甲胎蛋白(AFP)測(cè)定(化學(xué)發(fā)光法)

1、西安長(zhǎng)安醫(yī)院 檢 驗(yàn) 科甲胎蛋白(AFP )測(cè)定(化學(xué)發(fā)光法)文件編號(hào)：CA-JY-CZ-MY第 二 版 執(zhí)行日期：2010-1-4共5頁(yè) 第1頁(yè) 原理 AFP是胚胎時(shí)期的重要血清成分，由內(nèi)黃囊和肝細(xì)胞合成，胎兒出生后其濃度急劇下降，幾個(gè)月至一年可降至正常水平，正常值小于20ng/ml。本檢驗(yàn)科使用日本東曹AIA-1800型全自動(dòng)免疫發(fā)光分析儀進(jìn)行 測(cè)定，采用微粒子捕捉酶免疫分析技術(shù)(MEIA)。AFP測(cè)定利用雙抗體夾心法原理：已包被了抗體的塑料微珠試劑中，加入待測(cè)標(biāo)本后，經(jīng)溫育，再加入堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體、形成“抗體抗原酶標(biāo)記抗體復(fù)合物”。然后將其轉(zhuǎn)移到玻璃纖維柱上，用緩沖液洗滌，

2、沒(méi)有結(jié)合的抗原、酶標(biāo)抗體被洗掉，結(jié)合抗原抗體的塑料微珠則被保留在纖維柱濾膜的上方。這時(shí)再加入底物：4-甲基傘型酣磷酸鹽(4-Mup)。酶標(biāo)抗體上的堿性磷酸酶將4-Mup分解,脫磷酸后形成甲基傘型酣(4-Mu)，它在365nm激發(fā)光的照射下，發(fā)出448nm的熒光，經(jīng)過(guò)熒光讀數(shù)儀的記錄、放大，計(jì)算出所測(cè)物質(zhì)的含量。2 標(biāo)本采集與處理2.1 原始樣本類(lèi)型：血清、血漿或全血（應(yīng)用抗凝劑為肝素鈉、枸櫞酸鈉、ACD、CPDA-1或EDTA）、尿液(晨尿、隨即尿、24小時(shí)尿等)或其他體液(羊水等)。2.2 樣本量：根據(jù)不同項(xiàng)目樣本量不等（83l-238l）。2.3患者準(zhǔn)備：嚴(yán)禁使用接受過(guò)鼠單克隆抗體診斷或治

3、療的病人樣本，引起體內(nèi)含有人抗鼠抗體（HAMA），當(dāng)這些樣品在使用含鼠單克隆抗體分析試劑進(jìn)行測(cè)試時(shí)，引起結(jié)果升高或降低。2.4 樣本采集方法：一般采用靜脈采血。樣本采集要求： 避免過(guò)度溶血，必須在無(wú)菌體條件下采集； 確保離心速度（10000轉(zhuǎn)/分鐘）和時(shí)間（10分鐘），避免顆粒物質(zhì)的干擾。避免樣品的反復(fù)凍融，溶解后的樣品需低速震蕩或輕輕顛倒混勻已獲得穩(wěn)定的結(jié)果。若樣品中有顆粒物質(zhì)，紅血球或渾濁物質(zhì)必須離心使其澄清后再進(jìn)行測(cè)試。2.5樣品的穩(wěn)定期和保存：上機(jī)3小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)；2-8標(biāo)本可保存1-14天；若需長(zhǎng)期保存（1年內(nèi)），必須將血清分離出來(lái)，冷凍保存（-10或更冷）。3  

4、0;試劑3.1 所有試劑均購(gòu)自日本東曹公司 TOSOH相關(guān)校準(zhǔn)品TOSOH相關(guān)校準(zhǔn)品1TOSOH相關(guān)校準(zhǔn)品2 TOSOH樣本稀釋液 TOSOH基質(zhì)：4-甲基傘形酮酰磷酸TOSOH基質(zhì)溶解液 TOSOH清洗液TOSOH緩沖液3.2 試劑準(zhǔn)備與檢查： 從冰箱中取出1號(hào)液（底物液）放入儀器 從冰箱中取出相關(guān)測(cè)試試劑放入儀器 檢查所有試劑和緩沖液是否在有效期內(nèi)，超過(guò)有效期的試劑不可使用 檢查所有試劑和緩沖液是否足夠檢查所有消耗品（纖維杯或反應(yīng)杯）是否足夠，廢液或廢物是否清空3.3 試劑保存條件： 試劑盒、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品在2-8保存。3.4 試劑性能可接受性： 按測(cè)定項(xiàng)目資料手冊(cè)中質(zhì)量控制章節(jié)所規(guī)定內(nèi)容

5、進(jìn)行質(zhì)量控制，結(jié)果必須在實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的可接受范圍內(nèi)。4   操作步驟   1 開(kāi)機(jī)前檢查 a 察看電源是否正常安全通電 b 推主機(jī)下部的前門(mén)，打開(kāi)后檢查洗凈水與分注液的用量是否滿(mǎn)足當(dāng)日用量廢試樣杯與廢吸嘴是否丟棄2 開(kāi)機(jī)a更換75%酒精，放置基質(zhì)液b 打開(kāi)電腦主機(jī)及AIA-1800電源, 點(diǎn)擊主業(yè)面進(jìn)入rootc 試樣吸嘴的設(shè)置及酶標(biāo)識(shí)試劑，檢體稀釋液的設(shè)置，按主機(jī)操作版面Reagent/Tip鍵，LED指示燈變?yōu)榫G色，打開(kāi)試劑吸嘴護(hù)罩，將酶標(biāo)識(shí)試劑，檢體稀釋液設(shè)置在試劑托架上，將條形碼標(biāo)識(shí)面朝前d 試劑杯的設(shè)置，按主機(jī)操作版面的Cup Sort

6、er鍵，LED指示燈變?yōu)榫G色，拉開(kāi)分類(lèi)器抽屜將試劑托盤(pán)設(shè)置在分類(lèi)器托盤(pán)上，將分類(lèi)器抽屜推到底3 開(kāi)機(jī)日檢4 日檢通過(guò)后，進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)，在樹(shù)形菜單上進(jìn)入界面設(shè)置標(biāo)本檢測(cè)項(xiàng)目，Assay鍵點(diǎn)擊開(kāi)始測(cè)定5 測(cè)定完畢后，按主機(jī)操作版面的Cup Sorter及Reagent/Tip鍵，LED指示燈變?yōu)榫G色，打開(kāi)試劑吸嘴護(hù)罩及分類(lèi)器抽屜，收集試劑放入冰箱，更換基質(zhì)液，放置75%酒精6 點(diǎn)擊關(guān)機(jī)，待窗口消失，關(guān)閉AIA-1800電源，在關(guān)閉電腦及主電源5 質(zhì)量控制：每批試劑都要使用東曹公司標(biāo)準(zhǔn)品作質(zhì)量控制，請(qǐng)參見(jiàn)AIA-1800儀器操作手冊(cè)。 6  結(jié)果計(jì)算（定量分析）：利用點(diǎn)對(duì)點(diǎn)數(shù)據(jù)產(chǎn)

7、生方法來(lái)產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線機(jī)器會(huì)自動(dòng)計(jì)算最終樣品濃度；7 報(bào)告格式： 各種定量單位通常采用ug/L8 參考值： 0-10.9ug/L9   臨床意義：原發(fā)性肝癌患者血清AFP約有75%80%的陽(yáng)性率。一般認(rèn)為AFP>350時(shí)對(duì)原發(fā)性肝癌有較高的診斷價(jià)值。胃癌或胰腺癌時(shí)血中AFP含量也可升高。病毒性肝炎、肝硬變時(shí)AFP也有不同程度的升高，但其水平常在100ng/ml以下。妊娠婦女的不同時(shí)期血清中AFP亦有不同程度的上升。10 方法學(xué)性能: 精密度：采用NCCLS中的EPS-T2標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)WithinRun,BetweenRun,Re-tweenDay和Total四個(gè)方面進(jìn)行精密度的評(píng)價(jià)，檢測(cè)方案為：測(cè)6套以上的血清盤(pán)，（每套3個(gè)以上的樣品），在3-4個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)，每天分兩個(gè)時(shí)間段，每個(gè)樣品做復(fù)管（每個(gè)樣品累計(jì)測(cè)80次以上），連續(xù)測(cè)20天以上，使用一個(gè)以上批號(hào)試劑和標(biāo)準(zhǔn)曲線?？偟腃V%值控制在8%以?xún)?nèi)。正確度（準(zhǔn)確度）：采用與東曹原有的商品化試劑或市售的其他經(jīng)典的商品化試劑（如：HPLC或RIA）進(jìn)行相關(guān)性的比較，回歸方式一般采用Least Squares Linear Regression和/或Passing-Bablok Linear Regression方式，比較Int