足細胞損傷標(biāo)志Desmin蛋白在甲狀腺功能減退癥模型大鼠腎臟中的表達及與甲狀腺功能的關(guān)系

1、足細胞損傷標(biāo)志Desmin蛋白在甲狀腺功能減退癥模型大鼠腎臟中的表達及與甲狀腺功能的關(guān)系         11-01-11 11:20:00     編輯：studa20                  作者：王瑞英 常湛 李娟 王倩 張松筠【摘要】  目的觀察甲狀腺功能減退癥(甲減)大鼠腎臟損傷

2、時足細胞損傷標(biāo)志Desmin蛋白在腎組織中的表達，探討甲減腎臟損傷的發(fā)生機制以及與甲狀腺功能的關(guān)系。方法用丙基硫氧嘧啶(PTU)連續(xù)灌胃制作甲減大鼠模型。分別動態(tài)觀察對照組、甲減組和干預(yù)組給予左甲狀腺素鈉(L-T4)和停止給予PTU進行干預(yù)治療大鼠的腎臟病理改變及損傷情況，并同時應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測Desmin在腎組織中的表達情況。結(jié)果甲減大鼠出現(xiàn)腎臟損傷，并且隨著病程進展逐漸加重，并與甲狀腺功能密切相關(guān)。干預(yù)組腎組織損傷均較甲減組減輕。結(jié)論甲減時腎臟損傷與足細胞相關(guān)，甲狀腺激素參與足細胞損傷。 【關(guān)鍵詞】  甲狀腺功能減退癥;腎臟損傷;Desmin;足細胞【Abstract】Obj

3、ectiveTo study the expression of the Desmin albumen in hypothyroidism rats, reveal the pathology of occurrence and development of the renal injury in hypothyroidism and explore the relationship in the renal injury and the thyroid function.MethodsModel of hypothyroidism rats was made by giving them p

4、ropylthiouracil (PTU). The pathology condition of the control group and hypothyroidism group was examined by dynamic viewing. The immunohistochemistry was used todetermine the expression of Desmin albumen in the renal of the control, hypothyroidism and intervention groups (giving the levothyroxine s

5、odium and stopping PTU).ResultsThe renal injury appeared in hypothyroidism rats. With the development of the disease, the renal injury was aggravated progressively, which was related with the thyroid function. The renal injury had reduced after intervention.ConclusionsThe renal injury is related wit

6、h the podocytein hypothyroidism rats and thyroid hormone participates in regulating the injury of podocyte.【Key words】Hypothyroidism; Renal injury; Desmin albumen; Levothyroxine Sodium甲狀腺功能減退癥(簡稱甲減)時體內(nèi)甲狀腺激素缺乏，可從多方面造成腎臟的損害，導(dǎo)致了腎臟結(jié)構(gòu)和功能的改變，并隨著甲減程度的加重而加重，最終導(dǎo)致腎臟纖維化、腎衰竭13。足細胞損傷標(biāo)志Desmin蛋白作為肌源性細胞的標(biāo)志，正常情況下腎小球

7、系膜細胞可偶見少量表達，而足細胞無明顯表達。當(dāng)足細胞因各種原因發(fā)生損傷時，可大量表達Desmin而發(fā)生表型轉(zhuǎn)化。損傷的足細胞一方面可因為結(jié)構(gòu)異常而導(dǎo)致腎功能改變，加重腎損害進程;另一方面其自身也可表型轉(zhuǎn)化為纖維樣細胞，直接或通過產(chǎn)生某些促細胞外基質(zhì)(ECM)生成因子，促使ECM積聚，從而最終導(dǎo)致腎組織硬化和纖維化。本實驗通過口服丙基硫氧嘧啶(PTU)制作甲減大鼠模型，通過免疫組織化學(xué)方法檢測大鼠腎臟Desmin蛋白的表達，同時監(jiān)測血脂、腎功能及大鼠腎組織在電鏡下病理情況，進一步了解甲減性腎臟損傷的特點及產(chǎn)生機制;同時部分給予單純停止PTU，部分給予停止PTU加服甲狀腺激素-左甲狀腺素鈉(L-T

8、4)干預(yù)治療，探討甲狀腺功能恢復(fù)快慢及恢復(fù)程度對甲減性腎臟損傷的影響，以及對腎臟損傷恢復(fù)的影響。1材料與方法1.1動物分組及模型建立健康SD雄性大鼠84只，體重180200 g，動物合格證編號是DK0503-0062，由河北醫(yī)科大學(xué)動物中心提供。所有動物購回后適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w，無不良反應(yīng)，飲食、水正常者，即納入實驗。將84只SD大鼠隨機分為A、B兩組，室溫2025，光照與黑暗每日12 h更替，普通飼料和三蒸水喂養(yǎng)。A組(正常對照組，30只)：給予同甲減組大鼠等劑量的三蒸水灌胃，每日1次。隨機分為5組，每組6只，分別于3、6、8、10、12 w經(jīng)心臟取血，宰殺，取腎臟。B組(甲減組，54只)：給

9、予PTU連續(xù)灌胃制備甲減動物模型，將PTU溶于三蒸水中，按大鼠每天每100 g體重給予20 mg PTU，計算相應(yīng)的劑量(每周稱量體重1次，根據(jù)體重改變藥物量)。分別于3、6、8 w各取6只經(jīng)心臟取血，宰殺，取腎臟。于8 w時起將剩余36只動物隨機分為三組，B1組12只：繼續(xù)給予原量PTU灌胃;B2組12只：停止給予PTU改為等量三蒸水灌胃;B3組12只：給予L-T4，將L-T4溶于三蒸水中，每只大鼠每天每100 g體重給予6g L-T4灌胃治療，以上三組同期分別于10、12 w取血，宰殺，取腎臟。1.2試劑兔抗大鼠Desmin蛋白多克隆抗體、SP免疫組化試劑盒，DAB顯色劑及山羊血清均購于武

10、漢博士德生物科技有限公司;血清促甲狀腺激素(TSH)、游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4)試劑盒由中國原子能研究所提供;血脂、腎功能試劑購自河北博海生物工程開發(fā)有限公司;PTU購自上海復(fù)星朝輝藥廠，規(guī)格：50 mg×100片/盒;L-T4(商品名為優(yōu)甲樂)，德國默克公司產(chǎn)品。1.3方法所有標(biāo)本均在MoticMed 6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)內(nèi)在放大400倍數(shù)下，Desmin結(jié)果進行半定量分析，每份標(biāo)本測10個腎小球，用積分光密度(IOD)表示陽性物質(zhì)的相對含量。1.4統(tǒng)計學(xué)處理所有處理數(shù)據(jù)均采用x±s表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用q檢驗。變量之

11、間采用直線相關(guān)分析方法。2結(jié)果2.1血清TSH、FT3、FT4水平與A組相比，B組大鼠從灌胃大約3 w起開始出現(xiàn)飲食水減少，活動減少，對外界環(huán)境刺激反應(yīng)淡漠。部分甲減大鼠出現(xiàn)后頸部毛發(fā)脫落，稀疏。血清FT3，F(xiàn)T4降低及TSH升高。B2組及B3組大鼠較B1組大鼠有所增加，活動及對外界刺激均好于B1組大鼠。見表1、表2。2.2透射電鏡A組大鼠腎小球足細胞結(jié)構(gòu)完整，足突排列整齊清晰。甲減組大鼠腎小球基底膜不規(guī)則旋繞卷曲;足細胞足突局灶性融合;毛細血管內(nèi)皮窗孔徑增大;足細胞線粒體嵴部分或大部分融合或消失，部分膜融合、消失;粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有脫顆?，F(xiàn)象，并且這些病變隨著甲減病情的加重而加重。B2組和B3組與B1組相比病變明顯減輕。見圖1。2.3腎組織Desmin表達變化正常大鼠腎小球內(nèi)偶見散在Desmin表達;而甲減大鼠腎小球內(nèi)Desmin表達顯著增多，隨著甲減病程的進展，Desmin表達呈遞增趨勢，B組比同期A組相比，在3 w時表達率增加(P<0.05)，在6、8、10、12 w時表達明顯增加(P<0.01)。