達(dá)肝清顆粒提取工藝的研究

1、達(dá)肝清顆粒提取工藝的研究                       作者：吳玉強， 鄧家剛，王志萍，馮旭【摘要】  目的 優(yōu)選達(dá)肝清顆粒最佳的提取工藝。方法采用正交實驗法，以人參皂苷Rg1含量及干膏率作為評價指標(biāo)，篩選最佳的提取工藝。結(jié)果達(dá)肝清顆粒最佳提取工藝為：藥材加10倍量水提取2次，1 h/次，第1次提取前先將藥材浸泡1 h。結(jié)論優(yōu)選出的達(dá)肝清顆粒的提取工藝穩(wěn)

2、定合理可行。 【關(guān)鍵詞】  達(dá)肝清顆粒； 提取工藝； 正交設(shè)計； 人參皂苷Rg1病毒性肝炎是由多種肝炎病毒引起的常見傳染病，我國病毒性肝炎發(fā)病數(shù)位居法定管理傳染病的第一位，僅慢性乙型肝炎病毒攜帶者就達(dá)1.3億1。河南學(xué)術(shù)科研網(wǎng)慢性乙型肝炎病程遷延，如得不到及時的治療，將會發(fā)展為肝硬化甚至肝癌，嚴(yán)重危害人類健康2。達(dá)肝清顆粒原方系長期用于臨床實踐的經(jīng)驗方達(dá)肝清湯劑。其由廣西特色藥材絞股藍(lán)、三姐妹、黃根等7味藥組成,具有清熱解毒、益氣健脾、利濕等功效。現(xiàn)代藥理研究表明達(dá)肝清有保肝降酶、抗乙肝病毒、提高免疫功能3、抗肝纖維化4的作用。為了將達(dá)肝清湯劑更好地應(yīng)用于臨床上，廣西中醫(yī)學(xué)院研究開發(fā)

3、出服用、攜帶方便的達(dá)肝清顆粒劑，并對其制備工藝進(jìn)行了研究?，F(xiàn)報道如下。1  儀器和材料1.1  儀器與設(shè)備 RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）； Agilent1100（DAD、VWD）高效液相色譜儀； HB43水分測定儀（梅特勒-托利多中國地區(qū)）。1.2  材料絞股藍(lán)、三姐妹（三葉香茶菜）、黃根等多味藥材均購自南寧市日益旺中草藥材經(jīng)營部，經(jīng)鑒定為正品。人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)品購自中國藥品生物制品檢定所（批號：110703-200322）。2  方法與結(jié)果2.1  考察指標(biāo)的確定 達(dá)肝清顆粒處方中有多味藥材，有效成分眾

4、多，因此以干膏率作為考察指標(biāo)之一較全面合理，君藥絞股藍(lán)的主要有效成分為人參皂苷Rg1，故將人參皂苷Rg1作為考察指標(biāo)。2.2考察指標(biāo)的測定方法按處方比例稱取黃根、三姐妹等藥材適量，共9份，根據(jù)L9(34)正交實驗設(shè)計表，將藥材浸泡適當(dāng)時間后提取。提取完畢后濃縮到密度1.05 g/ml(6070)，醇沉(水提液95%乙醇=12，醇沉24 h)，棄去沉淀，得醇沉液，測量其體積，備用。將不同條件下的水提液分別濃縮至相對密度為1.20（65），稱重。稱取2 g，分別置于已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，并于105干燥至恒重，取出，置于干燥器中放置30 min，迅速精密稱定干膏重量。  &

5、#160; 干膏率（%）=干膏重×濃縮液總重取樣量×生藥總量×100%色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水（2080）為流動相；檢測波長為203 nm。柱溫為35，流速為1 ml/min，理論塔板數(shù)按綠原酸峰計應(yīng)不低于4 000。    對照品溶液的配制：精密稱取人參皂苷Rg1適量，加甲醇溶解，制成每毫升含人參皂苷Rg1 2.03 mg的溶液，即得。    供試品溶液的配制：精密量取50 ml醇沉液放入蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，加30 ml水溶解，用水飽和正丁醇萃取3次，30 ml

6、/次，合并萃取液，再用氨試液(氨水水=11.5)洗兩次，40 ml/次，蒸干正丁醇，加適量甲醇溶解，將甲醇液移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。取部分溶液離心20 min（12 000 r/min），即得。    測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 l，注入液相色譜儀測定其峰面積，計算人參皂苷Rg1含量。2.3  正交實驗法優(yōu)選提取工藝選擇對提取效果有重要影響的3個因素（加水量、提取時間、提取次數(shù)）作為考察因素，每個因素選取3個水平，編制4因素3水平表。見表1。表1  水提工藝因素水平（略）河南學(xué)術(shù)科研網(wǎng)按處方的一定比例稱取

7、藥材，根據(jù)L9(34)正交表安排，分別以干膏率、人參皂苷Rg1含量為考察指標(biāo)進(jìn)行試驗。結(jié)果見表24。液相圖見圖12。表2  L9(34)正交實驗安排和結(jié)果，表3  方差分析（以干膏率為考核指標(biāo)），表4  方差分析（以人參皂苷Rg1為考核指標(biāo)）（略）。    從以上方差分析結(jié)果可以看出：以干膏率為評價指標(biāo)時，A，B因素有顯著性影響，影響因素順序為：B> A > C，且A2，B2，C3最佳，所以最佳工藝為A2B2C3；以人參皂苷Rg1為評價指標(biāo)時，B因素有顯著性影響，影響因素順序為：B>A>C；且A2，B2，C3最

8、佳，所以最佳工藝為A2B2C3。綜合比較上述結(jié)果，由于C因素各水平間的差異不顯著，從實際生產(chǎn)節(jié)約時間和節(jié)約能源考慮，B因素選第2水平，A因素選第2水平， C因素選第2水平，即A2B2C2。即加10倍量水提取2次，1 h/次，第1次提取前先將藥材浸泡1 h。2.4   最佳提取工藝驗證為了進(jìn)一步驗證正交試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，以確保提取工藝合理可行，按上述工藝條件A2B2C2，重復(fù)安排3批試驗。結(jié)果見表5。表5  水提工藝驗證結(jié)果（略）3  討論    采用正交設(shè)計，確定了水提工藝的最佳條件，即：即稱取水提取部分藥材，加入藥材量10

9、倍體積的水，加熱提取兩次，1 h/次。其中第1次提取前先將藥材浸泡1 h。驗證試驗結(jié)果表明提取工藝穩(wěn)定?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1崔玉, 詹林盛. 乙型肝炎病毒動物模型研究進(jìn)展J. 生物技術(shù)通訊, 2007, 18(2):307.2中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、肝病學(xué)分會. 病毒性肝炎防治方案J. 中華傳染病雜志,2001,9(1):56.3鄧家剛, 覃文慧, 涂燕云，等. “達(dá)肝清”抗乙肝病毒、降酶及調(diào)節(jié)免疫功能臨床觀察J. 廣西中醫(yī)藥, 2007, 30(1):13.4鄧家剛, 鄭作文, 王勤，等. 達(dá)肝清對四氯化碳所致大鼠慢性肝損傷的保護(hù)作用J.中藥藥理與臨床, 2007, 23(2):54.河南學(xué)術(shù)科研網(wǎng)    QQ空間    新浪微博