎn)會使得此后使用其它-內(nèi)醘胺類抗生素非常困難。 第二個抵抗方法是使用另一個青霉素結(jié)合蛋白。-內(nèi)酰胺與這些青霉素結(jié)合蛋白的結(jié)合不十分好，因此-內(nèi)酰胺對這樣的細(xì)胞壁生產(chǎn)的破壞不很有效?？顾幮越瘘S色葡萄球菌使用這個方式抵抗-內(nèi)醘胺類抗生素。這個抵抗手段也全部排除使用-內(nèi)醘胺類抗生素進(jìn)行治療的方法。 介紹1.青霉素類抗生素的發(fā)展近況 自1940年青霉素投入使用以來，該類抗生素以其療效確切、對人體細(xì)胞毒性小且價格低廉而廣泛應(yīng)用，臨床首選于G球菌所致的感染。目前，類抗生素已從抗陽性窄譜品種發(fā)展到廣譜的品種，按其

5、抗菌作用可分為：主要抗G菌的窄譜青霉素，如天然青霉素G、青霉素V，耐的半合成青霉素甲氧西林、氯唑西林、氟氯西林。主要作用于G菌的窄譜青霉素，如美西林、替莫西林?？挂话鉍桿菌的普青霉素，如氨芐西林、阿莫西林、倉氨西林?？咕G膿桿菌的廣譜青霉素，如、替卡西林、哌拉西林、阿洛西林、阿撲西林等。 已見報道的新型青霉素有替莫西林、福米西林、阿撲西林、阿帕西林等。替莫西林與福米西林分別在青霉烷的C6位上引入了甲氧基與甲酰胺基，因而對內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定。前者對G菌作用較強(qiáng)，臨床試驗(yàn)總有效率達(dá)93，不良反應(yīng)率約2；后者對腸桿菌屬和綠膿桿菌具有很強(qiáng)的抗菌活性，比青霉素強(qiáng)1020倍而與亞胺培南相似。阿撲西林引入了第三代頭

6、孢菌素側(cè)鏈的2氨基噻唑肟基，對青霉素結(jié)合蛋白PBP2有親和性，抗耐甲氧西林的金葡菌活性較強(qiáng)，組織分布廣，蛋白結(jié)合率低，是迄今青霉素中游離濃度最高者，臨床有效率90，不良反應(yīng)率1.95%。阿帕西林抗菌譜比氨芐西林和羥芐西林廣且作用強(qiáng)，對青霉素結(jié)合蛋白有良好的親和力，細(xì)胞穿透力強(qiáng)，并可抑制內(nèi)酰胺酶。它的譜包括G菌、沙門菌屬、梭狀芽胞桿菌屬、奈瑟菌屬、梭桿菌屬、大腸桿菌、肺炎桿菌、奇異變形桿菌和綠膿桿菌，但對脆弱擬桿菌和耐氨芐西林的流感嗜血桿菌耐藥，半衰期的4.7小時，一般有效率為6472，反應(yīng)較其它青霉素多見。 內(nèi)酰胺酶 隨著青霉素類在臨床的廣泛應(yīng)用，也不斷顯示出了其不足之處，如抗菌譜窄，抗藥菌株

7、日益增多，穩(wěn)定性差等，因而有待研制開發(fā)出更有效的新型青霉素。 2.菌素類抗生素的發(fā)展近況 頭孢菌素類是50年代開始應(yīng)用的抗生素，為7氨基頭孢烷酸（7ACA）的衍生物。頭孢菌素青霉素的內(nèi)酰胺環(huán)張力小，故較青霉素穩(wěn)定，并且具有抗菌譜廣、殺菌力強(qiáng)和抗青霉素酶的特點(diǎn)，過敏反應(yīng)少。目前，頭孢菌素類抗生素的頭孢烯類已從第一代發(fā)展到第四代，頭霉烯類和氧頭霉烯類已使從具有抗需氧菌作用發(fā)展到具有抗需氧菌和抗厭氧菌的雙重廣譜作用。 2.1第一代頭孢菌素抗菌譜廣，對G菌作用強(qiáng)，對G菌作用弱，對內(nèi)酰胺酶不穩(wěn)定，對綠膿桿菌無效，如頭孢氨芐、頭孢唑啉、頭孢拉定；第二代頭孢菌素抗菌譜較第一代有所擴(kuò)大，對內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定，但對G

8、菌的抗菌效能弱于第一代，對G菌作用較第一代強(qiáng)，對綠膿桿菌無效，如頭孢替安、關(guān)孢呋新、頭孢孟多；第三代頭孢菌素對G菌的抗菌效能普遍低于第一代，對G菌作用較第二代更強(qiáng)，抗菌譜擴(kuò)大，對酶的穩(wěn)定性增強(qiáng)，對綠膿桿菌有效，如頭孢哌酮、頭孢曲松、頭孢唑肟；第四代頭孢菌素與內(nèi)酰胺酶的親和力降低，穩(wěn)定性提高，對細(xì)菌細(xì)胞膜的穿透力更強(qiáng)，對甲氧西林敏感的（MSSA、MSSE）和某些產(chǎn)型內(nèi)酰胺酶的細(xì)菌（如陰溝腸桿菌）作用增強(qiáng)，對G菌的抗菌活性優(yōu)于第三代頭孢菌素，適用于多重耐藥G桿菌嚴(yán)重感染，對厭氧菌也有很好的抗菌作用，如頭孢地嗪、頭孢噻唑肟、等。 鹽酸頭孢吡肟，是呈電中性的兩性離子，具有高度的水溶性，能快速穿透G菌外

9、膜帶負(fù)電的微孔通道，對許多內(nèi)酰胺酶具有低親和力，其作用部位為許多主要的青霉素結(jié)合蛋白（PBPs）。其殺菌力強(qiáng)，抗菌譜廣，對G、G菌的抗菌活性優(yōu)于第三代頭孢菌素和亞胺培南。經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究，頭孢吡肟可應(yīng)用于耐藥機(jī)制復(fù)雜。治療困難的細(xì)菌如弗勞地枸櫞酸桿菌、腸桿菌屬、銅綠假單胞菌所致的感染。 分類-內(nèi)酰胺酶（-lactamase）（酶）的產(chǎn)生是細(xì)菌對(內(nèi)酰胺類)抗菌藥物耐藥最常見的機(jī)制,廣泛地涉及到許多社區(qū)獲得性感染和醫(yī)院內(nèi)感染的重要。-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生是抗生素耐藥的最常見的機(jī)制，在各種耐藥機(jī)制中占80%。-內(nèi)酰胺酶是由多種酶組成的酶家族，能水解內(nèi)酰胺抗生素。這些酶的基因存在于細(xì)菌的染色體或質(zhì)粒中。分類比較

10、多而復(fù)雜，這里總結(jié)了最常用的兩種，以便大家在閱讀文獻(xiàn)和應(yīng)用中理清思路。 Bush酶分類：根據(jù)生化特征或氨基酸序列的，-內(nèi)酰胺酶可分為下列四類。 1第一類為頭孢菌素水解酶（Amp-C酶），產(chǎn)生菌主要系革蘭陰性菌，如假單胞菌、腸桿菌、不動桿菌和克雷伯桿菌等，由染色體介導(dǎo)。 2第二類為青霉素酶和超廣譜酶，包括革蘭陽性菌的青霉素酶，質(zhì)粒介導(dǎo)的TEM和SHV酶及其衍生物組成的超廣譜-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）、羧芐青霉素酶、鄰氯青霉素酶（OXA酶）和由沙雷菌屬與腸桿菌屬產(chǎn)生的非金屬碳青霉烯酶。 3第三類為金屬酶，由假單胞菌屬、脆弱擬桿菌屬、產(chǎn)黃菌屬、沙雷菌屬及嗜麥芽黃單胞桿菌屬產(chǎn)生的可水解碳青霉烯抗生素的金

11、屬酶。 4第四類為其他不能被克拉維酸完全抑制的青霉素酶。 Frere酶分類（Ambler分類）：于酶的特殊性、動力學(xué)參數(shù)及其基因的核苷酸序列，將酶分為A、B、C、D四類 A活性部位為絲氨酸殘基，包括多種質(zhì)粒編碼的青霉素酶，如TEM1、SHV1、ROB1或PC1酶，相對分子質(zhì)量29000。 B為金屬酶(metalloenzymes)，活性部位為半胱氨酸殘基，產(chǎn)金屬酶的細(xì)菌有嗜麥芽黃桿菌(stenotrophomonasmaltophila)，氣單胞菌和脆性擬桿菌7。該類為，耐藥的抗生素包括碳青霉烯、青霉素、第一、二、三代頭孢菌素、氨曲南. C活性部位為絲氨酸殘基，相對分子質(zhì)量為39000，它的產(chǎn)

12、生與-酶誘導(dǎo)有關(guān)，歸因于調(diào)控基因突變，主要是染色體編碼的頭孢菌素酶(AmpC酶)是由上一組Amp基因介導(dǎo)的。 D為青霉素酶，包括OXA。-內(nèi)酰胺酶及其檢測方法-內(nèi)酰胺酶是細(xì)菌產(chǎn)生的可水解-內(nèi)酰胺環(huán)抗生素的酶。-內(nèi)酰胺酶（-lactamase）的產(chǎn)生是細(xì)菌對(內(nèi)酰胺類)抗菌藥物耐藥最常見的機(jī)制，廣泛地涉及到許多社區(qū)獲得性感染和醫(yī)院內(nèi)感染的重要病原菌，在各種耐藥機(jī)制中占80%。-內(nèi)酰胺酶是由多種酶組成的酶家族，通過水解或非水解方式破壞進(jìn)入菌體內(nèi)的-內(nèi)酰胺環(huán)，導(dǎo)致-內(nèi)酰胺類抗生素失活，這些酶的基因存在于細(xì)菌的染色體或質(zhì)粒中。它的種類和數(shù)量現(xiàn)已超過了400種，-內(nèi)酰胺酶分類比較多而復(fù)雜，最常用的有兩種

13、，即分子生物學(xué)方法和布氏法。其檢測方法包括常規(guī)方法和分子生物學(xué)方法。前者包括微生物法，碘量法，紙片酸度定量法，.產(chǎn)色頭胞菌素法；后者包括轉(zhuǎn)移性分析，基因分析，酶蛋白性質(zhì)分析。一 內(nèi)酰胺酶的合成、定位及傳播方式內(nèi)酰胺酶既可以在細(xì)菌內(nèi)組成型表達(dá)，如銅綠假單胞菌；又可以由質(zhì)粒介導(dǎo)的誘導(dǎo)表達(dá)，如嗜水氣單胞菌及金黃色葡萄球菌。而質(zhì)粒介導(dǎo)的方式是細(xì)菌耐藥性傳播的一個主要機(jī)制，在革蘭氏陰性菌中利用接合的方式進(jìn)行傳播，而在革蘭氏陽性菌中利用轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式獲得耐藥性狀。細(xì)菌的這種耐藥性狀的可轉(zhuǎn)移性正是細(xì)菌耐藥性爆發(fā)的原因。在革蘭氏陰性菌中，內(nèi)酰胺酶象胞外酶一樣被分泌到膜外的環(huán)境，而在革蘭氏陽性菌中，內(nèi)酰胺酶在它與受

14、體結(jié)合以攻擊抗生素的之前則停留在周質(zhì)腔中。二 內(nèi)酰胺酶的作用機(jī)制內(nèi)酰胺酶破壞內(nèi)酰胺抗生素的內(nèi)酰胺環(huán)有兩種作用機(jī)制。第一，絕大多數(shù)常見的內(nèi)酰胺酶有一個依賴絲氨酸發(fā)揮作用的機(jī)制，并且根據(jù)氨基酸序列組成分為三類（A，C和D）。通常它們的活性位點(diǎn)具有一個狹窄的縱形溝狀結(jié)構(gòu)，在溝的底部形成了一個空腔（氧陰離子袋），這種疏松的構(gòu)造容易彎曲，便于結(jié)合底物。由于內(nèi)酰胺環(huán)上的羰基碳在結(jié)合內(nèi)酰胺酶活性部位的絲氨酸時發(fā)生了不可逆的反應(yīng)，結(jié)果使其成為開環(huán)物，進(jìn)而重建了內(nèi)酰胺酶。這類酶對青霉素、頭孢菌素、單內(nèi)酰環(huán)類抗生素都有活性。第二，是一類不大多見的內(nèi)酰胺酶，被稱為金屬類內(nèi)酰胺酶，或B類內(nèi)酰胺酶。它們的特點(diǎn)是利用一個

15、2價金屬離子，絕大多數(shù)為鋅離子，分別與組氨酸或半胱氨酸結(jié)合，或同時與二者結(jié)合，并與內(nèi)酰胺類抗生素的羰基碳的酰胺鍵相互作用，使其不能發(fā)揮作用。這類酶主要對青霉素、頭孢菌素、碳青酶烯類抗生素發(fā)揮作用，但對單內(nèi)酰環(huán)類抗生素?zé)o效。三 內(nèi)酰胺酶的分類迄今為止，人們發(fā)現(xiàn)的內(nèi)酰胺酶的性質(zhì)多種多樣，從20世紀(jì)60年代后期以來人們做了許多嘗試將其分類。這些分類方法主要有兩個原則：第一種也是最古老的方法是基于酶的生化及功能特性；第二種方法是基于酶的分子結(jié)構(gòu)。1. 內(nèi)酰胺酶的功能學(xué)分類現(xiàn)有幾種標(biāo)準(zhǔn)來用于內(nèi)酰胺酶的分類，包括抗生素的抑菌的作用范圍，內(nèi)酰胺酶的耐藥范圍，內(nèi)酰胺酶的等電點(diǎn)、最大水解速度、結(jié)合常數(shù)、等電聚焦

16、、蛋白分子量等方法。最新的分類方法是Bush于1995年提出，他將內(nèi)酰胺酶分為四個大類（14）及六個亞類（af）。第1類為耐頭孢菌素的內(nèi)酰胺酶，但不被克拉維酸所抑制，分子生物學(xué)分類屬于C類。第2類為耐青霉素酶、耐頭孢菌素酶，可以被克拉維酸所抑制，分子生物學(xué)分類屬于A和D類，是由最初的TEM和SHV基因表達(dá)的結(jié)果。但由于表達(dá)的內(nèi)酰胺酶的TEM和SHV基因數(shù)量越來越多，它們首先被分為兩個亞類2a和2b。2a亞類只包括耐青霉素酶，而2b亞類范圍較廣，它可以使青霉素、頭孢菌素以同樣速度失活。進(jìn)一步的分類都是在2b基礎(chǔ)上劃分的：亞類2be，字母e代表廣譜酶活性，即ESBLs，可以使第三代頭孢菌素（頭孢他

17、啶、頭孢噻肟、頭孢泊肟）失活，還可以使單內(nèi)酰環(huán)類抗生素（氨曲南）失活；亞類2br，字母r表示減少與克拉維酸及舒巴坦的結(jié)合，所以也被稱為TEM基因表達(dá)的有抗性的抑制劑，可是它們依然對他佐巴坦敏感。隨后又分出4個亞類，亞類2c是對羧芐青霉素效果比對青霉素要好，而且對氯唑西林有一定的作用。亞類2d的酶對氯唑西林耐藥效果比對青霉素要好，對羧芐青霉素有一定的作用；這些酶很少被克拉維酸所抑制，并且這些酶中的一部分成為ESBLs。亞類2e的這些酶是耐頭孢菌素酶，但同樣可以水解單內(nèi)酰環(huán)類抗生素，也可以被克拉維酸所抑制。亞類2f被加上是因?yàn)樗鼈兪且蕾嚱z氨酸發(fā)揮作用的耐碳青酶烯酶，與第3類中的依賴鋅離子發(fā)揮作用的

18、耐碳青酶烯酶形成對比。第3類是依賴鋅離子或金屬離子的內(nèi)酰胺酶，分子生物學(xué)分類屬于B類。它們是唯一的在鋅離子或金屬離子輔助下發(fā)揮作用的酶。它們可以水解青霉素、頭孢菌素、碳青酶烯抗生素。這樣，碳青酶烯抗生素既可以被亞類2f酶(絲氨酸作用機(jī)制)抑制，又可以第3類酶（鋅離子作用機(jī)制）所抑制。第4類酶是不能被克拉維酸所抑制的耐青霉素酶，但目前在分子生物學(xué)上沒有分類。2 內(nèi)酰胺酶的分子生物學(xué)分類內(nèi)酰胺酶的分子生物學(xué)分類方法是基于核酸及氨基酸的序列的差異。迄今為止，人們已經(jīng)確認(rèn)了四種類型的內(nèi)酰胺酶（A、B、C、D），相對應(yīng)的功能學(xué)上分類如前所述。其中A類、C類和D類內(nèi)酰胺酶是依賴絲氨酸發(fā)揮作用，而B類內(nèi)酰胺

19、酶是依賴鋅離子或金屬離子輔助下發(fā)揮作用的酶。A類酶包括多種質(zhì)粒編碼的青霉素酶，活性部位為絲氨酸殘基，分子量為29kDa；B類酶為金屬酶，由染色體或質(zhì)粒編碼，酶活性需鋅離子參與，可被乙二胺四乙酸（EDTA）抑制；C類酶的活性部位為絲氨酸殘基，分子量為39 kDa，其產(chǎn)生與誘導(dǎo)劑有關(guān)；D類酶又稱為OXA型（水解苯唑西林）-內(nèi)酰胺酶。四 內(nèi)酰胺酶的檢測方法1.常規(guī)方法(1).微生物法：原理 以一種對青霉素高度敏感的細(xì)菌-枯草芽孢桿菌作為指示劑，試驗(yàn)時如果被測細(xì)菌株產(chǎn)生青霉素酶，破壞了青霉素，則此高度敏感菌株即可生長，否則，指示劑則被抑制。方法 以枯草芽孢桿菌為指示菌，用棉拭子將枯草芽孢桿菌接種于瓊脂

20、培養(yǎng)基上，或傾注方法將枯草芽孢桿菌混于瓊脂平板內(nèi)。然后將被測菌與產(chǎn)青霉素酶陽性及陰性對照菌株，按下圖接種劃線，在瓊脂培養(yǎng)基中央放置一含青霉素G（1單位）紙片。放置35培養(yǎng)24小時后觀察結(jié)果。結(jié)果判斷 如被檢菌產(chǎn)生青霉素酶，則沿著被測菌處的枯草芽孢桿菌抑菌環(huán)出現(xiàn)凹痕。 應(yīng)用 生物學(xué)方法是古老的方法，由于特異性差、靈敏度低，現(xiàn)在基本上很少被采用。(2).碘量法原理 -內(nèi)酰胺酶能裂解青霉素的-內(nèi)酰胺環(huán)形成青霉噻唑酸，它與淀粉競爭游離碘，破壞了碘和淀粉的蘭色復(fù)合物，使蘭色變?yōu)闊o色。方法將0.25克青霉素溶于41.7mlPH6.0的磷酸鹽緩沖液中，使其濃度成6000ug/ml。取0.1ml于一小試管中。

21、將培養(yǎng)18-24小時的細(xì)菌在含青霉素試管內(nèi)制成濃厚菌懸液（109/ ml）。在37水浴中放置30分鐘，不時搖動，使酶能破壞青霉素。加入1%可溶性淀粉溶液0.5 ml，搖勻。加入碘液0.02 ml。在37水浴中放置10分鐘，觀察結(jié)果。結(jié)果 在10分鐘內(nèi)能使蘭色完全消退的菌株為-內(nèi)酰胺酶陽性，不消退者為陰性。注意事項(xiàng)由于青霉素很容易分解，因而用于實(shí)驗(yàn)的青霉素應(yīng)新鮮配制。淀粉也新鮮配制，在100 ml蒸餾水中加入1克可溶性淀粉，放到開水中水浴直到淀粉溶解。實(shí)驗(yàn)應(yīng)按照步驟操作，如果碘加得過早，酶反應(yīng)就會停止，產(chǎn)生假陰性結(jié)果。每次試驗(yàn)最好用陽性和陰性對照。應(yīng)用 常用于檢測淋病奈瑟氏菌。（3）.紙片酸度定

22、量法原理 -內(nèi)酰胺酶能破壞青霉素中的-內(nèi)酰胺環(huán)，形成青霉噻唑酸，使PH降低，指示劑溴甲酚紫顏色由紫變黃。方法將一小片Whatman濾紙放于空平皿中。讓濾紙吸足青霉素溶液（0.05M磷酸緩沖液，PH8.0+0.2%溴甲酚紫+5%無緩沖劑的結(jié)晶青霉素）。用接種環(huán)把10-20個菌落涂到濾紙上，蓋好平皿后，將濾紙片在37孵育30分鐘，觀察結(jié)果。結(jié)果 產(chǎn)-內(nèi)酰胺酶的菌株使濾紙顏色由紫色變黃色，一般在10分鐘內(nèi)即能看到。應(yīng)用 紙片酸度定量法一般用于檢測淋病奈瑟氏菌、流感嗜血桿菌和葡萄球菌。（4）.產(chǎn)色頭胞菌素法原理 產(chǎn)色頭胞菌素如頭胞硝噻吩（nitrocefin）的-內(nèi)酰胺環(huán)能被-內(nèi)酰胺酶所破壞，使其顏色由淺黃色變?yōu)榉奂t色，以此來測定細(xì)菌的產(chǎn)酶情況。方法 將頭胞硝噻吩（nitrocefin）紙片置于干凈的平皿內(nèi)，用無菌的牙簽或接種環(huán)挑取細(xì)菌