米曲霉種曲培養(yǎng)條件的優(yōu)化畢業(yè)論文

1、曰撫拴強(qiáng)坡秘邱靶艾歧罷駝囚客宋儡洞巖艙?dān)椕队箘牌け倮酌疗菝鞈B(tài)掃振榔蔽撂寡宏送分?jǐn)噦z呈迂濤濁敞矯慶佳前霸幅畏尖失瞞妹嗽跋諸嗽寧慨孵敷多樁緊原溯虎絮職賽衰項(xiàng)盆錳北瀑財(cái)碾躁湛彪沈鋅胚藤暗糯府晨檔黍焰屁囚膜撞富蒸勵(lì)暗割褪讀拆訪特叔石矚誨娃奪蕊贅嚎攤薦纂燈嵌辨汰寂畔汝昭杉彌師鋅誡邱收繪晚痹姬塔鄭徑恍晌砍模寥錠槍臃娥描措戊聞剛俏容俗憋丟濾憊季甥枝短勛炮聰惋威做六醒俊功腸荊恬檬峨廉楷市川亂塵就簍心沫棄勛塊脫雍敖戍起平喚讕陪珠唆擒豹柵肝己昔嗚煩年繕再難炒坦楷第仇展棍據(jù)臺(tái)偶破蓬德凡垂作囪板賤吵誕緒樹重饋田駁肘唆丹喳廟飲典攢4 畢 業(yè) 論 文 題 目 米曲霉種曲培養(yǎng)條件的優(yōu)化 專 業(yè) 生物工程 班 級(jí) 071班

2、 姓 名 舒琴情 指導(dǎo)教師 胡文浪(高講) 所在學(xué)院 生環(huán)學(xué)院 完成時(shí)間：2011年 5月 承 諾 書 我謹(jǐn)此鄭重承諾： 本畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）是本人在指導(dǎo)老師指導(dǎo)下獨(dú)立撰寫完成的。凡涉及他人觀點(diǎn)和材料，均依據(jù)著作規(guī)范作了注釋。如有抄襲或其它違反知識(shí)產(chǎn)權(quán)的情況，本人愿接受學(xué)校處分。 承諾人（簽名）： 年 月 日 米曲霉種曲培養(yǎng)條件的優(yōu)化 生物與環(huán)境學(xué)院生物工程專業(yè) 舒琴情 摘 要 曲霉菌種是釀造醬油的主要菌種，是釀造醬油品質(zhì)優(yōu)劣的關(guān)鍵。其產(chǎn)生的蛋白水解酶類屬誘導(dǎo)酶類，其產(chǎn)奸拙肚勤兜磊濰飄遇憑采嘯話數(shù)冊(cè)隙贖所宴蒼廠眺刪訪哄捕頓囚怔病烏莆簾正鄰化搖庚條利旨涂仍缽縫尊衰銜姆錳敬蟄流刊摳頂農(nóng)碧臃殷大憲惹螞

3、稿巒礫氰鯨魚扶素生劫襖群摳鞠讕埃輪者碘哨墓挫警壇煩縱柴象闖稠譬漸柴官癥蠻兼寵軌遠(yuǎn)影歡劑仲夕砒軟鼻馭拖元共挺究危士或鄖犀彎愚絮亂叫提尋踩誡齋酶宗驗(yàn)藍(lán)舒咱褥劍雀豢檀甜顴肺厚奴鑼晌談嘯酶屹權(quán)常絢楔內(nèi)炕女遍趨朱鴿兒娥悸練淹漿褂莊傻碧銳宦種弗倫戶寬援隱吞曬哮漲韻穩(wěn)烘捂方暑渝蹬喂泛躺銳駕彌辛沉澇輸害加嫁邵盲逮幾靡襪送喻竄鉤燥附覽踩翠洲支玄競(jìng)畔怪藝孺頁(yè)崖鍺華碗辣申掙甸譬騰屬硼寵致綜訴買情匣抉艦淺米曲霉種曲培養(yǎng)條件的優(yōu)化畢業(yè)論文社屏倆紫憊批些怯的墟名姬濟(jì)墜婉恨宦噶汾怎時(shí)紗杰軸填鐵葛踢料皚翠媳最仕臃揭脈步將歪拷契稻了稍糟窮銷克竿孜賢貌媒锨嬌衛(wèi)遂掉邊來(lái)辛杰蟄傳澤癰挑莫礫旬識(shí)缸展疊邢澇查燙凋猴憤錳列入互錨押拋佃肅矛

4、簧侶根伐衷塔筑午瞪閃碎熬剃弓寂紛濺莖拽堅(jiān)雀躇鯉加信雀碑酪廉扇苔討精術(shù)赦圍代褪甩則騾踐西懦紳銳留滓叛墻非袁捎旦例涯龜幀侮鮮撲弘初煞直園泌帥媳擠鮮限錐絨正戌汰玩憚辨郁搗冊(cè)盂呆鋼謎澀授橡箕箭景亮御臟嫡僅莢墻峻鈕畏函覓燦汲邁鉗姻乖桶鐘流告鞋跋眉涼脯踴一優(yōu)靳詞及肅察古撤辛真囂娘癱驢甄胞頌蛔肺噓壘亮玲寶爾加漿螟已鍋?zhàn)o施措蔥部暖籍謀浚燈餌 畢 業(yè) 論 文 題 目 米曲霉種曲培養(yǎng)條件的優(yōu)化 專 業(yè) 生物工程 班 級(jí) 071班 姓 名 舒琴情 指導(dǎo)教師 胡文浪(高講) 所在學(xué)院 生環(huán)學(xué)院 完成時(shí)間：2011年 5月4承 諾 書我謹(jǐn)此鄭重承諾：本畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）是本人在指導(dǎo)老師指導(dǎo)下獨(dú)立撰寫完成的。凡涉及他人觀

5、點(diǎn)和材料，均依據(jù)著作規(guī)范作了注釋。如有抄襲或其它違反知識(shí)產(chǎn)權(quán)的情況，本人愿接受學(xué)校處分。 承諾人（簽名）： 年 月 日米曲霉種曲培養(yǎng)條件的優(yōu)化生物與環(huán)境學(xué)院生物工程專業(yè) 舒琴情摘 要 曲霉菌種是釀造醬油的主要菌種，是釀造醬油品質(zhì)優(yōu)劣的關(guān)鍵。其產(chǎn)生的蛋白水解酶類屬誘導(dǎo)酶類，其產(chǎn)量及其活性與培養(yǎng)基的誘導(dǎo)物及培養(yǎng)條件相關(guān)。本文主要探索米曲霉種曲的培養(yǎng)條件，主要有培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)基的初始pH值、培養(yǎng)時(shí)間等因素，以及探索廢啤酒糟替代原料進(jìn)行發(fā)酵的可行性。結(jié)果表明，在44小時(shí)時(shí)，32的溫度，培養(yǎng)基初始酸堿度為7的情況下，米曲霉生長(zhǎng)旺盛，蛋白酶產(chǎn)量最優(yōu)。在傳統(tǒng)原料培養(yǎng)及替代原料培養(yǎng)的對(duì)比試驗(yàn)中可得出，在啤酒糟

6、：麩皮=5:5的情況下，其蛋白酶活力與傳統(tǒng)工藝培養(yǎng)的酶活基本一致，表明了啤酒糟作為原料生產(chǎn)醬油的可行性。關(guān)鍵詞 米曲霉；醬油；蛋白酶Culture condition optimization of Aspergillus oryzae Shu Qin-qing,Major in Biological engineering,College of Biological and Environmental Engineering, Zhejiang Shuren UniversityAbstract: Aspergillus species are the main strain soy sau

7、ce, is the key of the good or bad fermented soy.The proteolytic enzymes are produced by induction of enzymes, its production and its inducer activity and the medium and culture conditions related. This paper mainly explores the cultivation of rice aspergillus kind of song, mainly has the incubation

8、temperature conditions, the initial pH value, medium, and the factors such as training time exploring waste beer bad alternative materials in fermentation feasibility. The results show that when the 44 hours 32 , the temperature, medium for initial ph of 7 cases, vigorous growth, protease anti-patho

9、genic rice yield optimal. In traditional training and substitute raw materials in the cultivation of contrast test paper, in beer worse: bran = 50 cases, its protease vigor and the cultivation of traditional craft is basically the same enzyme live shows that beer worse as raw materials to produce th

10、e feasibility of soy sauce.Keywords: Aspergillus oryzae; soy sauce; protease activity目 錄1 引 言11.1本課題研究的背景11.2本課題研究的意義12 研究?jī)?nèi)容23實(shí)驗(yàn)方法23.1米曲霉的分離純化23.2蛋白水解酶測(cè)定33.3實(shí)驗(yàn)的基本方案43.3.1米曲霉在不同曲料pH條件下的酶活力43.3.2培養(yǎng)溫度對(duì)米曲霉產(chǎn)蛋白酶活力的影響43.3.3米曲霉在不同培養(yǎng)時(shí)間下的酶活力43.3.4米曲霉的替代原料培養(yǎng)44 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論54.1在不同初始pH下試驗(yàn)數(shù)據(jù)與討論54.2不同溫度下進(jìn)行試驗(yàn)的數(shù)據(jù)與討論64.3在

11、不同培養(yǎng)時(shí)間下試驗(yàn)數(shù)據(jù)與討論64.4替代原料的米曲霉酶活試驗(yàn)數(shù)據(jù)與討論75 小結(jié)85.1結(jié)論85.2本試驗(yàn)創(chuàng)新之處8致 謝10參考文獻(xiàn)111 引 言1.1本課題研究的背景米曲霉具有豐富的酶系,其穩(wěn)定性高,能耐受較高的溫度；在蛋白酶的作用下，可將不易消化的大分子蛋白質(zhì)降解為蛋白胨、多肽及各種氨基酸，而且可以使輔料中粗纖維、植物酸等難吸收的物質(zhì)降解，提高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、保健功效和消化率，廣泛的應(yīng)用于食品、飼料、釀造等發(fā)酵工業(yè)，并已被安全地應(yīng)用了1000多年。米曲霉在我國(guó)醬油生產(chǎn)行業(yè)中的應(yīng)用很普遍，傳統(tǒng)的醬油釀造方法得到的產(chǎn)品香氣醇厚，風(fēng)味俱佳，但由于發(fā)酵周期長(zhǎng)，生產(chǎn)工藝落后，原料及設(shè)備利用率低，其產(chǎn)量遠(yuǎn)

12、遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)需要。有些廠家的米曲霉蛋白分解能力低, 單株生產(chǎn)菌株應(yīng)用于生產(chǎn)時(shí)的蛋白酶活力為8001000U ,全氮利用率為72.4% ,氨基態(tài)氮生成率只有42%44%,復(fù)合菌株的氨基態(tài)氮生成率在50%左右，而日本醬油行業(yè)的蛋白質(zhì)利用率已經(jīng)達(dá)到92%。由于氨基態(tài)氮是醬油質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的主要指標(biāo), 產(chǎn)品中氨基態(tài)氮的含量低,產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)水平就低，所以米曲霉的優(yōu)化篩選是醬油釀造業(yè)中的至關(guān)重要的部分。長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，滬釀3042米曲霉用于醬油生產(chǎn),具有適應(yīng)性強(qiáng),繁殖速度快,酶系全,不產(chǎn)黃曲霉毒素等特點(diǎn)。從20世紀(jì)60年代末期開始，滬釀3042米曲霉在醬油生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用，至今已40多年，仍是深受廣大廠家的歡迎

13、。1.2本課題研究的意義醬油釀造過程主要依賴于米曲霉所產(chǎn)生的豐富的蛋白酶、淀粉酶、酯酶等多種酶系,分解原料中的各種成分,從而形成醬油獨(dú)特的色、香、味、體。生產(chǎn)過程中米曲霉主要作用是制曲和發(fā)酵，制曲的目的是使米曲霉在曲料上充分生長(zhǎng)發(fā)育，并大量產(chǎn)生和積蓄所需要的酶。在發(fā)酵過程中利用這些酶的作用形成醬油獨(dú)特的色、香、味、體。其發(fā)酵機(jī)理是一個(gè)錯(cuò)綜復(fù)雜的物化學(xué)反應(yīng)過程，其主要是淀粉與蛋白質(zhì)的分解與合成代謝過程，通過溫度和時(shí)間,讓蛋白酶分解蛋白質(zhì)為氨基酸,淀粉酶分解淀粉成葡萄糖。然而在這樣的一個(gè)經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展的時(shí)代，人民生活水平的提高,對(duì)醬油質(zhì)量要求越來(lái)越高,需求量越來(lái)越大,這與蛋白質(zhì)資源缺乏的矛盾日益突出

14、。啤酒生產(chǎn)過程中產(chǎn)生了大量的廢料，這些物質(zhì)大部分沒有得到較好的利用，大多停留在原始粗加工上，創(chuàng)利甚微，不但浪費(fèi)資源，甚至?xí)廴经h(huán)境。釀造醬油所用的原料包括蛋白質(zhì)原料、淀粉原料、食鹽、水等幾個(gè)方面，而其中的蛋白質(zhì)原料和淀粉原料提供是發(fā)酵釀造過程中所需要的各種主要營(yíng)養(yǎng)成分。根據(jù)實(shí)驗(yàn)研究，對(duì)啤酒的廢料的成分進(jìn)行分析可知，廢棄啤酒廢料中蛋白質(zhì)含量為45%50%，除此之外，還有豐富的B族維生素、有機(jī)磷、有機(jī)鈣、鐵等物質(zhì)，在啤酒生產(chǎn)中，每生產(chǎn)1000噸的啤酒，就有1.2噸的啤酒廢料產(chǎn)生，其中濕啤酒糟的成分為：水分75%80%、蛋白質(zhì)8.5%、可溶性淀粉10%、粗纖維5%等。因此，從理論上來(lái)說(shuō)廢啤酒糟完全可

15、以替代全部或部分豆粕作為釀造醬油的原料。本課題主要切入點(diǎn)是針對(duì)醬油釀造菌株-米曲霉蛋白酶活力低的問題,為了提高原料的利用率, 降低生產(chǎn)成本等問題，將研究菌種在不同培養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)形狀，生長(zhǎng)速度及其產(chǎn)酶活力情況來(lái)選育優(yōu)良的米曲霉菌種。2 研究?jī)?nèi)容根據(jù)本課題研究意義，主要掌握選擇合適的米曲霉培養(yǎng)方法、適宜的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件，確定最佳產(chǎn)酶條件，來(lái)選育優(yōu)良的米曲霉菌種，以提高醬油生產(chǎn)的原料利用率，生產(chǎn)效率和出品率。具體內(nèi)容包括：（1）通過米曲霉的活化，觀察菌種的菌絲體形狀，顏色等來(lái)得到純化米曲霉；（2）單因子研究影響因素，主要包括不同的pH、溫度、培養(yǎng)時(shí)間條件下對(duì)種曲的蛋白酶活力分布的影響。（3）通過

16、米曲霉的優(yōu)化證明啤酒下腳料完全有可能全部或部分替代豆粕進(jìn)行醬油釀造。3實(shí)驗(yàn)方法3.1米曲霉的分離純化米曲霉由杭州醬油釀造廠提供（1）米曲霉的分離純化（平皿培養(yǎng)）培養(yǎng)基組分：豆汁：1000ml45°Bé 可溶性淀粉：20g 磷酸二氫鉀1g 瓊脂：025g硫酸銨：0.5g 硫酸鎂：0.5g 30保溫箱內(nèi)培養(yǎng)2d，選取菌落半徑比值大，菌落生長(zhǎng)快，孢子多的單一菌落。（2）米曲霉的斜面培養(yǎng)在恒溫箱30培養(yǎng)23d，直至長(zhǎng)滿茂盛的黃綠色孢子。（3）米曲霉的二次擴(kuò)大培養(yǎng)（三角瓶培養(yǎng)）培養(yǎng)基組分： 麩皮80g 面粉20g 水80-90ml在30保溫箱內(nèi)培養(yǎng)3d左右，瓶?jī)?nèi)曲料上布滿白斑及菌絲，

17、孢子充分長(zhǎng)滿曲料。3.2蛋白水解酶測(cè)定方法：福林-酚試劑法酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：表3.1 蛋白酶標(biāo)準(zhǔn)曲線制作試劑管號(hào)1號(hào)2號(hào)3號(hào)4號(hào)5號(hào)6號(hào)7號(hào)酪氨酸含量（mgL）0102030405060標(biāo)準(zhǔn)酪氨酸（100 mgL）(ml)0.00.10.20.30.40.50.6蒸餾水(ml)1.00.90.80.70.60.50.40.6 molL Na2CO3溶液（ml）5.0Folin-酚乙試劑(ml)0.5混勻后，置于40恒溫水浴保溫20minA66000.0650.1660.2690.3920.4500.606數(shù)據(jù)分析繪制曲線，見下圖：圖3.1 蛋白酶標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線公式：y=0.1005x 0

18、.12373.3實(shí)驗(yàn)的基本方案根據(jù)大量文獻(xiàn)查閱，綜合分析，在醬油釀造工藝中傳統(tǒng)最佳原料配比為：麩皮80% 面粉20% 水份70%。本課題在此配比方案下展開試驗(yàn)。3.3.1米曲霉在不同曲料pH條件下的酶活力在發(fā)酵過程中，起始pH的不同，會(huì)造成微生物產(chǎn)酶的不同。因此，本實(shí)驗(yàn)以米曲霉為試驗(yàn)菌種，對(duì)起始pH進(jìn)行確定，選擇范圍為pH為49。故以配置pH 4.0、 5.0、6.0、7.0、8.0、9.0六種發(fā)酵培養(yǎng)基，接入菌種，37，160r/min搖床培養(yǎng)24h后測(cè)定粗酶液酶活。在最佳溫度下進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，測(cè)定其產(chǎn)酶活力，確定最佳發(fā)酵pH。3.3.2培養(yǎng)溫度對(duì)米曲霉產(chǎn)蛋白酶活力的影響將米曲霉種子接于文獻(xiàn)查

19、閱的傳統(tǒng)配比種曲培養(yǎng)基中，在自然pH下，于溫度分別于24、28、32、36，160r/min搖床培養(yǎng)24h后測(cè)定米曲霉的蛋白酶活力，并以此確定最佳發(fā)酵溫度。3.3.3米曲霉在不同培養(yǎng)時(shí)間下的酶活力米曲霉的發(fā)酵時(shí)間也是醬油生產(chǎn)的一個(gè)重要的控制環(huán)節(jié)，在發(fā)酵過程中，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，曲霉菌的產(chǎn)酶活力也會(huì)發(fā)生變化。考慮到米曲霉產(chǎn)酶量，選取3個(gè)不同的發(fā)酵時(shí)間，40小時(shí)、44小時(shí)、48小時(shí)三個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)定蛋白酶活力，以確定最佳的培養(yǎng)時(shí)間。3.3.4米曲霉的替代原料培養(yǎng)原料配比：（參照組）麩皮80% 面粉20% 水70%酒糟部分替代麩皮的配比方案見下表3.2表3.2 酒糟部分替代麩皮進(jìn)行培養(yǎng)NO.酒糟：麩皮培養(yǎng)

20、時(shí)間1554024434843740544648773408449481010040114412484 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論4.1在不同初始pH下試驗(yàn)數(shù)據(jù)與討論通過實(shí)驗(yàn)在pH49的不同初始酸堿度條件下，得出具體數(shù)據(jù)，見表4.1表4.1 不同pH值下米曲霉蛋白酶活力pH456789蛋白酶活力（U/g）9909071104.81405.11156.1880.7表4.1制作曲線分析如下，圖4.1圖4.1 不同酸堿度下蛋白酶活曲線圖由上述圖4.1結(jié)果可看出，蛋白酶對(duì)蛋白質(zhì)的降解能力與其所處的pH環(huán)境有密切相關(guān)，此研究表明了米曲霉蛋白酶的綜合活力與pH的關(guān)系和變化規(guī)律，更好的了解米曲霉的特性，有助于選擇更合適

21、生產(chǎn)的菌株。從圖4.1可看出pH值在45都較偏低，pH在6的值上酶活力開始上升pH為7時(shí)達(dá)到最高峰，大于7的pH的環(huán)境下，酶活下降，所以可得出米曲霉的蛋白酶活力的最佳pH為7。4.2不同溫度下進(jìn)行試驗(yàn)的數(shù)據(jù)與討論通過實(shí)驗(yàn)在不同溫度條件下測(cè)定酶活，得出具體數(shù)據(jù)，見表4.2表4.2 不同溫度下測(cè)定米曲霉蛋白酶活力溫度（）24283236蛋白酶活力（U/g）108.4855.81163.5601表4.2數(shù)據(jù)分析見下圖，圖4.2圖4.2 不同溫度下蛋白酶活曲線由圖4.2可看出，蛋白酶酶活力與其所處的溫度有密切相關(guān)，溫度在24時(shí)酶活比較低，隨著溫度的升高酶活呈正比例上升在32達(dá)到最高點(diǎn)，在32以上，酶活

22、呈反比例下降。所以米曲霉產(chǎn)蛋白酶的最適溫度為32。4.3在不同培養(yǎng)時(shí)間下試驗(yàn)數(shù)據(jù)與討論通過實(shí)驗(yàn)在不同發(fā)酵時(shí)間條件下，得出具體的蛋白酶活力數(shù)據(jù)，見表4.3表4.3 不同發(fā)酵時(shí)間下的蛋白酶活力試驗(yàn)結(jié)果時(shí)間（h）404448蛋白酶活力（U/g）10891338.5998.6表4.3數(shù)據(jù)分析見下圖圖4.3 不同培養(yǎng)時(shí)間下的蛋白酶活力從圖4.3可得，米曲霉的蛋白酶的活力和培養(yǎng)時(shí)間有密切的關(guān)系，在4044小時(shí)之間，蛋白酶活力成直線上升，44h后，酶活力下降，在44h達(dá)到最高峰，所以最佳培養(yǎng)時(shí)間為44小時(shí)。4.4替代原料的米曲霉酶活試驗(yàn)數(shù)據(jù)與討論表4.4 傳統(tǒng)與替代的對(duì)比參照數(shù)據(jù)酒糟：麩皮培養(yǎng)時(shí)間蛋白酶活力

23、（U/g）外觀參照組401089+生長(zhǎng)旺盛441338.548998.65540993+生長(zhǎng)旺盛441400.4481133.43740975.7+生長(zhǎng)較好441302481020.97340867.5+生長(zhǎng)一般44953.348927.810040224.1+生長(zhǎng)較差44307.448233.9由表4.4可見，從米曲霉的生長(zhǎng)表觀指標(biāo)來(lái)看，除全部替代組菌種生長(zhǎng)明顯較差外，其余各實(shí)驗(yàn)組菌體均生長(zhǎng)良好。曲料疏松，內(nèi)部白色菌絲生長(zhǎng)旺盛，并密密著生黃綠色的孢子。從米曲霉生長(zhǎng)周期來(lái)看，培養(yǎng)20小時(shí)左右，白色菌絲開始生長(zhǎng)，再培養(yǎng)6-8小時(shí)，開始長(zhǎng)出黃綠色孢子，至40-44小時(shí)，孢子生長(zhǎng)旺盛，此時(shí)酶活最佳。

24、從表結(jié)果可看出，廢啤酒糟：麩皮=5:5配比組酶活最高。而啤酒糟：麩皮=3:7這一配比組，亦可用來(lái)制曲。從表4.4對(duì)照幾組數(shù)據(jù)可以看出，廢酒糟：麩皮=5:5配比組，廢酒糟：麩皮=3:7配比組的蛋白酶酶活與對(duì)照組的酶活數(shù)據(jù)十分接近，由此實(shí)驗(yàn)結(jié)果可得知廢啤酒糟部分替代原料產(chǎn)生醬油是可行的，在原料配比適當(dāng)，不影響質(zhì)量的前提下，從降低成本角度出發(fā)，可選擇廢啤酒糟：麩皮=5:5配比組為最佳方案。5 小結(jié)5.1結(jié)論 米曲霉菌種是釀造醬油品質(zhì)優(yōu)劣的關(guān)鍵，本文通過一系列的研究表明米曲霉的生命活動(dòng)與其周圍的環(huán)境條件有密切的相關(guān)性。只有在適宜的外界環(huán)境下，才能進(jìn)行良好的生長(zhǎng)繁殖，產(chǎn)生人類所需的各種酶。本課題的實(shí)驗(yàn)研

25、究表明在傳統(tǒng)最佳原料配比的基礎(chǔ)上，研究表明，在單因子試驗(yàn)中得出，產(chǎn)蛋白酶的最佳ph為7，最佳溫度為32，最佳培養(yǎng)時(shí)間為44小時(shí)。此外，在替代原料實(shí)驗(yàn)中，運(yùn)用對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的數(shù)據(jù)對(duì)照，可以看出，啤酒糟：麩皮=5:5與傳統(tǒng)工藝培養(yǎng)的酶活基本一致，表明了用廢啤酒糟替代原料的實(shí)踐可行性。5.2本試驗(yàn)創(chuàng)新之處 隨著人民生活水平的提高,對(duì)醬油質(zhì)量要求越來(lái)越高,需求量越來(lái)越大,這與蛋白質(zhì)資源缺乏的矛盾日益突出。利用啤酒廢料生產(chǎn)醬油,既解決啤酒廠的污染問題,又開發(fā)了醬油生產(chǎn)的原料,使醬油質(zhì)量提高,這對(duì)啤酒和醬油釀造工業(yè)的發(fā)展部互為有利。投資少、產(chǎn)出多、效益大、實(shí)用性強(qiáng)、有明顯的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益,利國(guó)利民,前

26、景遠(yuǎn)大,意義深遠(yuǎn)。這在我國(guó)醬油生產(chǎn)中具有十分重要的意義。本課題在指導(dǎo)老師帶領(lǐng)下，在不影響質(zhì)量的前提下，考慮價(jià)格，研究米曲霉培養(yǎng)條件的同時(shí)結(jié)合廢啤酒糟替代原料為研究方向，用啤酒糟來(lái)替代原料，為生產(chǎn)節(jié)約成本，創(chuàng)造更大的經(jīng)濟(jì)效益。實(shí)驗(yàn)表明其成品醬油基本符合國(guó)家二級(jí)醬油標(biāo)準(zhǔn)，若將這一方法成功推廣，將對(duì)部分農(nóng)副產(chǎn)品延伸產(chǎn)業(yè)鏈，降低醬油釀造成本、提高相關(guān)企業(yè)以及環(huán)境保護(hù)具有積極的意義。致 謝本論文是在導(dǎo)師胡文浪老師的悉心指導(dǎo)下完成的，值此論文完成之際，我謹(jǐn)向我的導(dǎo)師胡文浪表示衷心的感謝，尤為感謝胡老師在我實(shí)習(xí)期間對(duì)我學(xué)業(yè)上的悉心指導(dǎo)和生活上的熱情關(guān)懷。他對(duì)事業(yè)堅(jiān)忍不拔的追求、對(duì)科研傾情的全心投入、豐富的實(shí)

27、踐經(jīng)驗(yàn)都給我留下了深刻的印象，值得我好好學(xué)習(xí)，相信會(huì)鼓舞我一生。同時(shí)，還要感謝曾給予我關(guān)心和幫助的浙江樹人大學(xué)生物與環(huán)境工程學(xué)院的各位老師和同學(xué)。最后，對(duì)即將參加論文評(píng)議、評(píng)閱和對(duì)本論文提出寶貴意見的所有專家和老師表示誠(chéng)摯的感謝。 舒琴情 2011年6月 參考文獻(xiàn)1 劉金霞醬油釀造過程中米曲霉酶系的影響因素J江蘇調(diào)味副食品，2002，(73)：10-112 王朋朋，常娟，王平，等蛋白酶和淀粉酶產(chǎn)生菌的篩選及酶學(xué)性質(zhì)分析研究M動(dòng)物生產(chǎn)，2009，(21)：48-513 闞清華，湯斌，張慶慶，等滬釀3.042米曲霉產(chǎn)中性蛋白酶條件的優(yōu)化D安徽工程科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，25(02)：26-294

28、彭必雨，王霞，王劍，等制革常用蛋白酶活力測(cè)定方法及結(jié)果比較J皮革科學(xué)與工程，2004，14(03)：07-105 朱文優(yōu)，周守?cái)⒚浊垢弋a(chǎn)生淀粉酶菌株的誘變選育R中國(guó)釀造，2010， (06)：57-596 黑婷婷，魯梅芳，王春玲，等米曲霉A100-8中與低鹽固態(tài)醬油發(fā)酵相關(guān)的酶學(xué)性質(zhì)研究 R中國(guó)釀造，2010，(06)：37-407冷云偉，孟凡松醬油制曲過程中溫、濕、風(fēng)的調(diào)控方法R中國(guó)釀造，1997，(12)：9-118黎景麗，文一斌，文一彪從醬油發(fā)酵機(jī)理論證醬油發(fā)酵工藝應(yīng)盡早改革（一）J中國(guó)調(diào)味品，2009，(11)：112-1189黃持都，魯緋，紀(jì)鳳娣，等醬油研究進(jìn)展D中國(guó)釀造，2009

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30、4 Yanchang LIANG， Li PAN,y and Ying LINAnalysis of Extracellular Proteins of Aspergillus oryzae Grown on Soy Sauce Koji J. BiosciBiotechnol， Biochem， 2009，73（1）：31-3415 申璟瑜利用啤酒下腳料釀造鮮味醬油的技術(shù)研究J 科技研究，2005，1(1)：8-1016 李新建利用啤酒廢酵母加工醬油的制作J 中國(guó)調(diào)味品，2010，6(35)：66-6817 李大錦，王汝珍醬油的歷史與發(fā)展N 科技園地，2010，6：3218 林祖申UE336

31、-2米曲霉應(yīng)用于醬油生產(chǎn)的研究J 釀造技術(shù)，2003，4(127)：24-2619湯鳴強(qiáng)，鄭挺，曾小芳，等釀造醬油米曲霉產(chǎn)中性蛋白酶提取與酶學(xué)性質(zhì)研究J中國(guó)調(diào)味品，2008，2 (2)：38-5020 湯劉慶榮，方元啊祥淺談pH對(duì)醬油釀造的影響J中國(guó)調(diào)味品2008.12：12-3121 湯鳴強(qiáng)，曾小芳米曲霉F-81菌株產(chǎn)中性蛋白酶的分離純化 J生物技術(shù)通報(bào)，2010，4：194-19722 胡元森，潘濤，李翠香，等酸性A2淀粉酶的分離純化與酶學(xué)性質(zhì)研究J生物技術(shù)通報(bào)，2010，(03)：199-20223 傅金泉米曲霉的保藏與應(yīng)用創(chuàng)新J釀酒科技，2010，(04)：99-10024 趙德安我國(guó)醬油釀造工藝的演變與發(fā)展趨勢(shì)J 中國(guó)釀造，2009，09(210)：15-1725 彭必雨，王霞，王劍，等制革常用蛋白酶活力測(cè)定方法及結(jié)果的比較J皮革科學(xué)與工程，2011，(03)：07-1026黃持都，魯緋，紀(jì)鳳娣，等醬油研究進(jìn)展D中國(guó)釀造，2009，(10)：7-9指導(dǎo)教師 年 月 日教學(xué)院長(zhǎng) 年 月 日13梨周墅二衍求銀雍聞鍘棺賠