微生物檢測生化試驗

1、微生物檢測生化試驗分析中心微生物常見生化試驗生化試驗三糖鐵（TSI）瓊脂糖（醇、苷）發(fā)酵試驗氨基酸脫羧酶試驗MR-VP試驗吲哚試驗硝酸鹽還原試驗 各種細(xì)菌具有各自獨(dú)特的酶系統(tǒng)，因而對底物的分解能力不同，其代謝產(chǎn)物也不同。用生物化學(xué)方法測定這些代謝產(chǎn)物，可用來區(qū)別和鑒定細(xì)菌的種類。利用生物化學(xué)方法來鑒別不同細(xì)菌，稱為細(xì)菌的生物化學(xué)試驗或稱生化反應(yīng)。 生化試驗營養(yǎng)物質(zhì)分解糖的類型硫化氫指示劑酸堿指示劑還原劑三糖鐵TSI細(xì)菌只分解葡萄糖產(chǎn)酸pH下降斜面和底層全部變黃TSI細(xì)菌只分解葡萄糖產(chǎn)酸pH下降斜面和底層全部變黃TSI細(xì)菌只分解葡萄糖產(chǎn)酸pH下降斜面和底層全部變黃葡萄糖量少產(chǎn)酸量少暴露于空氣中分

2、解細(xì)菌分解蛋白胨生成堿性物質(zhì)中和酸pH上升斜面變紅底層缺氧酸不分解保持黃色CO2OH-TSI細(xì)菌只分解葡萄糖產(chǎn)酸pH下降斜面和底層全部變黃葡萄糖量少產(chǎn)酸量少暴露于空氣中分解細(xì)菌分解蛋白胨生成堿性物質(zhì)中和酸pH上升斜面變紅底層缺氧酸不分解保持黃色細(xì)菌產(chǎn)生H2S與鐵鹽作用生成黑色硫化鐵TSI細(xì)菌只分解葡萄糖產(chǎn)酸pH下降斜面和底層全部變黃葡萄糖量少產(chǎn)酸量少暴露于空氣中分解細(xì)菌分解蛋白胨生成堿性物質(zhì)中和酸pH上升斜面變紅底層缺氧酸不分解保持黃色細(xì)菌產(chǎn)生H2S與鐵鹽作用生成黑色硫化鐵TSI細(xì)菌能分解葡萄糖、乳糖、蔗糖產(chǎn)酸pH下降斜面和底層全部變黃但產(chǎn)酸量大擴(kuò)散到表面斜面、底層均為黃色產(chǎn)氣的菌有氣泡TSI

3、細(xì)菌能分解葡萄糖、乳糖、蔗糖產(chǎn)酸pH下降斜面和底層全部變黃但產(chǎn)酸量大擴(kuò)散到表面斜面、底層均為黃色產(chǎn)氣的菌有氣泡產(chǎn)氣量大的會有斷層TSI細(xì)菌能分解葡萄糖、乳糖、蔗糖產(chǎn)酸pH下降斜面和底層全部變黃但產(chǎn)酸量大擴(kuò)散到表面斜面、底層均為黃色產(chǎn)氣的菌有氣泡產(chǎn)氣量大的會有斷層TSI細(xì)菌能分解葡萄糖、乳糖、蔗糖產(chǎn)酸pH下降斜面和底層全部變黃但產(chǎn)酸量大擴(kuò)散到表面斜面、底層均為黃色產(chǎn)氣的菌有氣泡產(chǎn)氣量大的會有斷層TSI分解糖的類型產(chǎn)氣產(chǎn)H2S氣體糖（醇、苷）發(fā)酵不同種類細(xì)菌含有發(fā)酵不同糖（醇、苷）類的酶，因而對各種糖（醇、苷）類的代謝能力也有所不同，即使能分解某種糖（醇、苷）類，其代謝產(chǎn)物亦可不同。一般在基礎(chǔ)培養(yǎng)

4、基中加入0.5-1.0特定糖（醇、苷）類及酸堿指示劑（溴麝香草酚藍(lán)）。通過觀察細(xì)菌對培養(yǎng)基中所含糖（醇、苷）降解的能力來鑒定細(xì)菌的種類。所以糖（醇、苷）發(fā)酵是鑒定細(xì)菌生化反應(yīng)試驗中最主要的試驗。 液體半固體接種培養(yǎng)液體半固體觀察結(jié)果有的細(xì)菌可將七葉苷分解成七葉素，七葉素與培養(yǎng)基中枸櫞酸鐵的二價鐵離子反應(yīng)，生成黑色的化合物，使培養(yǎng)基呈黑色。七葉苷水解試驗氨基酸脫羧酶試驗細(xì)菌利用培養(yǎng)基中的葡萄糖為氨基酸脫羧制造酸性環(huán)境。脫羧酶是一種誘導(dǎo)酶，在沒有相應(yīng)氨基酸的培養(yǎng)基中細(xì)菌不產(chǎn)生該酶。細(xì)菌產(chǎn)生氨基酸脫羧酶使氨基酸脫羧生成胺和二氧化碳，由于胺的生成使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性。在這個過程中溴甲酚紫作為酸堿指示劑顏色

5、先由紫色變?yōu)辄S色，又在脫羧后變回紫色，而不含氨基酸脫羧酶的保持黃色。 陽性：試驗管-紫色，對照管-黃色陰性：試驗管-黃色，對照管-黃色MR-VP試驗MR（甲基紅）試驗：檢測細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸的能力。葡萄糖丙酮酸甲酸、乙酸、乳酸pH下降低于4.4甲基紅為紅色葡萄糖丙酮酸脫羧成醇pH維持在6.2甲基紅為黃色陰性 陽性V-P試驗：檢測細(xì)菌利用葡萄糖產(chǎn)生乙酰甲基甲醇的能力。葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇脫羧堿性條件（乙液）氧氣二乙酰+蛋白胨中的胍基紅色絡(luò)合物加速反應(yīng)-萘酚（甲液）陰性 陽性吲哚試驗?zāi)承┘?xì)菌能產(chǎn)生色氨酸酶，分解培養(yǎng)基中色氨酸，產(chǎn)生吲哚（靛基質(zhì)），于吲哚試劑中的對二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，形成玫瑰紅色物質(zhì)。陰性 陽性硝酸鹽還原試驗?zāi)承┘?xì)菌具有還原硝酸鹽的能力，可將硝酸鹽還原成亞硝酸鹽、氨或氮?dú)?。A液（對氨基苯磺酸冰醋酸溶液）B液（-萘胺乙醇溶液）硝酸鹽亞硝酸鹽A液冰醋酸亞硝酸A液對氨基苯磺酸重氮基苯磺酸B液-萘胺N-萘胺偶苯磺酸（紅色） 陽性 陰性 空白如果欲檢查培養(yǎng)基中硝酸鹽是否被分解，可取鋅粉少許加入培養(yǎng)基內(nèi)