魚類樹突狀細(xì)胞研究進(jìn)展

1、魚類樹突狀細(xì)胞研究進(jìn)展陳孝煊*§收稿日期：2018-02-04 修回日期：資助項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金（31672683）通信作者：陳孝煊，Email: chenxx§共同第一作者，李思思§，周成翀，吳志新（華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，湖北省水生動物病害防控工程技術(shù)研究中心，淡水水產(chǎn)健康養(yǎng)殖湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心，水產(chǎn)養(yǎng)殖國家級實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心（華中農(nóng)業(yè)大學(xué)），湖北 武漢 430070）摘要：樹突狀細(xì)胞（DCs）是目前已知的體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞，是唯一能夠激活初始T淋巴細(xì)胞反應(yīng)的細(xì)胞，在先天性免疫、適應(yīng)性免疫以及維持自身免疫耐受方面具有重要的作用，因此一直是免疫學(xué)研究的

2、重要領(lǐng)域。本文簡要綜述了DCs的類型及其在動物體內(nèi)的功能、各類DCs的細(xì)胞標(biāo)記?？偨Y(jié)了魚類DCs的分離、純化方法和形態(tài)學(xué)觀察方法；現(xiàn)有研究表明，魚類DCs具有吞噬細(xì)菌、刺激T細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞的活化、表達(dá)DCs的標(biāo)記基因、被Toll樣受體的配體激活、遷移能力、引起混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)等生物學(xué)功能；不同魚類DCs的分子標(biāo)記并不完全一樣；魚類的頭腎、腎、鰓、皮膚、胸腺、脾、腸等均有DCs的分布。目前，對魚類DCs的研究雖然取得了一定進(jìn)展，但仍有許多重要問題需要解決：魚類DCs目前缺乏明確的細(xì)胞標(biāo)記，加強(qiáng)這方面的研究有助于提高魚類DCs的分離、體內(nèi)分布與功能的研究水平；加強(qiáng)和完善魚類DCs的分

3、離、培養(yǎng)技術(shù)的研究，掌握各種魚類DCs的分離培養(yǎng)方法；加強(qiáng)魚類DCs在抗原遞呈中的功能研究，對深入魚類免疫機(jī)理研究，合理設(shè)計和應(yīng)用疫苗，具有重要的理論指導(dǎo)意義。關(guān)鍵詞：魚類；樹突狀細(xì)胞；形態(tài)；分布；細(xì)胞標(biāo)記；功能中圖分類號： 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：1 DCs的發(fā)現(xiàn)與分類1.1 DCs的發(fā)現(xiàn)樹突狀細(xì)胞（dendritic cell, DCs）是目前已知的體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞，是唯一能夠激活初始T淋巴細(xì)胞反應(yīng)的細(xì)胞1-2。據(jù)報道，最早發(fā)現(xiàn)的一類DCs是朗格漢斯細(xì)胞（Langerhans cell，LCs）。1868年，Paul Langerhans3 發(fā)現(xiàn)了人皮膚中一種常駐的樹枝狀形態(tài)的細(xì)胞并命名為L

4、Cs。LCs長期以來被誤認(rèn)為是一種神經(jīng)細(xì)胞，直到Steinman4 發(fā)現(xiàn)了一種獨(dú)特的細(xì)胞類型并進(jìn)行了后續(xù)的相關(guān)研究，才確定LCs可作為定居在皮膚中的抗原遞呈細(xì)胞。1973年，Steinman 和 Cohn5在體外培養(yǎng)小鼠脾臟細(xì)胞時發(fā)現(xiàn)了一群形態(tài)呈樹枝狀的細(xì)胞，并命名為DCs。后來Voohis6在人外周血液中亦發(fā)現(xiàn)這種細(xì)胞。20世紀(jì)90年代中期，DCs在免疫學(xué)中的重要性被逐漸認(rèn)識。有研究認(rèn)為，小鼠淋巴器官DCs根據(jù)其是否表達(dá)CD8，分為兩個亞型，具有不同的免疫功能7。隨后，有研究發(fā)現(xiàn)在非淋巴組織中功能表型與淋巴組織中CD8+ DCs相同的細(xì)胞，但不表達(dá)CD8，而表達(dá)整合素CD1038。此外，DC

5、s家族還被發(fā)現(xiàn)有另一類特征類似于漿細(xì)胞的細(xì)胞群，在病毒感染時，會產(chǎn)生大量的干擾素-(INF-)，而且還能分化為經(jīng)典的DCs，以抗原特異性的方式活化初始型T細(xì)胞9。自從在人類和小鼠中發(fā)現(xiàn)了DCs并進(jìn)行形態(tài)和功能的研究之后，人們陸續(xù)在鳥類、爬行類、兩棲類以及魚類中發(fā)現(xiàn)DCs的存在，這些細(xì)胞與哺乳動物DCs形態(tài)、分子標(biāo)記及功能相同或相似10-14。 1.2 DCs的分類及功能 DCs來源于造血干細(xì)胞（hematopoietic stem cell, HSC），局部造血微環(huán)境對其發(fā)育起著重要的作用，如FMS樣酪氨酸激酶3配體（Flt3L）、粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）、巨噬細(xì)胞集落刺激因子（

6、M-CSF）、型干擾素（INF-）等細(xì)胞因子。在這些不同細(xì)胞因子的刺激下，逐步由HSC分化發(fā)育為不同種類的DCs并分布到身體的各部位15-17。根據(jù)DCs的表型、功能及分化來源等有不同的分類方法。根據(jù)成熟程度來劃分根據(jù)細(xì)胞成熟度，DCs可以分為未成熟DCs（immature DCs, imDCs）和成熟DCs（mature DCs, mDCs）兩類。兩種DCs的形態(tài)、細(xì)胞表面標(biāo)記物和免疫學(xué)特性不同。穩(wěn)態(tài)條件下，體內(nèi)絕大多數(shù)DCs處于未成熟狀態(tài)，未成熟DCs具有較強(qiáng)的抗原攝取及處理能力，其細(xì)胞表面低表達(dá)CD40、CD80、CD86等共刺激分子和主要組織相容性復(fù)合體II類分子（MHC），不能有效遞

7、呈抗原來激活T淋巴細(xì)胞，從而導(dǎo)致免疫耐受18。未成熟DCs誘導(dǎo)免疫耐受的機(jī)制可能有激活T細(xì)胞凋亡、誘導(dǎo)T細(xì)胞免疫無能以及誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cell, Treg）的產(chǎn)生等19，因此未成熟DCs又被稱為“耐受性DCs”（toterogenic dendritic cells)。成熟DCs通過細(xì)胞表面的抗原肽/MHC分子復(fù)合物將抗原遞呈給初始T細(xì)胞，從而刺激初始T細(xì)胞分化為針對該種抗原的特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞，促進(jìn)其分化增殖而發(fā)揮免疫效應(yīng)20，調(diào)節(jié)Thl/Th2的發(fā)育，在免疫監(jiān)視中發(fā)揮重要的作用21。因此，DCs的抗原攝取和傳遞功能在機(jī)體先天性免疫、適應(yīng)性免疫和維持自身組織免

8、疫耐受的過程中起著非常關(guān)鍵的作用22。根據(jù)分化來源途徑來劃分根據(jù)分化來源，DCs主要分為髓樣DCs（myeloid DCs, mDCs）和漿細(xì)胞樣DCs（plasmacytoid DCs, pDCs)1。mDCs又稱為傳統(tǒng)DCs（conventional DCs, cDCs)，cDCs按照T細(xì)胞分化的方向進(jìn)一步分為誘導(dǎo)Th0向Th1分化的cDC1s和向Th2分化的cDC2s23。DCs來源于骨髓HSC，先分化為骨髓樣和淋巴樣前體細(xì)胞，骨髓樣前體細(xì)胞再分化為單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和DCs前體細(xì)胞24-25，DCs前體細(xì)胞進(jìn)一步分化為單核細(xì)胞、少量的巨噬細(xì)胞和cDCs前體細(xì)胞（CDP）26-27，最后

9、CDP再分化為DCs分支前體細(xì)胞，例如cDC1s和cDC2s前體細(xì)胞28。cDC1s在小鼠中表型為CD8+CD103+，在人體內(nèi)表型為BDCsA3+(CD141+)；cDC2s在小鼠中表型為CD11b+CD4+CD8-，在人體內(nèi)表型為BDCA1+(CD1c+)23。CD1c+mDCs高表達(dá)一些活化分子以及Toll樣受體18（TLR18)，能夠分泌多種細(xì)胞因子，具有較強(qiáng)的攝取抗原的能力，并且產(chǎn)生免疫應(yīng)答29。CD141+mDCs 交叉遞呈病毒抗原的能力比其他DCs亞群強(qiáng)，研究者推測這可能與其高表達(dá)C型凝集素9家族A成員（CLEC9A）有關(guān)，CLEC9A有利于病毒感染后壞死細(xì)胞抗原的處理30。pD

10、Cs在小鼠中表型為B220+mPDCA1+Siglec-h+；在人體內(nèi)表型為BDCA4+BDCA2+23，pDCs可以通過表面的TLR7和TLR9識別病原體，分泌大量的INF-，產(chǎn)生免疫應(yīng)答31。根據(jù)細(xì)胞學(xué)和生化性質(zhì)來劃分根據(jù)細(xì)胞學(xué)特征和生化特性，DCs可分為常駐性DCs（resident DCs）和移動性DCs（migratory DCs)。常駐性DCs存在于次級淋巴器官中，穩(wěn)態(tài)下，常駐性DCs呈現(xiàn)出不成熟DC的表型并且低表達(dá)一些共刺激分子。移動性 DCs主要分布在不同的非淋巴組織，該亞群 DCs可進(jìn)一步劃分間質(zhì)性 DCs、LCs和外周血 DCs等，當(dāng)其受到抗原刺激后移動性DCs能回到淋巴結(jié)

11、定居 32-33。其中，LCs主要分布于表皮和胃腸道上皮，為未成熟DCs，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含特征性結(jié)構(gòu)-Birbeck顆粒。LCs另一特征性的標(biāo)記是表達(dá)C型凝集素Langerin/CD207，其他細(xì)胞標(biāo)記包括上皮細(xì)胞黏附分子EpCAM、F4/80、E-cadherin、DEC205/CD205和CD11b34。2 DCs的標(biāo)記DCs是異質(zhì)性很高的細(xì)胞類群，由多種功能、活性迥異的亞群組成35。DCs目前沒有公認(rèn)的、統(tǒng)一的特異性標(biāo)記，不同的細(xì)胞亞型都有其特異性的標(biāo)記物。人DCs相對特異性的標(biāo)記為CD1a、CD11c和CD83。小鼠DCs相對特異性的標(biāo)記為NLDCs145和33D1。Coventry等36認(rèn)

12、為，CD1a主要表達(dá)于人胸腺細(xì)胞、DCs（包括LCs），是鑒定人外周血與骨髓中DCs的最好標(biāo)記。Prechtel等37研究發(fā)現(xiàn)，CD83是DCs成熟的標(biāo)記，體外培養(yǎng)的DCs在早期不表達(dá)CD83分子，當(dāng)其成熟時才表達(dá)CD83分子，成熟DCs攝取抗原的能力降低而其激活T細(xì)胞的功能則增強(qiáng)。一些研究發(fā)現(xiàn)，cDCs都表達(dá)CD11c和MHCII，但不同的亞型都有其特異性的標(biāo)記38-39。在脾臟和淋巴結(jié)中，cDC1s表達(dá)CD8、CD24和XCR1，而cDC2s表達(dá)CD4和Sirp40-41。非淋巴組織中，cDCs均表達(dá)CD24，區(qū)別于表達(dá)CD64的巨噬細(xì)胞42-44。cDC1s表達(dá)CD103與XCR1，而c

13、DC2s表達(dá)CD11b與Sirp。Guilliams等45發(fā)現(xiàn)一種簡單的標(biāo)記分類：cDCs（CD11C+MHC+CD26+ CD64- F4/80-）、cDC1s（XCR+）以及cDC2s（Sirp+)。pDCs也表達(dá)CD11c和MHCII，此外還表達(dá)B220、Siglec-H和Bst246-47。目前已發(fā)現(xiàn)的 DCs 膜表面分子主要有吞噬相關(guān)受體，包括 FcR、FcR、TLR、補(bǔ)體受體、甘露糖受體；抗原遞呈分子，包括MHCI/II分子、CD1 分子；共刺激分子 ，包括CD80、CD86；黏附分子，包括CD40、CD54、1/2 整合素家族等；細(xì)胞因子受體，包括粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體

14、（granulocyte-macrophage colonystimulating factor receptor，GM-CSFR）、白介素-1 受體（interleukin-1 receptor，IL-1R）、IL-10R、IL-4R1。3 魚類DCs與哺乳動物相比，魚類的免疫器官缺乏骨髓和淋巴結(jié)，但魚類的多種器官（組織）中均發(fā)現(xiàn)有樹突狀細(xì)胞（或類樹突狀細(xì)胞）分布。已有研究表明，DCs 在哺乳動物和魚類中的功能和表型是保守的，魚類的 DCs 有經(jīng)典 DCs 的形態(tài)、相似的功能；不同魚類 DCs 的分子標(biāo)記也不盡相同。3.1 魚類DCs的分離與鑒定魚類DCs的分離與富集培養(yǎng)對魚類DCs的研究，

15、離不開DCs的分離培養(yǎng)培養(yǎng)技術(shù)，目前有關(guān)學(xué)者采用的分離方法主要是機(jī)械法和酶消化法。Bassity 等11在對虹鱒（Oncorhynchus mykiss）DCs的研究中，即采用了這兩種方法：機(jī)械法：虹鱒用過量的MS-222麻醉，尾靜脈采血后，無菌條件下取頭腎、脾臟、體腎的前部分置于L-15培養(yǎng)基中，用無菌注射器的活塞碾壓組織并用L-15培養(yǎng)基沖洗使組織中的細(xì)胞通過70m的細(xì)胞篩獲得單細(xì)胞懸液；用L-15培養(yǎng)基調(diào)整活細(xì)胞數(shù)為6x106個細(xì)胞/ml，置于25cm2或75cm2培養(yǎng)瓶中，室溫培養(yǎng)730 d，期間收集非貼壁細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)樹突狀的形態(tài)時，用Nycoprep/One-step monoc

16、ytes（Accurate chemical, Westbury, NY）分離液進(jìn)一步富集純化得到類DCs細(xì)胞。從外周血分離DCs的方法則是：從尾靜脈取血用肝素處理后，用含有肝素的磷酸鹽緩沖液稀釋4倍，室溫靜置20min，將富含白細(xì)胞的血漿置于Nycoprep1.077（Axis Shield, Oslo, Norway）分離液上，離心后收集白細(xì)胞，用L-15培養(yǎng)基重懸、調(diào)整細(xì)胞數(shù)為5x106 個細(xì)胞/ml，置于25cm2培養(yǎng)瓶中室溫培養(yǎng)，2 h后棄非貼壁細(xì)胞，培養(yǎng)過夜后，DCs失去其貼壁性而懸浮在L-15培養(yǎng)液中。酶消化法：無菌條件下，從麻醉的虹鱒中取出脾臟，用膠原酶A處理獲得單細(xì)胞懸液，置

17、于Nycoprep (Axis Shield, Oslo, Norway)分離液上，離心后收集白細(xì)胞；用L-15培養(yǎng)基重懸、調(diào)整細(xì)胞數(shù)為6x106 個細(xì)胞/ml，置于6孔板中，室溫培養(yǎng)，2 h后棄非貼壁細(xì)胞，培養(yǎng)過夜后，DCs失去其貼壁性而懸浮在L-15培養(yǎng)液中。Zoccola等13在對尖吻鱸（Lates calcarifer）的研究中，通過機(jī)械法分離得到DCs，但富集純化方法與Bassity等人的方法稍有不同：魚體麻醉致死，尾靜脈取血后于無菌條件下取脾臟和頭腎，置于L-15培養(yǎng)基中，用1ml無菌注射器的活塞碾壓組織并用L-15培養(yǎng)基沖洗使細(xì)胞通過100m的細(xì)胞篩獲得單細(xì)胞懸液；用L-15培養(yǎng)

18、基調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1x107個細(xì)胞/ml，置于25cm2或75cm2培養(yǎng)瓶中，28培養(yǎng)5-14d；期間收集非貼壁細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞具有樹突狀的形態(tài)時，利用不連續(xù)密度梯度Percoll分離液（d = 1.058 g/mL 和 d = 1.048g/mL）進(jìn)一步富集純化得到DCs細(xì)胞。此外，還可以利用DCs的特性以及通過熒光標(biāo)記的方法分離DCs。利用頭腎中的細(xì)胞對花生凝集素（PNA）的親和力的差異，結(jié)合流式細(xì)胞分選技術(shù)，Lugo-Villarino 等10從斑馬魚（Danio rerio）的頭腎中分離得到PNAhi 細(xì)胞，并證實(shí)這些細(xì)胞為DCs。Wittamer等48在雙轉(zhuǎn)基因斑馬魚的頭腎中分離出mhc2d

19、ab:GFPhi, cd45:DsRedhi的單核吞噬細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)其中DCs有一定的比例。魚類DCs的形態(tài)通過Wright-Giemsa染色的方法，Lugo-Villarino 等10在斑馬魚中發(fā)現(xiàn)具有DCs獨(dú)特形態(tài)的細(xì)胞，細(xì)胞胞體向外伸出多個突起，這些突起在長度、寬度、形態(tài)和數(shù)目上都不同，胞體形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞核呈橢圓形或腎形，整體呈現(xiàn)星形或細(xì)長的細(xì)胞形態(tài)。其他多種染色方法也顯示了典型DCs的特性，例如酸性磷酸酶染色顯示，DCs細(xì)胞核周圍分布有較小的陽性顆粒；-醋酸萘酯酶染色顯示，DCs染色較弱，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有黑色沉淀。對分離得到DCs進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)觀察，透射電鏡結(jié)果顯示，DCs從胞體向外伸出突起，細(xì)

20、胞核常為較大的、彎曲的形態(tài)，且核膜周圍分布著染色質(zhì)，細(xì)胞質(zhì)的電子密度較低且含有線粒體、溶酶體、多泡體等細(xì)胞器。此外，在皮膚中分離的DCs發(fā)現(xiàn)有“網(wǎng)球拍”狀顆粒，類似于哺乳動物L(fēng)Cs中的Birbeck顆粒。Bassity 等11從虹鱒脾臟和頭腎分離培養(yǎng)2周后的DCs，在光鏡下觀察到DCs出現(xiàn)分枝狀突起。Wright-Giemsa染色顯示，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，核呈小裂片形狀，其中一部分細(xì)胞的細(xì)胞核呈三葉草型或花瓣型。在透射電鏡下，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有不同程度的突起，細(xì)胞核常分為2葉或3葉，周圍分布有染色質(zhì)，細(xì)胞質(zhì)中有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、線粒體等細(xì)胞器，但未發(fā)現(xiàn)“網(wǎng)球拍”狀的 Birbeck顆粒。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，

21、在硬骨魚類的脾臟和頭腎中存在類似哺乳動物L(fēng)Cs的一類細(xì)胞。Lovy等49在鯉形目（Cypriniformes）的鯉（Cyprinus carpio）、狗魚目（Esociformes）的白斑狗魚(Esox lucius)、鮭形目（Salmoniformes）的大西洋鮭（Salmo salar）、鰈形目（Pleuronectiformes）的大西洋庸鰈（Hippoglossus hippoglossus）等多種魚類中發(fā)現(xiàn)類LCs，具有典型的“網(wǎng)球拍”狀的Birbeck顆粒，且圍繞中心粒周圍分布，但不同物種的Birbeck顆粒結(jié)構(gòu)有差別。3.2 魚類DCs的功能Lugo-Villarino 等10發(fā)

22、現(xiàn)，斑馬魚DCs除了具有典型的DCs形態(tài)外，還具有吞噬細(xì)菌的能力，高表達(dá)與DCs相關(guān)的基因，例如il-12p40、csf1r和 iclp1， 而且PNAhi DCs具有刺激T細(xì)胞增殖的能力，同時DCs可誘導(dǎo)抗原特異性CD4+T細(xì)胞的活化50。Bassity 等11發(fā)現(xiàn)，在虹鱒中分離得到的DCs，除了具有刺激T淋巴細(xì)胞增殖能力外，還具有一系列類似哺乳動物DCs的功能，例如表達(dá)DCs的一些標(biāo)記基因，能夠吞噬小的顆粒，能夠被TLR的配體激活，在體內(nèi)具有遷移能力等。在尖吻鱸中的研究中，發(fā)現(xiàn)肽聚糖、脂多糖以及海豚鏈球菌（Streptococcus iniae）都能夠誘導(dǎo)DCs的遷移，與脂多糖相比，肽聚糖

23、的誘導(dǎo)作用更為明顯，DCs能夠吞噬細(xì)菌和熒光微球以及刺激T淋巴細(xì)胞的增殖13。在青鳉（Oryzias latipes）中，類DCs也能引起強(qiáng)烈的混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(mixed lymphocyte reaction, MLR)51。3.3 魚類DCs的表面標(biāo)記越來越多的研究表明，魚類的DCs在激活B細(xì)胞和T細(xì)胞的功能上是保守的。由于DCs具有異質(zhì)性，DCs的鑒定要依賴多個細(xì)胞標(biāo)記的表達(dá)52。在哺乳動物中，膜結(jié)合蛋白CD83是成熟DCs的膜標(biāo)記分子，膜結(jié)合蛋白CD83分子量為40-45KD，屬于免疫球蛋白超家族成員，由胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)組成37。未成熟DCs表面表達(dá)低水平的共刺激分子及 MHC

24、II 類分子，而高表達(dá)一系列受體，如TLR、C 型凝集素等。DCs的表型與功能相適應(yīng)，高表達(dá)的受體有利于未成熟細(xì)胞識別、攝取抗原相關(guān)的物質(zhì)。一旦未成熟DCs受到炎性刺激，則會向成熟DCs轉(zhuǎn)化，其中共刺激分子及 MHCII 表達(dá)水平顯著提高，其意義在于提供T 細(xì)胞活化的信號，如T細(xì)胞受體與MHC-抗原復(fù)合體結(jié)合傳遞信號，T細(xì)胞型CD28與CD80/CD86 結(jié)合傳遞信號，從而啟動獲得性免疫應(yīng)答53-54。在硬骨魚類中，對于DCs的分子標(biāo)記還不確定。在虹鱒中，分離培養(yǎng)的DCs可表達(dá)TLR-3、TLR-5、TLR-9、TLR-20、TLR-22、TLR-22L、B7R、B7H1、B7H3、B7H4、

25、IL12p40、CXCR4、CCR7、MHCII、CD83、CD209等DCs標(biāo)記基因；DCs在四種TLR配體（imiquimod, Poly I:C, ssRNA, flagellin）的混合物刺激下，CD83發(fā)生顯著性上調(diào)表達(dá)11。在尖吻鱸中，發(fā)現(xiàn)了一種潛在的DCs標(biāo)記-DCs-SCRIPT，在肽聚糖和脂多糖的刺激下，頭腎和脾臟中的DCs-SCRIPT都出現(xiàn)了不同程度的上調(diào)表達(dá)13。有研究表明，CD80/86、CD83、CD209以及MHCII共定位在斑馬魚DCs的細(xì)胞膜上，而且在脂多糖和血藍(lán)蛋白的刺激下，以上四種分子均出現(xiàn)顯著性上調(diào)表達(dá)50。3.4 魚類DCs在體內(nèi)的分布和哺乳動物相似，

26、DCs在魚體內(nèi)的數(shù)量很少6，但從不同組織均可分離得到一定純度的DCs。在虹鱒、尖吻鱸的頭腎和脾臟以及外周血中都分離培養(yǎng)得到了不同數(shù)量的DCs11, 13。此外，通過綠色熒光蛋白標(biāo)記MHC（mhc2dab:GFP）和紅色熒光蛋白標(biāo)記CD45（cd45:DsRed）的方法，結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)分離并研究了單核細(xì)胞和DCs在轉(zhuǎn)基因斑馬魚體內(nèi)的特性，發(fā)現(xiàn)體內(nèi)多數(shù)器官都有DCs的分布；DCs占單核吞噬細(xì)胞的比例在各器官中分別為：皮膚（15%）、胸腺（10%）、腎（6%）、脾（5%）、腸（3%）48。Granja等55在虹鱒皮膚中發(fā)現(xiàn)了MHCII+、CD8+ DCs樣細(xì)胞，約占白細(xì)胞的1.2%，且表現(xiàn)出與哺乳動

27、物DCs相似的功能與表型。Lovy等12在孢子蟲感染的大鱗大麻哈魚（Oncorhynchus tshawytscha）的鰓中，發(fā)現(xiàn)了LCs。隨后，在大西洋鮭（Salmo salar）、虹鱒（Oncorhynchus mykiss）、美洲紅點(diǎn)鮭（Salvelinus fontinalis）以及多種輻鰭亞綱魚類的頭腎及脾臟中發(fā)現(xiàn)了LCs49, 56。最近，Kordon等人在斑點(diǎn)叉尾鮰（Ictalurus punctatus）的頭腎、脾臟、鰓中也發(fā)現(xiàn)了類LCs57。4 總結(jié)與展望哺乳動物DCs研究已較深入。近年來，在越來越多的魚類中也發(fā)現(xiàn)了DCs，研究發(fā)現(xiàn)，魚類DCs在功能和表型上與哺乳動物具有很多

28、共性，但是仍然有很多問題亟待解決，例如DCs的細(xì)胞標(biāo)記，加強(qiáng)這方面的研究有助于提高魚類DCs的分離、DC類型及在體內(nèi)分布與功能的研究水平； DCs的分離、培養(yǎng)技術(shù)； DCs在抗原遞呈中的功能研究，以及DCs在魚體中發(fā)揮功能的場所與調(diào)節(jié)機(jī)制等。隨著技術(shù)的進(jìn)步和研究的深入，魚類DCs的生物學(xué)特性以及DCs免疫調(diào)節(jié)的機(jī)制等問題將逐漸被解決，這對深入魚類免疫機(jī)理研究，合理設(shè)計和應(yīng)用疫苗，具有重要的理論指導(dǎo)意義。參考文獻(xiàn)：1 Steinman R M. Decisions about dendritic cells: past, present, and futureJ. The AnnualRevie

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