農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留快速檢測結(jié)果準(zhǔn)確性影響因素分析

1、農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留快速檢測結(jié)果準(zhǔn)確性影響因素分析目前，對農(nóng)產(chǎn)品中藥物殘留的檢測已經(jīng)成為監(jiān)控農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全狀況、保障人民身體健康的重要手段和必要措施。自治區(qū)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全快速聯(lián)合檢測使用的是酶抑制率法，具有檢測速度快、成本低、操作簡單、對檢測人員技術(shù)水平要求低等特點(diǎn)。但是，它對生化反應(yīng)條件要求嚴(yán)格，在檢測過程中會出現(xiàn)各種影響因素，致使檢測同一批次的蔬菜樣品重現(xiàn)性不好，直接影響到檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。我們總結(jié)出部分影響因素，以提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。1農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留快速檢測法原理農(nóng)藥殘留快速檢測法是根據(jù)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制昆蟲的中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酯酶(AchE)的活性，造成神經(jīng)介質(zhì)乙酰膽

2、堿(Ach)的積累，影響正常傳導(dǎo)，致使昆蟲中毒死亡這一毒理學(xué)原理對農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測。農(nóng)藥殘留快速檢測法只限于檢測蔬菜和水果中的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒。在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下，酶催化乙酰膽堿水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)在412nm處測定吸光度隨時間的變化值，計(jì)算出抑制率，通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。2農(nóng)藥殘留快速檢測中對檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的影響因素2.1檢測試劑對檢測結(jié)果的影響農(nóng)藥殘留快速檢測要用到的試劑主要有：緩沖液(提取液)、酶(乙酰膽堿酯酶)

3、、底物、顯色劑。除緩沖液外，其他試劑在儲藏過程中必須在05溫度條件下，以確保酶的活性。配制緩沖液時，一定要用蒸餾水或去離子水，不可使用含有礦物質(zhì)的水，否則對檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性干擾較大。乙酰膽堿酯酶對檢測結(jié)果的影響：溫度過高或過低都會降低酶的活性，而酶活性的降低會影響測量的準(zhǔn)確性，最佳的測量溫度應(yīng)在2040。檢測室溫度在2030時，可以直接將乙酰膽堿酯酶在室溫下培養(yǎng)，如果室溫低于20，必須在2535的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2.2樣品前處理對檢測結(jié)果的影響樣品前處理要求切成1cm見方的碎片，不能切的太小，否則有些蔬菜中大量的葉綠素溶到緩沖液中，干擾檢測結(jié)果。對一些葉綠素較高的蔬菜(如菠菜、結(jié)球甘藍(lán)等)可以采

4、用整株蔬菜浸提，減少色素干擾；對切開后易氧化的蔬菜水果(如茄子、蘋果等)也可采取整體或大塊放人浸提，減少干擾；還有一些蔬菜會產(chǎn)生次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性，對這類蔬菜(如蔥、韭菜、香菜等)可采取整株(體)浸提。2.3檢測儀器對檢測結(jié)果的影響檢測儀器調(diào)試的影響：分光度計(jì)要經(jīng)常進(jìn)行校正，如連續(xù)做幾個批次后，可能由于環(huán)境溫度等條件的不同，要重新進(jìn)行調(diào)100和做對照，也可以每個批次都進(jìn)行調(diào)100和做對照，以確保測試結(jié)果的準(zhǔn)確度。比色皿的影響：比色皿良好的透光度是減少檢測誤差的必要條件，因此，定期用乙醇清洗比色皿，在樣品檢測前用擦鏡紙對比色皿的兩個透光面進(jìn)行擦拭。使用比色皿時，兩個透光面要完全平行，并垂直

5、置于比色皿架中，以保證在測量時，入射光垂直于透光面，避免光的反射損失，保證光程固定。比色皿在使用后，立即用水沖洗干凈。沖洗后不宜立即使用，應(yīng)倒置在濾紙上晾干后再使用。微量移液器的影響：微量移液器要專用，貼上標(biāo)簽。避免交叉使用造成實(shí)際污染；試劑從試劑瓶中吸出后，不能再放回瓶中，防止試劑污染。2.4檢測員的操作對檢測結(jié)果的影響樣品在加入緩沖液(提取液)后，需要震蕩搖勻12分鐘，但是震蕩不能太劇烈，否則會使樣品搖爛，使緩沖液中的蔬菜色素增多，影響分光光度計(jì)的測量。檢測員在使用移液器，在吸取時輕按至第一停點(diǎn)，將吸頭沒人試劑液面下23mm，輕緩松開按鈕回原點(diǎn)，慢慢提出吸頭并在容器壁上?？恳幌拢匀コ嘤?/p>

6、試劑，輕按按鈕至第一停點(diǎn)，排出液體，稍停片刻按至第二停點(diǎn)，排空吸頭，以確保液體準(zhǔn)確性。加試劑時，移液器要保持垂直；吸頭有試劑時，移液器不能平放或者倒置，避免污染移液器，進(jìn)而污染其他試劑和樣品。待測樣品加入底物后，應(yīng)該馬上搖勻，放入儀器檢測，否則影響結(jié)果準(zhǔn)確性。比如在白菜的測試中，立刻放入檢測的抑制率是18.6，在延遲1分鐘后放入檢測抑制率78.4，可見，加試劑后放入檢測的速度快慢對檢測結(jié)果準(zhǔn)確性影響很大。同時，要確保同一組樣品放入時間和對照放入的時間一致，這個直接影響到檢測結(jié)果。2.5試驗(yàn)參數(shù)準(zhǔn)確性對檢測結(jié)果的影響空白對照吸光度變化A0值：樣品的檢測結(jié)果是通過抑制率來反應(yīng)，抑制率()=(A0A

7、x)A0100，通過公式可以看出，檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和A0值準(zhǔn)確度有密切關(guān)系。吸光度變化A0值一般由于試劑廠商、環(huán)境溫度條件、測試儀器、酶的活性等條件的不同而有變化，一般認(rèn)為A0在0.30.9是正常的。當(dāng)A00.3時，說明酶的活性不夠或者溫度太低，這種情況下在加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時間相應(yīng)延長，或者提前把試劑盒放在室溫下或培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，提高酶的活性。當(dāng)A0)0.9時，說明乙酰膽堿酯酶對底物的水解反應(yīng)速度過快，這種情況可以把測試時間縮短為23分鐘，以確保對照的A0的準(zhǔn)確性。測試時間對結(jié)果的影響：乙酰膽堿酯酶對底物的水解反應(yīng)是一個漸進(jìn)的過程，一般而言，只要時間足夠長，酶就能將底物完全水解，從而使吸光度達(dá)到最大值。樣品的吸光度值隨著反應(yīng)時間逐漸增加，在初始階段吸光度值增加較快，反應(yīng)5分鐘時，吸光度就達(dá)到80左右。說明這段水解反應(yīng)速度快，在后期，吸光度值變化緩慢，9分鐘后吸光度值基本不變，表明酶的水解反應(yīng)基本結(jié)束，吸光度達(dá)到了最大值。宜