[2020高考生物復(fù)習(xí)江蘇]選修一第34講

1、選修一生物技術(shù)實(shí)踐第34講微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用1培養(yǎng)基考綱考情知考向核心素養(yǎng)一一提考能1.微生物的分離和培養(yǎng)（B）2某種微生物數(shù)量的測定（C）3. 微生物的應(yīng)用（B）4. （實(shí)驗(yàn)）微生物的分離和培養(yǎng)（b）科學(xué)思維分析培養(yǎng)基的成分及 其作用，比較平板劃 線法和稀釋涂布平板 法的異同最新考綱科學(xué)探究設(shè)計實(shí)驗(yàn)探究微生物培養(yǎng)的條件近三年江蘇考情2018 年 T31（ 6 分）；2017 年 T5（ 2 分）、T31（ 3 分）；2016 年 T10（ 2 分）、T19（ 2 分）、T25（ 3 分）；2015 年 T13（2 分）、T31（ 8 分）社會責(zé)任關(guān)注有害微生物的控制及宣傳健康生活考點(diǎn)一微生物

2、的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)（1）概念:人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基（2）營養(yǎng)組成:一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽.此外,還需要滿足微生物生 長對PH、氧氣以及特殊營養(yǎng)物質(zhì)的要求.（3）種類 按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基 按照成分的來源可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基 按照功能用途可分為選擇培養(yǎng)基、鑒別培 基等 .2. 無菌技術(shù)（1）含義:在培養(yǎng)微生物的操作中,所有防止雜菌污染的方法（2）常用方法11全 .I1灼 jXi化學(xué)筠擁消稈醫(yī)iili扌芝術(shù)滅IVIXiIftIEtfjX3. 大腸桿菌的純化培養(yǎng)(1) 制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基I計算稱量溶化火菌

3、倒平板(2) 純化大腸桿菌的方法 純化培養(yǎng)原理:想方設(shè)法在培養(yǎng)基上得到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的菌 _ 落,即可獲得較純的菌種. 純化大腸桿菌的關(guān)鍵步驟：接種. 常用的微生物接種方法有兩種a.平板劃線法:是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌 種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面.如圖所示B區(qū)t出現(xiàn)r單牛窗落.正毎Ifi況I.在培養(yǎng)基上劃線播種時.劃觀的義 舉依 A-C-Hb.稀釋涂布平板法:是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分 別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng).(3) 菌種的保存方法 對于頻繁使用的菌種可以采用臨時保藏的方法. 對于需要長期保存的菌種,

4、可以采用甘油管藏的方法.O深挖教材(1) (人教版選修一 P16 “旁欄思考題”拓展)請你判斷以下材料或用具是否需 要消毒或滅菌.如果需要,請選擇合適的方法 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿 玻棒、試管、燒瓶和吸管 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手 提示 需要滅菌；需要消毒.（2）（人教版選修一 P17 “倒平板操作”）為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰 ？ 平板冷凝后，為什么要將平板倒置？提示通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基.平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒 置,既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基I 造成污染O邊肅拾遺（人教版選修一

5、P18 “旁欄”）微生物的接種方法除了平板劃線法和稀釋涂布平 板法外,還包括斜面接種、穿刺接種等方法微生物接種的核心都是要防止雜菌的 污染,保證培養(yǎng)物的純度.I應(yīng)試對援高割濟(jì)悟鳥希沁計1. （2018全國卷U ,37）生物一一選修1:生物技術(shù)實(shí)踐在生產(chǎn)、生活和科研實(shí)踐中，經(jīng)常通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染.回答下列問題：（1）在實(shí)驗(yàn)室中,玻璃和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具 （填“可以”或“不可以”）放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌.（2）牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法，與煮沸消毒法相比，這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)是（3） 密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒，其原因是紫外線能.在照射前,適量噴灑,可強(qiáng)化消

6、毒效果.（4） 水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過 （填“氯氣” “乙醇”或“高錳酸 鉀”）消毒的.（5）某同學(xué)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時，若壓力達(dá)到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達(dá)到相應(yīng)溫度,最可能的原因是 .解析 （1）在實(shí)驗(yàn)室中，能耐高溫的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具等可以放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌.（2）巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法與煮沸消毒法相比，其優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)為在達(dá)到消毒目的的同時，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少（3）紫外線照射能消毒的原因是其能夠破壞微生物細(xì)胞中的DNA分子.在利用紫外線照射前，適量噴灑石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可強(qiáng)化消毒效果（4） 自來水通常采用氯氣消毒（5）采用高壓蒸汽滅

7、菌時，若壓力達(dá)到設(shè)定要求，而溫 度未達(dá)到相應(yīng)要求，最可能的原因是沒有排盡高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)的冷空氣 答案 （1）可以（2）在達(dá)到消毒目的的同時，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少（3）破壞DNA結(jié)構(gòu) 消毒液 （4）氯氣 （5）未將鍋內(nèi)冷空氣排盡2. （2018揚(yáng)州一模）在白酒發(fā)酵的窖池中，當(dāng)培養(yǎng)液的PH4.5時,酵母菌的代謝 活動逐漸受到抑制，甚至停止.耐酸性酵母菌能在pH3.5的環(huán)境下繼續(xù)表現(xiàn)出較 強(qiáng)發(fā)酵能力，適宜作白酒發(fā)酵生產(chǎn)用菌種，為選育適合白酒生產(chǎn)的耐酸性強(qiáng)的酵母 菌,研究者進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)請回答下列有關(guān)問題：（1）在發(fā)酵過程中，窖池中培養(yǎng)液的PH會逐漸下降 原因是（2）取窖底泥，溶于10 mL無菌水中,再

8、取1 mL上清液接入一定量的麥芽汁培養(yǎng)基中培養(yǎng),其目的是,2天后分別接種到不同酸堿度的麥芽汁培養(yǎng)基上，培養(yǎng)結(jié)果見下表為選擇合適的菌種，根據(jù)培養(yǎng)結(jié)果，可從表格中 PH范圍為的培養(yǎng)基中獲得菌種（“ + ”越多表示菌體長得越好）PH = 5PH = 4PH= 3PH = 2.5PH = 2+ + + + + + + + + + +（3）通過下圖所示 法進(jìn)行純化培養(yǎng)，取最終的酵母菌稀釋液0.1 mL滴在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布，要將涂布器后才能進(jìn)行操作.在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時間后，其中某組的3個平板上菌落數(shù)分別為99個、92個、94個,則可以推 測酵母菌液中每毫升含菌數(shù)為 個.運(yùn)用這種方法統(tǒng)計的結(jié)果往往較實(shí)

9、際值偏小,原因是.JBtCIJ mLW mLi> mLIJ mLilJrwL+1In nlL S¾jSC兀藺水無蔚卓無苗術(shù)初！蔽（4）實(shí)驗(yàn)獲得了三個耐酸性較強(qiáng)的酵母菌菌株，特點(diǎn)如下表.菌株ABC特點(diǎn)PH 3.5時,生長代謝正常、優(yōu)于其他常規(guī)菌種PH 3.5時,生長代謝正常,pH46時不止 常PH2.56,生長代謝正常、優(yōu)于其他常規(guī)菌種依據(jù)菌株特點(diǎn)，研究者認(rèn)為菌株更適合作為白酒發(fā)酵菌株，作出這一判斷的理由是.解析 （1在發(fā)酵過程中，酵母菌細(xì)胞呼吸產(chǎn)生 C02,可形成碳酸，可能還產(chǎn)生其 他酸性代謝產(chǎn)物，所以窖池中培養(yǎng)液的PH會逐漸下降.（2）麥芽汁培養(yǎng)基中含酵 母菌生長的各種物質(zhì)，

10、可以使酵母菌大量繁殖；需要選育的是耐酸性強(qiáng)的酵母菌，而耐酸性酵母菌能在pH 3.5的環(huán)境下繼續(xù)表現(xiàn)出較強(qiáng)發(fā)酵能力，所以根據(jù)培養(yǎng) 結(jié)果,可從表格中PH為23的培養(yǎng)基中獲得菌種.（3）圖示純化培養(yǎng)的方法為 稀釋涂布平板法；在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布時，要將涂布器灼燒冷卻后才能進(jìn)行操作； 根據(jù)圖解可知菌液被稀釋了106倍,該稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)為（99+ 92+ 94） £= 95個,涂布平板時所用的稀釋液的體積是 0.1 mL,所以該酵母菌液 中每毫升含菌數(shù)為95 ÷.1×106= 9.5×108個；由于有的菌落可能是由2個或多 個菌體形成的，所以運(yùn)用這種

11、方法統(tǒng)計的結(jié)果往往較實(shí)際值偏小.（4）根據(jù)表格分析可知,C菌對PH的耐受范圍更大,發(fā)酵初期PH近中性,C菌種適合此環(huán)境，更 易于形成優(yōu)勢菌群；發(fā)酵后期 PH逐漸降低,C菌種依然能正常生長，所以C菌株 更適合作為白酒發(fā)酵菌株.答案（1）細(xì)胞呼吸產(chǎn)生CO2,可形成碳酸，代謝過程還產(chǎn)生了其他酸性物質(zhì) （2） 使得酵母菌大量繁殖 23（3）稀釋涂布平板 灼燒冷卻 9.5×108有的菌落可能是由2個或多個菌體形成的 （4） C該菌對PH的耐受范圍更大，發(fā) 酵初期PH近中性,C菌種適合此環(huán)境，更易于形成優(yōu)勢菌群；發(fā)酵后期PH逐漸降 低,C菌種依然能正常生長（答案合理即可）I歸納提煉I走出微生物培

12、養(yǎng)的5個誤區(qū)(1) 不是所有微生物培養(yǎng)基中均需加入特殊營養(yǎng)物質(zhì)碳源、氮源、水分、無機(jī) 鹽是微生物生長必需的四大營養(yǎng)成分，有些微生物可自行合成特殊營養(yǎng)物質(zhì)，而對 那些合成能力有限或不能合成特殊營養(yǎng)物質(zhì)的微生物(如乳酸菌)，則需在培養(yǎng) 基中添加諸如維生素等物質(zhì)(2) 平板劃線法純化大腸桿菌時不同階段灼燒接種環(huán)的目的不同 第一次操作：殺死接種環(huán)上原有的微生物 每次劃線之前：殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來 源于上次劃線的末端. 劃線結(jié)束后:殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者(3) 倒平板的溫度一般在50 C左右適宜,溫度過高會燙手，溫度過低培養(yǎng)基又會 凝固平

13、板冷卻凝固后需倒置，這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā) ，又防止 皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成培養(yǎng)基污染考點(diǎn)二微生物的篩選和計數(shù) B主檢理I苗戊面木尉許1土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)(1) 原理與流程 的細(xì)尿索配制1¾ -氧雞曲培莽垂+就鉤生蛻的細(xì)帝就E龍靜瞬尿前的圳洌JXrtjf (F用特mfl汁數(shù)應(yīng)戍血拙胞間!計: -i,'普號廠f漁血平艷M養(yǎng)一甫瘩訃地(2) 統(tǒng)計菌落數(shù)目時，培養(yǎng)基表面生長的1個菌落,來源于樣品稀釋液中1個活菌. 為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計數(shù).(3) 從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)的計算方法是(平均菌落數(shù)C&

14、#247;涂布的稀釋液體積V×稀釋倍數(shù)M )點(diǎn)悟:利用稀釋涂布平板法成功統(tǒng)計菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)南♂尪?4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評價養(yǎng)否 ft ffl燉呃的菲Illl屮£的J生拴4未穢朵離祈舉玷護(hù)t囲用旳播茅樣一_筍議址編話_被朵歯再聲(i*PiAH 他宦 轉(zhuǎn) I S的M ¾中)JS押捽藝具IJaJ，操作成功丹糾2&噸12個以上菌落 敦目在:劃nH平扳iSff*的諸落 UH>Ft-J 培 罪苓匕的iWh比壯鶴 ftH若就耽同一種七樣.統(tǒng)計結(jié)卑應(yīng) 搖近2.分解纖維素的微生物的分離(1)纖維素酶及纖維素分解菌篩選原理、方法忌 L墟：纖S- -i.它空冷包 峑

15、LpSMfhM.即匚酶、匚醇finiW -作用:紆曲求需齊雉二怵業(yè)塑蜀儲剛采紅I紅仿e F 竝巴紅aifi.* 一一 一J止現(xiàn)酬遵1諧選方注：Imtjf. Miffl誼懸西產(chǎn)生透關(guān)圈 崇昭逸艸雉索分新培Tr-尿：Wtf±為啡-碾觀開辿押培P V(2) 實(shí)驗(yàn)流程工煉麗卜話含纖惟祇的環(huán)埴 j押培養(yǎng)卜liff.以tll纖ftit分JIRiW的濃屢 Il-j-mF 液P轄樣品布ww的培養(yǎng)基上:挑請用牛復(fù)明冏甬蔭屈(3) 分離纖維素分解菌所用的兩種培養(yǎng)基比較分離纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)中先用選擇培養(yǎng)基，再用鑒別培養(yǎng)基.選擇培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基,以纖維素作為碳源和能源的微生物可以正常生長，而 其他絕大多

16、數(shù)微生物不能正常生長. 鑒別培養(yǎng)基含瓊脂,為固體培養(yǎng)基,細(xì)菌可在該培養(yǎng)基上形成肉眼可見的菌落 剛果紅染色法應(yīng)用于鑒別（選擇、鑒別）培養(yǎng)基 .I應(yīng)試對接髙考I怕頁可衣反營（2018南京、鹽城一模）多氯聯(lián)苯是一種對人體有很大危害的有機(jī)物質(zhì)，污染土 壤后,很難清除研究發(fā)現(xiàn),部分酵母菌具有分解多氯聯(lián)苯的作用為消除這種污染, 科研人員計劃從受污染的土壤中篩選出高效分離多氯聯(lián)苯的菌株 請回答問題：（1） 篩選分解多氯聯(lián)苯的菌株時，應(yīng)將土壤樣品 ,接種到以為唯一碳源的培養(yǎng)基上，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基（2） 對初步提取到的菌株要進(jìn)行 培養(yǎng),一般操作方法有兩種，其中之一是下圖所示的法櫛釋倍於12310

17、420495393IDO4557511 OUy¥73（3）將酵母菌溶液分別稀釋10倍、100倍、1 OOO倍.每個濃度都接種三個平板每個平板均接入0.1 mL稀釋菌液,該接種方法是 法.培養(yǎng)時,需將培養(yǎng)皿培養(yǎng),以防冷凝水造成污染.經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，平板上的菌落數(shù)如上表所示.據(jù)此可得出,每升菌液中酵母菌活菌數(shù)為 個.解析（1）篩選分解多氯聯(lián)苯的菌株時，應(yīng)將土壤樣品稀釋，接種到以多氯聯(lián)苯為 唯一碳源的培養(yǎng)基上.這樣的培養(yǎng)基只有能分解多氯聯(lián)苯的菌株才能生存，因此從 功能上講,該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基.（2）對初步提取到的菌株要進(jìn)行純化，純化 方法有兩種，即平板劃線法和稀釋涂布平板法.圖示是利用平

18、板劃線法進(jìn)行微生物 接種,把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面（ 3）將酵母菌溶液進(jìn)行稀釋后接種到平板上的方法是稀釋涂布平板法微生物培養(yǎng)時，為了防止皿蓋上的冷凝水 滴入培養(yǎng)基造成污染，需將培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)計數(shù)時,應(yīng)該選擇菌落數(shù)為30300之 間的平板進(jìn)行統(tǒng)計，據(jù)表中數(shù)據(jù)可以判斷稀釋100倍的符合要求由表中數(shù)據(jù)可以 計算出三個平板的平均菌落數(shù)為（45+ 57+ 51） £= 51,每個平板均接入0.1 mL 稀釋菌液,故每升菌液中酵母菌活菌數(shù)為 51 ÷.1× 1 000× 100= 5.1× 107個.答案 （1）稀釋（溶解）多氯聯(lián)苯 選擇（2

19、）純化 平板劃線（3）稀釋涂布平板倒置 5.1×107澄清易錯易混強(qiáng)化科學(xué)思維易錯易混易錯點(diǎn)1混淆兩種“對照組”與“重復(fù)組”點(diǎn)撥 （1）兩種對照組作用比較 判斷培養(yǎng)基中“是否有雜菌污染”，需將未接種的培養(yǎng)基同時進(jìn)行培養(yǎng) 判斷選擇培養(yǎng)基“是否具有篩選作用”，需設(shè)置牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行接種 后培養(yǎng),觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目，進(jìn)行對比得出結(jié)論（2）重復(fù)組的設(shè)置及作用為排除偶然因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾，在每一稀釋度下宜設(shè)置3個平板作重復(fù)組，選 擇菌落數(shù)均在30300且數(shù)目相差不大的三個平板，用“平均值”代入計數(shù)公式 予以計算菌落數(shù)易錯點(diǎn)2不清楚為什么測定活菌的數(shù)量不能用平板劃線法 ？點(diǎn)撥由于在

20、所劃的線中，一般只有最后一次劃線的末端才會形成只由一個細(xì)菌 形成的菌落,而其他一些菌落往往由兩個細(xì)菌或多個細(xì)菌繁殖而成，而在計數(shù)時一 個菌落對應(yīng)著一個細(xì)菌，這樣在劃線所得的平板中，菌落數(shù)目遠(yuǎn)低于活菌的實(shí)際數(shù) 值,所以不能用平板劃線法測定活菌數(shù)量 易錯點(diǎn)3易混淆選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基點(diǎn)撥 （1）選擇培養(yǎng)基允許特定的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物 生長土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離利用的是選擇培養(yǎng)基 （2）鑒別培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入某種特殊的化學(xué)物質(zhì)，某種微生物在培養(yǎng)基中 生長后能產(chǎn)生某種代謝產(chǎn)物，而這種代謝產(chǎn)物可以與培養(yǎng)基中的特殊化學(xué)物質(zhì)發(fā) 生特定的化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征性變化，根據(jù)這種

21、特征性變化，可將該種微生 物與其他微生物區(qū)分開來的培養(yǎng)基用于篩選纖維素分解菌的培養(yǎng)基就是鑒別培 養(yǎng)基深度糾錯（2018湖北長望瀏寧四縣一模） 農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上有一種廣泛使用的除草劑在土壤中 不易被降解，長期使用會污染土壤為修復(fù)被污染的土壤，可按圖示程序選育出能 降解該除草劑的細(xì)菌已知該除草劑（含氮有機(jī)物）在水中溶解度低，含一定量該 除草劑的培養(yǎng)基不透明請分析回答：（1） 微生物接種是微生物學(xué)研究中最常用的基本操作技術(shù)，該技術(shù)的核心是.（2） 在選育過程中,應(yīng)將土壤浸出液接種于以該除草劑為唯一 的培養(yǎng)基上.通過比較單菌落周圍 的大小,可篩選出高效的目的菌.實(shí)驗(yàn)結(jié)果如上圖顯示的AE五種菌株中,是最理想菌

22、株.（3）若想對初步篩選得到的目的菌進(jìn)行純化并計數(shù)，可采用的接種方法是.將1 mL 土壤溶液分別稀釋10倍和100倍,每種稀釋度各在3個平板上分別接入0.1 mL稀釋液,經(jīng)過適當(dāng)培養(yǎng)后,6個平板上的菌落數(shù)分別為 59、57、58和2、7、5,空白對照組的平板上沒有菌落，則每升土壤溶液中活菌數(shù) 的理論值為 個.實(shí)際上每升土壤溶液中的活菌數(shù)比通過統(tǒng)計所得的這一（4）科研人員用放射線處理該細(xì)菌，獲得突變株A和B,然后對突變株A和B進(jìn) 行實(shí)驗(yàn),結(jié)果如下表所示：接種的菌種、 幾他半:甘 般培 口養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)處理及結(jié)果A不生長添加營養(yǎng)物質(zhì)甲，能生長B不生長添加營養(yǎng)物質(zhì)乙，能生長A + B能生長不添加營養(yǎng)物質(zhì)甲

23、、乙，能生長請分析突變株 A和B混合在一起接種于一般營養(yǎng)基中能生長的最可能原因.解析 （1微生物接種技術(shù)的核心是防止雜菌污染.（2）已知該除草劑為含氮有機(jī)物,在水中溶解度低，含一定量該除草劑的培養(yǎng)基不透明；降解該除草劑的細(xì) 菌能分解培養(yǎng)基中的該除草劑，使培養(yǎng)基中出現(xiàn)透明圈.可見,在選育能降解該除 草劑的細(xì)菌的過程中，應(yīng)將土壤浸出液接種于以該除草劑為唯一氮源的培養(yǎng)基上 . 通過比較單菌落周圍透明圈的大小，可篩選出高效的目的菌.實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖顯示的AE五種菌株中,E菌落周圍的透明圈最大，因此E是最理想菌株.（3）對初步篩 選得到的目的菌進(jìn)行純化并計數(shù)，可采用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種.統(tǒng)計菌落數(shù)目 時,一

24、般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計數(shù)，因此應(yīng)選擇稀釋度為10倍的、分 別接入0.1 mL稀釋液的3個平板上的菌落數(shù)（分別為 59、57、58）進(jìn)行統(tǒng)計, 則每升土壤溶液中活菌數(shù)的理論值為（59+ 57+ 58） ÷3 × 10 ÷（0.1 × 10-3）= 5.8×106（個）.由于統(tǒng)計結(jié)果是用菌落數(shù)來表示的，當(dāng)兩個或多個細(xì)菌連在一起時, 平板上觀察到的只是一個菌落，所以實(shí)際上每升土壤溶液中的活菌數(shù)比通過統(tǒng)計 所得的這一數(shù)值要大.（4）分析表中信息可知：突變株A生長需要營養(yǎng)物質(zhì)甲，突 變株B生長需要營養(yǎng)物質(zhì)乙，據(jù)此可推知，突變株A和B混合在一

25、起接種于一般培養(yǎng)基中能生長的最可能原因是：突變株A生長需要營養(yǎng)物質(zhì)甲，突變株B可以提 供；突變株B生長需要營養(yǎng)物質(zhì)乙，突變株A可以提供.答案 （1）防止雜菌污染（無菌操作）（2）氮源 透明圈 E （ 3）稀釋涂布平板法5.8×106統(tǒng)計結(jié)果是用菌落數(shù)來表示的，當(dāng)兩個或多個細(xì)菌連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落（4）突變株A生長需要營養(yǎng)物質(zhì)甲，突變株B可以提供；突變株B生長需要營養(yǎng)物質(zhì)乙，突變株A可以提供探索高考命題的奧秘（九）教材原型1. （人教版選修一 P21 “內(nèi)文第三自然段”）實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選，人為提供有 利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度、 PH等），同時抑制或阻

26、止其他微生 物生長在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生 長的培 養(yǎng)基 ,稱做選擇培 養(yǎng)基_（ SeIeCtiVe media）.轉(zhuǎn)換視角11. 2018全國卷I ,37（ 1）將馬鈴薯去皮切塊，加水煮沸一定時間,過濾得到馬鈴薯 浸出液在馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖和瓊脂，用水定容后滅菌，得到M培養(yǎng) 基.回答下列問題：M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選，則培養(yǎng)基中應(yīng)加入鏈霉素以抑制的生長,加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于 培 養(yǎng)基.答案細(xì)菌選擇2. （人教版選修一 P28 “內(nèi)文第二自然段”）剛果紅（Congo Red簡稱CR）是一種染料,它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色

27、復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)當(dāng)我們在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時，剛 果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅 纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈 這樣,我們就可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌轉(zhuǎn)換視角22. 2018全國卷I ,37 （3）若在M培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖，接種土壤濾液并培養(yǎng),平板上長出菌落后可通過加入顯色劑篩選出能產(chǎn)淀粉酶的微生物 加入的顯色 劑是,該方法能篩選出產(chǎn)淀粉酶微生物的原理是答案碘液淀粉遇碘液顯藍(lán)色，產(chǎn)淀粉酶的菌落周圍淀粉被水解，形成透明圈 轉(zhuǎn)換視角33. 2014全國卷

28、I ,39 （2） （3） （1）在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅（CR）時,CR可與纖維素形成 色復(fù)合物.用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時,培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的 .（2）為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計了甲、乙兩種培養(yǎng)基（成分見下表）：酵母膏無機(jī)鹽淀粉纖維素粉瓊脂CR溶液水培養(yǎng)基甲 培養(yǎng)基甲+一+x 甘 7 培養(yǎng)基乙+一+注:“+ ”表示有,“一 ”表示無.據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲 （填“能”或“不能”）用于分離和鑒別纖維素分解菌,原因是;培養(yǎng)基乙 （填“能”或“不能”）用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是.答案 （1）紅透明圈（2）不能液體培養(yǎng)基不

29、能用于分離單菌落不能培養(yǎng)基中沒有纖維素，不會形成CR纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌課后分層訓(xùn)練（時間:35分鐘）j> ¾ 1. （2018南通、泰州一模）下列檢測某熟制食品中大腸桿菌是否超標(biāo)的實(shí)驗(yàn)操作 ,不合理的是（）A. 待檢測食品需要經(jīng)過滅菌操作后取樣檢測B. 應(yīng)設(shè)置未接種的培養(yǎng)基，作為實(shí)驗(yàn)的對照C. 用稀釋涂布平板法接種計數(shù)大腸桿菌的活菌數(shù)D. 接種后將培養(yǎng)皿倒置并在適宜溫度下培養(yǎng)解析待檢測食品不能經(jīng)過滅菌操作后取樣檢測，否則檢測不到大腸桿菌，或者統(tǒng) 計值偏小.答案 A2. （2018通、泰、淮、連、揚(yáng)、徐、宿三模）下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述，正

30、確的是（）A. 溶化牛肉膏時，稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯B. 涂布接種時，涂布器應(yīng)在干熱滅菌箱中滅菌冷卻后再使用C. 純化培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿應(yīng)倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)的搖床上培養(yǎng)D. 觀察菌落時,應(yīng)將培養(yǎng)皿蓋拿掉后在顯微鏡下進(jìn)行觀察計數(shù)解析涂布器使用前常浸在酒精中，然后再灼燒冷卻后使用；純化培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿 倒置在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，但是不需要搖床處理；觀察菌落時不能打開培養(yǎng)皿蓋 且無需在顯微鏡下觀察.答案 A3. 在分離、純化大腸桿菌實(shí)驗(yàn)中，劃線接種（圖1）、培養(yǎng)結(jié)果（圖2）如下圖.有關(guān)敘述錯誤的是（）A. 接種前應(yīng)對培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B. 連續(xù)劃線的目的是獲得單個細(xì)菌形成的菌落C. 接種過

31、程中至少需要對接種環(huán)灼燒5次D. 圖1中a區(qū)域?yàn)閯澗€的起始位置 解析 一般采用高壓蒸汽滅菌法對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌,A正確；菌液經(jīng)過連續(xù)劃線 菌液中的菌體會越來越少，最終會獲得單個細(xì)菌形成的菌落,B正確；每次劃線前后都需要將接種環(huán)灼燒滅菌，因此按照圖中劃線順序（dcba）,整個劃線過 程需要對接種環(huán)灼澆5次,C正確；每次劃線的菌種來自上一區(qū)域的末端，因此劃 線的起始區(qū)域菌落最多，由圖乙可推知，圖甲中的d區(qū)域菌落多，為劃線的起始位 置Q錯誤.答案 D4. （2018蘇錫常鎮(zhèn)三模）下列有關(guān)微生物分離、純化及計數(shù)的敘述，錯誤的是（ ）A. 常用富含纖維素的培養(yǎng)基富集培養(yǎng)纖維素分解菌B. 平板劃線法通過連續(xù)

32、劃線將聚集的菌種分散并計數(shù)C. 稀釋涂布平板法通過系列梯度稀釋可將微生物分散D. 用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)微生物時，實(shí)驗(yàn)結(jié)果往往偏大解析平板劃線法可以用于分離微生物，但不能用于計數(shù),稀釋涂布平板法可以計 數(shù).用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)微生物時，死菌、活菌都統(tǒng)計在內(nèi)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果往往偏大.答案 B5. 某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機(jī)化合物A,研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素等配制的培養(yǎng)基，成功篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌（目的菌）.實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所示.下列有關(guān)敘述錯誤的是（IAIfS甌復(fù)多次的藺A. 培養(yǎng)基中加入化合物A作為唯一碳源，目的是為了篩選目的菌B. 實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)過程中進(jìn)行振

33、蕩培養(yǎng)，可使目的菌和培養(yǎng)液充分接觸C. 實(shí)驗(yàn)操作過程中，獲得純凈“目的菌”的關(guān)鍵是防止外來雜菌污染D. 將固體培養(yǎng)基得到的目的菌重復(fù)多次上述實(shí)驗(yàn)的目的是獲得大量菌種 解析 本實(shí)驗(yàn)的目的是“篩選到能高效降解化合物 A的細(xì)菌”，因此培養(yǎng)基中加入化合物A作為唯一碳源，目的是為了篩選目的菌,A正確；實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)過程中進(jìn)行振蕩培養(yǎng),可使目的菌和培養(yǎng)液充分接觸,B正確；實(shí)驗(yàn)操作過程中，獲得純凈“目 的菌”的關(guān)鍵是防止外來雜菌污染,C正確；本實(shí)驗(yàn)中需要振蕩培養(yǎng)，因此所用培 養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基，D錯誤.答案 D6. （2018南京三模）（多選）日前微信傳言手機(jī)屏幕細(xì)菌比馬桶按鈕上的多.兩個A. 通過觀察菌落的形態(tài)、

34、大小，可知手機(jī)屏幕和馬桶按鈕上都存在多種微生物B. 以上兩組實(shí)驗(yàn)在接種過程中均需要用到酒精燈、接種環(huán)等C. 兩組實(shí)驗(yàn)操作均正確且完全一致，但結(jié)果截然不同，原因可能是取樣部位不同D. 該實(shí)驗(yàn)對照組可以設(shè)置為取相同培養(yǎng)基接種等量無菌水進(jìn)行培養(yǎng)解析 由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，兩組實(shí)驗(yàn)均采用稀釋涂布平板法，在接種過程中均需要用 到酒精燈、涂布器等.答案 ACD7. （2018常州一模）（多選）在三個培養(yǎng)皿中各加入等量但不同種的大腸桿菌培養(yǎng)基,在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)36 h后統(tǒng)計細(xì)菌菌落數(shù)（見下表）.下列敘述正確的是（）培養(yǎng)皿培養(yǎng)基成分培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)I瓊脂、糖類35U瓊脂、糖類和維生素250In瓊脂和維生素0A. 培養(yǎng)

35、皿I、U和川表明瓊脂是培養(yǎng)基中必需的營養(yǎng)成分B. 培養(yǎng)皿I和U說明維生素是大腸桿菌需要的生長因子C. 培養(yǎng)皿U和川說明糖類是大腸桿菌需要的碳源D. 本實(shí)驗(yàn)使用的是固體、不完全培養(yǎng)基解析 瓊脂是凝固劑，不是營養(yǎng)成分；培養(yǎng)皿I和U的區(qū)別在于是否添加維生素， 結(jié)果說明維生素是大腸桿菌需要的生長因子； 培養(yǎng)皿U和川的區(qū)別在于是否添加 糖類,結(jié)果說明糖類是大腸桿菌需要的碳源；本實(shí)驗(yàn)添加了瓊脂，使用的是固體培 養(yǎng)基,營養(yǎng)成分不完全,缺少無機(jī)鹽、氮源等，說明使用的是不完全培養(yǎng)基答案 BCD je 提施力8. （多選）下列有關(guān)微生物培養(yǎng)、純化及篩選的敘述，正確的是（）A. 為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)立

36、即快速挑取菌落B. 平板劃線操作中第二次及其后的劃線應(yīng)從上一次劃線的末端開始C. 篩選分解尿素的細(xì)菌應(yīng)以尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源D. 在纖維素-剛果紅培養(yǎng)基上，能產(chǎn)生透明圈的為纖維素分解菌解析為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后需要冷卻后再挑取菌落，否則會導(dǎo)致高 溫使菌種死亡,A錯誤；平板劃線操作中第二次及其后的劃線應(yīng)從上一次劃線的 末端開始,B正確；篩選分解尿素的細(xì)菌應(yīng)以尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源,C正確；在纖維素-剛果紅培養(yǎng)基上，能產(chǎn)生透明圈的為纖維素分解菌 Q正確.答案 BCD9. （2018全國卷川,37）生物一一選修1:生物技術(shù)實(shí)踐回答下列與酵母菌有關(guān)的問題：（1）分離培養(yǎng)酵母菌通常使

37、用 （填“牛肉膏蛋白胨”“MS或“麥芽汁瓊脂”）培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基應(yīng)采用滅菌法滅菌.若將酵母菌劃線接種在平板上,培養(yǎng)一段時間后可觀察到菌落，菌落的含義是（2）酵母菌液體培養(yǎng)時，若通入氧氣，可促進(jìn)（填“菌體快速增殖”“乙醇產(chǎn)生”或“乳酸產(chǎn)生”）；若進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，可促進(jìn) （填“菌體快速增 殖”“乙醇產(chǎn)生”或“乳酸產(chǎn)生”）Ij扎O(3)制作面包時，為使面包松軟通常要在面粉中添加一定量的酵母菌，酵母菌引起面包松軟的原因是解析 (1)酵母菌為異養(yǎng)型生物，通常使用麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)；培養(yǎng)基常用(2)酵母菌為兼性厭氧型生物，有氧條件利于其繁殖，無氧條件下其進(jìn)行酒精發(fā)酵高壓蒸汽滅菌法滅菌；由一個細(xì)胞繁殖而來的

38、肉眼可見的子細(xì)胞群體稱為菌落(3)酵母菌分解葡萄糖可產(chǎn)生二氧化碳，使面包松軟多孔.答案 (1)麥芽汁瓊脂 高壓蒸汽 由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體 (2)菌體快速增殖 乙醇產(chǎn)生 (3)酵母菌分解葡萄糖會產(chǎn)生CO2,CO2使面包松軟10. (2018淮中、南師附中、海門、天一四校聯(lián)考)下圖表示微生物的接種實(shí)驗(yàn)中的一些步驟.請回答下列有關(guān)問題(4)分別用三個平板培養(yǎng)三種細(xì)菌(E.coli、Salbus、B.subtilis),然后在培養(yǎng)基上打出直徑為3 mm的孔,并在孔中加入一定濃度的甲抗生素，經(jīng)過一定時間培養(yǎng)后,可以在孔的周圍觀察到一圈清晰區(qū)，此乃抑制細(xì)菌生長所致.測量清晰區(qū)的直徑(如

39、圖所示)，數(shù)據(jù)如下表.(1)步驟前的一步操作是(2)實(shí)驗(yàn)步驟的目的是,步驟之間還需要將接種環(huán)(3)指出步驟操作不當(dāng)?shù)牡胤?該操作用到的主要儀器是細(xì)菌不同濃度甲抗生素條件下清晰區(qū)直徑mm5 g m1L甲7.5 g mL甲10 g mL甲15 g rL甲20 g Vf1甲E.coli710141616S.albus581317B.subtilis5791419SaIbuS和 B.subtilis對甲抗生素敏感的區(qū)別是 有人感染E.coli而患病,醫(yī)生使用20 g mL甲抗生素給予治療，試用生物進(jìn)化理論解釋這種不明智的做法：. 采養(yǎng)殖池中的水樣1 mL稀釋100倍,吸取稀釋后的水樣1 mL,接種于E

40、.coli選 擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)，一段時間后觀察菌落并計數(shù)，重復(fù)三次實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下圖.該養(yǎng)殖池每毫升水樣含有解析 （1）據(jù)圖分析，步驟是倒平板,前面一個步驟是滅菌，一般用高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌.（2）實(shí)驗(yàn)步驟表示接種前灼燒接種環(huán)，目的是殺滅接種環(huán)上可能 引起污染的微生物；步驟 之間還需要將接種環(huán)冷卻，避免高溫殺死要接種的 菌種.（3）步驟操作中，接種環(huán)劃線的首尾區(qū)域不應(yīng)相連.（4）根據(jù)表格分 析SaIbUS與B.subtilis相比,B.subtilis對于低濃度的甲抗生素較敏感.根據(jù)表格 分析,相比15 g m,20 g mL的甲抗生素不能起到更好地抑制E.coli效果,但會較快提高抗生素抗性基因的頻率. 根據(jù)觀察到的菌落數(shù)，取其平均值9,又 因?yàn)樵摼鋽?shù)是1 mL水樣稀釋了 100倍所觀察的數(shù)據(jù)，所以該養(yǎng)殖池每毫升水含 有 9× 100= 900 個 E.coli.答案 （1）滅菌高壓蒸汽滅菌鍋（2）殺滅接種環(huán)上可能引起污染的微生物冷卻 （3）劃線的首尾區(qū)域不應(yīng)相連（4）B.subtili