實(shí)驗(yàn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象觀察

1、實(shí)驗(yàn)6小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象觀察姓名：李思露學(xué)號(hào)：131140040一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 通過對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞活動(dòng)的觀察,加深理解細(xì)胞吞噬作用的過程；2. 了解巨噬細(xì)胞吞噬能力檢測的形態(tài)學(xué)方法二、 實(shí)驗(yàn)原理吞噬作用也稱為胞吞作用（cellular eating），指細(xì)胞通過質(zhì)膜內(nèi)陷形成內(nèi)吞泡的方式吞入不能滲透過膜的較大固體物質(zhì)（直徑一般大于250mm）的過程。許多原生動(dòng)物通過吞噬作用攝取營養(yǎng)；高等動(dòng)物體內(nèi)的巨噬細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞的吞噬作用成為動(dòng)物體非特異性免疫的重要組成部分。不同動(dòng)物來源的巨噬細(xì)胞或同一動(dòng)物來源的不同巨噬細(xì)胞吞噬功能強(qiáng)弱不同，個(gè)體吞噬細(xì)胞的平均吞噬能力是機(jī)體非特異

2、性免疫功能強(qiáng)弱的重要反映。吞噬細(xì)胞細(xì)胞膜上有識(shí)別某些病原體相關(guān)分子及凋亡細(xì)胞磷脂酰絲氨酸等配體的受體，可以使巨噬細(xì)胞識(shí)別結(jié)合病原體、凋亡細(xì)胞及其它異物，引起受體胞內(nèi)區(qū)活化，進(jìn)而導(dǎo)致與其相連的細(xì)胞骨架重排引發(fā)吞噬作用。胞吐吞噬溶酶體內(nèi)吞體內(nèi)吞巨噬細(xì)胞吞噬自身衰老凋亡細(xì)胞而不吞噬正常細(xì)胞，原因是，凋亡細(xì)胞細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)面的磷脂酰絲氨酸反轉(zhuǎn)到胞膜外側(cè)面而被巨噬細(xì)胞模式識(shí)別受體識(shí)別。吞噬功能一般用吞噬百分率和吞噬指數(shù)兩個(gè)指標(biāo)反映。吞噬百分率吞噬有雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/巨噬細(xì)胞總數(shù)×100吞噬指數(shù)吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/吞噬有雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù) 三、 實(shí)驗(yàn)材料、試劑及器材（一）材料：1. 健康小白鼠

3、：6-8周齡健康小白鼠，實(shí)驗(yàn)前12天，每只腹腔注射4淀粉肉湯1mL。2. 抗凝雞血（二）試劑:1. 4%淀粉肉湯2. D-Hanks液3. 0.85生理鹽水4. 180IU/mL肝素鈉生理鹽水溶液（三）用品普通光學(xué)顯微鏡、 10mL低速離心機(jī)、托盤天平、水浴箱（37）、5mL一次性注射器、 10mL玻璃離心管、試管架、膠頭滴管等四、 實(shí)驗(yàn)操作1. 巨噬細(xì)胞收集：脫頸處死小鼠；腹腔注入2mL生理鹽水，揉勻；剪開腹部皮膚，暴露腹膜；用帶針頭的注射器插進(jìn)腹腔吸取腹腔液。2. 體外吞噬。0.3mL腹腔液+0.3mL雞紅細(xì)胞懸液，37吞噬。3. 制片及觀察。 分別在0min、15min、30min、45

4、min 制備細(xì)胞混合液臨時(shí)裝片，觀察現(xiàn)象并作圖。五、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖1 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞血紅細(xì)胞裝片（不染色）時(shí)間0min15min30min45min現(xiàn)象表1 巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞過程各個(gè)階段 巨噬細(xì)胞吞噬物的變化亦具有與時(shí)間相關(guān)的特點(diǎn)，巨噬細(xì)胞吞噬物在形態(tài)上易于觀察和檢測，這些特征使得巨噬細(xì)胞在損傷時(shí)間推斷過程中具有重要的法醫(yī)學(xué)意義。六、 作業(yè)與思考題1. 畫圖顯示巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞過程各個(gè)階段。答：如表1.2. 在體外吞噬實(shí)驗(yàn)中，為什么隨著吞噬時(shí)間延長，制片中出現(xiàn)的巨噬細(xì)胞數(shù)量減少？答：巨噬細(xì)胞（Macrophages）能夠吞沒、破壞受損傷組織，有助于啟動(dòng)康復(fù)過程。雖然它們?cè)趽p傷位點(diǎn)發(fā)揮關(guān)鍵作用，但一旦任務(wù)完成，就需要盡快撤離，結(jié)束炎癥反應(yīng)，為再生過程開路。繼續(xù)存在的巨噬細(xì)胞不利于組織恢復(fù)。3. 如不預(yù)先洗滌雞紅細(xì)胞會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果嗎？為什么？答：會(huì)。D-hanks液是一種平衡鹽溶液，用于洗滌雞血紅細(xì)胞，如果不洗滌則雞血紅細(xì)胞含有鈣鎂離子，會(huì)破壞巨噬細(xì)胞溶酶體水解酶的活性，影響吞噬過程的進(jìn)行。七、 反思與改進(jìn)1. 注射時(shí)注意不要注入皮下或?qū)⑨橆^插進(jìn)小鼠內(nèi)臟。進(jìn)針部位選在下腹部，距離生殖器約1cm處腹中線兩側(cè)，針頭與皮膚保持約