苜?？傇碥仗崛∥飳?duì)大鼠長(zhǎng)期毒性的實(shí)驗(yàn)研究

1、苜?？傇碥仗崛∥飳?duì)大鼠長(zhǎng)期毒性的實(shí)驗(yàn)研究 作者：邴飛虹 程靜 萬(wàn)敏 韓俊 李婧 廖一帆【摘要】 目的研究苜蓿總皂苷提取物對(duì)大鼠的長(zhǎng)期毒性。方法苜?？傇碥仗崛∥?.2，5.0，2.8 gkg-1，相當(dāng)藥效學(xué)有效劑量(0.35 gkg-1為中劑量)的20，16，8倍，連續(xù)對(duì)大鼠灌胃給藥27周。給藥14，27周及停藥4周后，經(jīng)檢查動(dòng)物的一般狀態(tài)、血液學(xué)、血液生化學(xué)指標(biāo)及主要臟器組織。結(jié)果苜蓿總皂苷提取物對(duì)大鼠的一般狀況、血常規(guī)、血液生化指標(biāo)、主要臟器系數(shù)、重要臟器組織結(jié)構(gòu)等無(wú)明顯影響。停藥4周后檢測(cè)上述各指標(biāo)均未見(jiàn)明顯異常。與空白對(duì)照組比較各給藥組大鼠未見(jiàn)與藥物相關(guān)的明顯異常。結(jié)論大鼠長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)表

2、明，苜?？傇碥仗崛∥镌?.87.2gkg-1屬于安全劑量范圍。 【關(guān)鍵詞】 苜?？傇碥仗崛∥?； 大鼠； 長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn) 苜蓿為豆科植物紫苜蓿Medicago sativa L.或南苜蓿Medicago hispida Gaertn.的全草，是多年生草本植物。苜?？傇碥仗崛∥锊粌H對(duì)于高脂血癥有作用，且由于毒性低微，還可以作為中老年人長(zhǎng)期使用的保健品。苜蓿提取物在防治血脂代謝紊亂和抗動(dòng)脈粥樣硬化方面有其獨(dú)到之處。本實(shí)驗(yàn)主要進(jìn)行苜蓿總皂苷提取物的長(zhǎng)期毒性研究，為該新藥的臨床試驗(yàn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1 材料與儀器1.1 受試藥物苜?？傇碥仗崛∥铮?hào)060828，061010，由廣東省中山市中健藥物研究所有限

3、公司提供。用蒸餾水配制成36%，25%，14%的溶液，分別作為高、中、低劑量組，4 保存?zhèn)溆谩?.2 試劑血液學(xué)檢測(cè)試劑盒由濟(jì)南希森美康醫(yī)用有限公司提供，批號(hào)G7215；血液生化檢測(cè)試劑盒，K，Na，Cl試劑盒由湖北中醫(yī)學(xué)院藥劑科自制；TCHOL(批號(hào)：70314B011)、TG(批號(hào)：2008030079)、ALP(批號(hào)：70420C021)、AST(批號(hào)：70409C024)、ALT(批號(hào)：70409C011)、TP(批號(hào)：080531)、ALB(批號(hào)：080531)、TBIL(批號(hào)：70314B023)、GLU(批號(hào)：70123L021)、BUN(批號(hào)：7031913011)、Cr(批號(hào)

4、：2008010027)、Cr(批號(hào)：2008010027)、CK(批號(hào)：70424A211)均由北京利德曼生化技術(shù)有限公司提供。1.3 動(dòng)物Wistar大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量90110 g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供，合格證號(hào)：SCXK(鄂)2004-0007。各組動(dòng)物雌雄分籠飼養(yǎng)，每籠5只。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，觀察動(dòng)物健康正?？蛇M(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 動(dòng)物飼料：純系鼠料，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供，主要成分：水分9.7%，灰分8.5%，氨基酸14.1%，粗蛋白20.3%，粗脂肪4.1%，粗纖維4.7%，鈣1.2%。 動(dòng)物飼養(yǎng)條件：室溫2025，濕度40%60%，籠具及墊料定期清

5、洗更換。1.4 儀器BC-3000血液分析儀，日本產(chǎn)；TBA-120生化分析儀，日本東芝公司產(chǎn)品；SE20203A1型電子天平，美國(guó)產(chǎn)；TB-718E組織自動(dòng)包埋機(jī)，湖北泰維醫(yī)療科技有限公司提供；TC-120S組織自動(dòng)脫水機(jī)，湖北泰維醫(yī)療科技有限公司提供；RM2135石蠟切片機(jī)，德國(guó)Leica公司產(chǎn)品；HM525冰凍切片機(jī)，德國(guó)Microm公司產(chǎn)品；數(shù)碼顯微系統(tǒng)，寧波舜宇儀器公司產(chǎn)品。2 方法1,22.1 劑量設(shè)計(jì)本品大鼠灌胃最大耐受量為14.4 gkg-1，為藥效學(xué)有效量41倍以上，藥效學(xué)最小有效劑量為0.35 gkg-1；綜合藥效及急毒試驗(yàn)劑量，并經(jīng)預(yù)試驗(yàn)，確定大鼠長(zhǎng)期毒性高劑量組為7.2

6、 gkg-1，中劑量組為5.0 gkg-1，低劑量組為2.8 gkg-1。2.2 動(dòng)物分組及給藥方法取Wistar大鼠120只，按體質(zhì)量隨機(jī)分為4組，每組30只。苜?？傇碥仗崛∥锔摺⒅?、低劑量組，劑量分別為7.2，5.0，2.8 gkg-1，給藥體積均為10 mlkg-1；空白對(duì)照組，灌服等體積的蒸餾水。定時(shí)灌胃2次/d，給藥6 d/周。于第14周各組隨機(jī)處死6只動(dòng)物，第27周各組隨機(jī)處死14只動(dòng)物，余10只動(dòng)物停藥4周，觀察恢復(fù)期情況，并于停藥第4周末處死。2.3 檢測(cè)指標(biāo)檢測(cè)指標(biāo)及時(shí)間見(jiàn)表1。表1 檢測(cè)指標(biāo)及時(shí)間(略)1 3 結(jié)果3.1 對(duì)大鼠一般狀況及體質(zhì)量的影響各組動(dòng)物無(wú)一死亡，生長(zhǎng)發(fā)

7、育良好，外觀正常，皮毛潤(rùn)澤，行為活動(dòng)無(wú)異常，大小便正常，眼、鼻無(wú)異常分泌物，粘膜無(wú)充血，飲食正常。停藥4周后無(wú)異常表現(xiàn)。各組隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)，體質(zhì)量逐周增加，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析增長(zhǎng)過(guò)程，各組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；給藥14，27周及停藥4周，各給藥組大鼠的進(jìn)食量與空白對(duì)照組比較未見(jiàn)顯著差異。結(jié)果見(jiàn)表25。表2 苜蓿總皂苷提取物對(duì)雄性大鼠體質(zhì)量的影響(略)表3 苜?？傇碥仗崛∥飳?duì)雌性大鼠體質(zhì)量的影響(略)表4 苜?？傇碥仗崛∥飳?duì)雄性大鼠進(jìn)食量的影響(略)表5 苜?？傇碥仗崛∥飳?duì)雌性大鼠進(jìn)食量的影響(略)3.2 血液學(xué)檢查給藥14，27周及停藥4周，各項(xiàng)指標(biāo)均在正常值范圍內(nèi)，給藥組與空白對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。結(jié)

8、果見(jiàn)表68。表6 苜蓿總皂苷提取物對(duì)給藥14周大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響(略)表7 苜?？傇碥仗崛∥飳?duì)給藥27周大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響(略)表8 苜蓿總皂苷提取物對(duì)給藥14周大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響(略)3.3 血液生化檢查給藥14、27周及停藥4周，各組動(dòng)物血液生化檢測(cè)均在正常值范圍內(nèi)，組間比較無(wú)顯著性差異。結(jié)果見(jiàn)表911。表9 苜?？傇碥仗崛∥飳?duì)給藥14周大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響(略)表10 苜蓿總皂苷提取物對(duì)給藥27周大鼠血液生化指標(biāo)的影響(略)表11 苜?？傇碥仗崛∥飳?duì)恢復(fù)期大鼠血液生化指標(biāo)的影響(略)3.4 臟器重量及臟器系數(shù)的檢查系統(tǒng)尸體解剖，各臟器的形態(tài)、大小、顏色均未發(fā)現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的變化。給藥1

9、4，27周及停藥4周，各給藥組動(dòng)物的重要器官的臟器系數(shù)與空白對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果見(jiàn)表1217。表12 苜?？傇碥仗崛∥飳?duì)給藥14周雄性大鼠臟器系數(shù)的影響(略)表13 苜蓿總皂苷提取物對(duì)給藥27周雄性大鼠臟器系數(shù)的影響(略)表14 苜?？傇碥仗崛∥飳?duì)恢復(fù)期雄性大鼠臟器系數(shù)的影響(略) 表15 苜蓿總皂苷提取物對(duì)給藥14周雌性大鼠臟器系數(shù)的影響(略) 表16 苜?？傇碥仗崛∥飳?duì)給藥27周雌性大鼠臟器系數(shù)的影響(略) 表17 苜蓿總皂苷提取物對(duì)給藥27周雌性大鼠臟器系數(shù)的影響(略)3.5 病理組織學(xué)觀察3病理檢查結(jié)果顯示，本品給藥13，26周，各給藥組大鼠的主要臟器組織心、肝、脾、肺、腎、腦

10、（大腦、小腦、腦干）、垂體、脊髓（頸、胸、腰段）、骨髓、腎上腺、甲狀腺、甲狀腺旁腺、胸腺、唾液腺、食管、氣管、主動(dòng)脈、胃腸（大腸、小腸）、胰、膀胱、子宮、卵巢、淋巴結(jié)、坐骨神經(jīng)、乳腺、睪丸、附睪、前列腺等臟器的肉眼和組織學(xué)檢查未見(jiàn)明顯的與受試物相關(guān)的病理性損傷；停藥4周后，未見(jiàn)遲發(fā)性病理性改變，與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。4 討論 苜?？傇碥仗崛∥镆?.2，5.0，2.8 gkg- 1的劑量，連續(xù)灌胃給藥14，27周，相當(dāng)于藥效學(xué)有效劑量的(0.35 gkg- 1為中劑量)20，16和8倍，對(duì)大鼠的一般狀況、血常規(guī)、血液生化指標(biāo)、主要臟器系數(shù)、重要臟器組織結(jié)構(gòu)等無(wú)明顯影響。停藥4周后檢測(cè)上述各指標(biāo)均未見(jiàn)明顯異常。大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)