保健食品中紅景天甙的測(cè)定

1、保健食品中紅景天甙的測(cè)定Determination of salidroside in health food第一法高效液相色譜法1范圍本方法規(guī)定了保健食品中紅景天甙的測(cè)定方法。本方法適用于以紅景天為主要原料的保健食品中紅景天 甙的測(cè)定。本方法的檢出限：0.02卩go本方法的線性范圍：0.010.50卩g/mLo2 原理將混勻的試樣使用甲醇進(jìn)行提取，根據(jù)高效液相色譜紫 外檢測(cè)器定性定量檢測(cè)。3試劑除非另有說明，在分析中僅使用雙蒸水3.1乙酸鈉分析純。3.2甲醇優(yōu)級(jí)純。3.3石油醚分析純。3.4 紅景天甙標(biāo)準(zhǔn)溶液 準(zhǔn)確稱量紅景天甙標(biāo)準(zhǔn)品0.0200g，加入甲醇溶解并定容至10mb此溶液每 mL含

2、2.0mg紅景天甙4儀器4.1 高效液相色譜儀：附紫外檢測(cè)器（UV）4.2 超聲波清洗器。4.3 離心機(jī)。5分析步驟5.1 試樣處理5.1.1 液體試樣：準(zhǔn)確量取搖勻后的液體試樣20mL于50mL容量瓶中，先加入 25mL甲醇，超聲10min后用甲醇定容至 刻度，混勻，經(jīng)0.45，m濾膜過濾后供液相色譜分析用。5.1.2 固體試樣：取20粒以上片劑或膠囊試樣進(jìn)行粉碎混勻，準(zhǔn)確稱取適量試樣（精確至0.001g ）于50mL容量瓶中，加入甲醇，超聲提取10min。取出后加入甲醇定容至刻度，混勻后以3000rpm/min離心3min。經(jīng)0.45m濾膜過濾后供 液相色譜分析用。5.2 液相色譜參考條件

3、5.2.1 色譜柱：C18 柱 4.6 X 250mm,5y m。5.2.2 柱溫：室溫 523紫外檢測(cè)器：檢測(cè)波長(zhǎng) 215nm。524 流動(dòng)相：甲醇：0.02mol/L 乙酸鈉溶液=9:91。5.2.5 流速：1.0mL/min。5.2.6 進(jìn)樣量：104。色譜分析：取10卩L標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液注入色譜儀 中，以保留時(shí)間定性，以試樣峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。5.3標(biāo)準(zhǔn)曲線制備分別配制濃度為 0.0、0.01、0.02 0.05、0.20、0.50卩g/mL紅景天甙標(biāo)準(zhǔn)溶液，在給定的儀器條件下 進(jìn)行液相色譜分析，以峰高或峰面積對(duì)濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。5.4 分析結(jié)果的表示5.4.1 計(jì)算h1X C

4、 X VX =h2X mX 1000式中：X -試樣中紅景天甙的含量，mg/g ;h 1 -試樣峰高或峰面積；C-標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，卩g/mL;V試樣定容體積，mL;h 2 標(biāo)準(zhǔn)溶液峰高或峰面積；m 試樣質(zhì)量，go計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。6技術(shù)參數(shù)準(zhǔn)確度方法的回收率在 91.7 %98.6 %之間。允許差在重復(fù)性條件下獲得的 2次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的土 10%第二法極譜法1范圍本方法規(guī)定了保健食品中紅景天甙的測(cè)定方法。本方法適用于以紅景天甙為主要功效成分的保健食品中 紅景天甙的含量測(cè)定。本方法的最低檢出量為0.05卩g。若取1.00mL液體類試樣，其最低檢出濃度為 0.05

5、mg/L ;若取0.25g固體類試樣、 則最低檢出濃度為 0.2mg/kg。本方法的最佳線性范圍為0.1卩g/mL1.0卩g/mL。2原理保健食品中紅景天甙用甲醇提取，D 101型大孔吸附樹脂凈化處理，經(jīng)亞硝基化后，其衍生物在硼砂溶液中具有電 活性，在滴汞電極上還原產(chǎn)生極譜波。用峰電位定性，以試 樣與標(biāo)準(zhǔn)的峰電流（lp ）比較定量。3試劑除注明外，試劑為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為重蒸餾水。3.1甲醇。3.2 D 101型大孔吸附樹脂。3.3飽和硼砂溶液。3.4 0.2%鹽酸溶液。3.5 2mol/L亞硝酸鈉溶液。3.6 1.0mg/mL紅景天甙標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：準(zhǔn)確稱取0.1000g紅景天甙對(duì)照品（中國(guó)藥

6、品生物制品檢定所）于燒杯中，力口水溶解并定容至 100mL容量瓶。此溶液每毫升含紅景天甙 1.0mg，冰箱保存。3.7 10.0卩g/mL紅景天甙標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：準(zhǔn)確吸取紅景天標(biāo) 準(zhǔn)貯備溶液1.00mL于100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。此溶液每毫升含紅景天甙 10.0卩g。4儀器與設(shè)備4.1極譜分析儀。4.2超聲波清洗機(jī)。4.3 10mm x 150mm玻璃層析柱。5分析步驟5.1試樣的制備及予處理液體類試樣（如保健酒、口服液、飲料等）準(zhǔn)確吸取搖勻的試樣液 1.00mL于50mL容量瓶中，加水 稀釋至刻度、搖勻，供測(cè)定用。5.1.2 一般固體類試樣（如保健茶、蜜片、膠囊等）準(zhǔn)確稱取經(jīng)粉碎并過

7、 20目篩的試樣0.25g,置50mL三角 瓶中，加入10mL甲醇，于超聲波清洗機(jī)超聲提取10min、過濾，濾液收集于 50mL容量瓶中。再加入 10mL甲醇于三 角瓶中，重復(fù)超聲提取一次，合并濾液于上述容量瓶中，用 水稀釋至刻度，供測(cè)定用。個(gè)別組分復(fù)雜的固體類試樣個(gè)別組分復(fù)雜的固體類試樣需經(jīng)柱層析凈化處理。層析柱制備。取適量 D 101型非極性大孔吸附樹脂于燒 杯中，加水洗滌數(shù)次，緩緩傾入10mm x 150mm玻璃層析 柱內(nèi)，濕法裝柱、樹脂約高50mm , 10mL甲醇注入層析柱上 端進(jìn)行淋洗，棄淋洗液。凈化。按節(jié)處理、提取試樣，準(zhǔn)確吸取10.0mL提取 試液，緩緩注入層析柱上端，用玻璃蒸

8、發(fā)皿收集流出液。再 吸取10mL甲醇分兩次注入層析柱進(jìn)行淋洗、合并流出液于 蒸發(fā)皿中，置70C恒溫水浴揮干，用水溶解移入10mL容量瓶中，水稀釋至刻度，供測(cè)定用。5.2極譜分析參考條件單掃描極譜法（SSP法）。選擇起始電位為一 400mV，終 止電位一 900mV，掃描速度250mV/S，三電極，二次導(dǎo)數(shù)， 靜置時(shí)間5s及適當(dāng)量程。于峰電位（Ep） 600mV （vs.SCE） 處，記錄紅景天甙的峰電流（lp）nA。5.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確吸取10.0卩g/mL紅景天甙標(biāo)準(zhǔn)使用溶液 0, 0.10, 0.20, 0.40, 0.60, 0.80, 1.00mL 于 7 支 10mL 比色管中（

9、相 當(dāng)于含 0, 1.0, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 10.0 卩 g 紅景天甙）。各 管加入2.0mL 2mol/L亞硝酸鈉溶液及 1.0mL 0.2%鹽酸溶液 置沸水浴10min，取出冷卻至室溫后各管再加入 1.0mL飽和 硼砂溶液，加水稀釋至刻度，搖勻。將各管溶液依次移入電解池，置三電極系統(tǒng)。按上述極譜分析參考條件（5.2）下測(cè)定，記錄各管紅景天甙的峰電流（Ip ）。以紅景天甙含量為橫座標(biāo)，其對(duì)應(yīng)的峰電流為縱座 標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5.4試樣測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線法準(zhǔn)確吸取上述待測(cè)液 0.1mL0.5mL于10mL比色管中， （視其含量高、低而定）加入2mL 2.0mol/L亞硝酸鈉溶液，以下操作同5.3節(jié)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下測(cè)定試液中紅景天甙的 峰電流（Ip ）。標(biāo)準(zhǔn)加入法分別吸取上述待測(cè)液 0.