維生素C含量測(cè)定方法綜述

1、.1.2.5維生素維生素C的結(jié)構(gòu)式的結(jié)構(gòu)式 維生素C：六碳的多羥基內(nèi)酯CCCHOHOCHOOCHHOCH2OH.6.82,6-二氯酚靛酚滴定法測(cè)定維生素C含量v其能還原2,6-二氯酚靛酚染料。v維生素C具有還原性的烯二醇基，我們通過(guò)氧化還原滴定來(lái)測(cè)定維生素CCCOHOH 原理原理2，6-二氯靛酚是一種染料，其氧化型在酸性介質(zhì)中為紅色，堿性介質(zhì)中為藍(lán)色，與Vc反應(yīng)后，生成無(wú)色的還原型酚亞胺，因此，在酸性條件下，用2，6-二氯靛酚滴定至溶液顯玫瑰紅色，即為終點(diǎn)；無(wú)需另加指示劑。方法方法取本品適量（約相當(dāng)于Vc50mg），用適量水溶解，置100ml量瓶中，加偏磷酸-醋酸試液20ml,再用水稀釋置刻度

2、，搖勻；精密量取稀釋液適量（約相當(dāng)于Vc2mg）置50ml的錐形瓶中,加偏磷酸-醋酸試液5ml,用2,6-二氯靛酚滴定液滴定,至溶液顯玫瑰紅色,并持續(xù)5s不褪；空白試驗(yàn)：取偏磷酸-醋酸試液5.5ml，加水15ml，用2，6-二氯靛酚滴定液滴定。計(jì)算： (V-V0) F T WW 標(biāo)示量 標(biāo)示量%=反應(yīng)摩爾比反應(yīng)摩爾比100.11CCCHOHOCHOOCHHOCH2OHOClClNOHOHClClNOHCCOCHCOOOCHCH2OHHO 維生素C 2,6-二氯酚靛酚 維生素C 2,6-二氯酚靛酚（還原型） （氧化型，粉紅色） （氧化型） （還原型） + + = v2,6-二氯酚靛酚染料的鈉鹽在

3、水溶液中顯藍(lán)色，在酸性溶液中呈紅色，被還原后紅色消失。.12碘量法o原理：由于維生素C分子中的烯二醇基有極強(qiáng)的還原性，能被碘氧化，用碘滴定VCoEC6H6O6/C6H8O6=0.18 ,EI2/I-=0.535 o終點(diǎn)：淀粉為指示劑，溶液出現(xiàn)穩(wěn)定的藍(lán)色即為終點(diǎn)o反應(yīng)式： .13碘量法n碘的濃度由已知濃度的Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定n反應(yīng)式：n計(jì)算式：nWvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc ) *100%222234622IS OIS O.14碘量法 注意 ！ 測(cè)定時(shí)：加HAC使溶液呈弱酸性 原因: (1) Vc還原性很強(qiáng)，在空氣中很容易被氧化，在堿性介質(zhì)中更甚 (2)I2在堿性介質(zhì)

4、中會(huì)發(fā)生歧化反應(yīng) 加HAC可減少VC的副反應(yīng)，避免實(shí)驗(yàn)誤差.16電位滴定法原理(具體來(lái)說(shuō):) 隨著滴定劑的加入，由于發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，待測(cè)離子濃度將不斷變化；從而指示電極電位發(fā)生相應(yīng)變化；導(dǎo)致電池電動(dòng)勢(shì)發(fā)生相應(yīng)變化；計(jì)量點(diǎn)附近離子濃度發(fā)生突變；引起電位的突變，因此由測(cè)量工作電池電動(dòng)勢(shì)的變化就能確定終點(diǎn)。.17 電位滴定法u右圖：電位滴定法基本儀器裝置n計(jì)算式：(與碘量法相同)nWvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc ) *100%n優(yōu)點(diǎn)：n解決了滴定分析中遇到有色或渾濁溶液時(shí)無(wú)法指示終點(diǎn)的問(wèn)題.182 2 分光光度測(cè)定維生素分光光度測(cè)定維生素C C 2.1 22.1 2，4 4一二硝基苯

5、肼分光光度一二硝基苯肼分光光度法法 2.2 2.2 鉬藍(lán)比色法鉬藍(lán)比色法 2.3 2.3 其他方法其他方法.192，4一二硝基苯肼分光光度法一二硝基苯肼分光光度法 l原理：l維生素C在空氣中尤其在堿性介質(zhì)中極易被氧化成脫氫抗壞血酸l反應(yīng)式： .202，4一二硝基苯肼分光光度法一二硝基苯肼分光光度法 pH5,脫氫抗壞血酸內(nèi)環(huán)開(kāi)裂，形成二酮古洛糖酸 二酮古洛糖酸HHHHHH.22分光光度法o樣品溶液與VC標(biāo)準(zhǔn)溶液按上述方法同樣處理o500nm處測(cè)吸光度o下圖：721型分光光度計(jì).25 差示旋光法差示旋光法原理原理方法方法結(jié)果結(jié)果維生素C片在不同PH值的溶液中旋光度有顯著差異，而片劑輔料旋光度保持不

6、變差示旋光法消除輔料的影響，直接測(cè)出該制劑的含量討論討論與與.26 差示旋光法差示旋光法方法方法TEXT1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制準(zhǔn)確稱取維生素C精制品5.0g，乙二胺四乙酸鈉0.37g,置于100mL容量瓶中,用新沸冷卻的蒸餾水溶解,加水到指定刻度,配制成50mg/mL的維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液。TEXT原理原理方法方法結(jié)果結(jié)果討論討論與與2）比旋光度與溶液pH值的關(guān)系量取10.0mL維生素C標(biāo)準(zhǔn)液于50mL量瓶中,用水稀釋至50mL。測(cè)定溶液的pH及旋光度,然后逐次分批加入氫氧化鈉固體(每次約50mg),每次溶解后,測(cè)定一次溶液的pH及其旋光度,得到維生素C溶液的pH及旋光度關(guān)系原理原理方法方法結(jié)果結(jié)果討

7、論討論與與.28差示旋光法差示旋光法選定選定pH為為2.2和和6.2.29 差示旋光法差示旋光法2）差示旋光度與溶液濃度關(guān)系吸取2.0、4.0、8.0、16.0、20.0mL的維生素C標(biāo)準(zhǔn)液各兩份,分別置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的鹽酸鹽緩沖液定容；一份用pH6.2的磷酸鹽緩沖液定容，靜置3min后,用220mm測(cè)定管，以前者為空白，測(cè)定后者的差示旋光度(a)。文獻(xiàn)結(jié)果：線性方程為a=0 205*C+ 005，r=09964原理原理方法方法結(jié)果結(jié)果討論討論與與.30 差示旋光法差示旋光法3）輔料干擾試驗(yàn)取混合輔料20mg(淀粉、硬脂酸鎂、EDTA、糊精等按處方比例混勻)兩份分別置于5

8、0mL的容量瓶,一份用pH2.2的鹽酸鹽緩沖液定容,一份用pH6.2的磷酸鹽緩沖液定容,濾去不溶物,濾液在兩種pH值測(cè)定差示旋光度。文獻(xiàn)結(jié)果：輔料的差示旋光度為零，說(shuō)明輔料對(duì)維生素C含量的測(cè)定不干擾。原理原理方法方法結(jié)果結(jié)果討論討論與與.31 差示旋光法差示旋光法4）穩(wěn)定性試驗(yàn)同一測(cè)試樣品，在120min內(nèi)，每隔3min測(cè)定一次差示旋光度。文獻(xiàn)結(jié)果：差示旋光度基本不變?cè)碓矸椒ǚ椒ńY(jié)果結(jié)果討論討論與與.32 差示旋光法差示旋光法5）回收率試驗(yàn)精密稱取維生素C精制品500.0mg兩份，分別置于50mL容量瓶中，各加入20mg輔料，分別用鹽酸鹽緩沖液及磷酸鹽緩沖液配制成50mL溶液，測(cè)定差示旋光

9、度。文獻(xiàn)結(jié)果：平均回收率為97.8，變異系數(shù)cv為1.03原理原理方法方法結(jié)果結(jié)果討論討論與與.33 差示旋光法差示旋光法方法方法TEXT6）樣品測(cè)定取維生素C片劑10片，稱重研碎后分別用鹽酸鹽緩沖液及磷酸鹽緩沖液配制成50mL溶液(相當(dāng)于含Vc 20mg/mL)，濾去不溶物，測(cè)定濾液的差示旋光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算其含量。TEXT原理原理討論討論方法方法結(jié)果結(jié)果與與方法方法TEXT1）維生素易被氧化,空氣及水中的氧均可使其氧化分解，配制溶液時(shí)使用新沸冷卻水,同時(shí)加人EDTA作為穩(wěn)定劑；2）樣品測(cè)定時(shí)，片劑部分物質(zhì)不能完全溶解，必須過(guò)濾除去，然后測(cè)定濾液的差示旋光度。TEXT原理原理討論討論方法

10、方法結(jié)果結(jié)果與與.353 高效液相色譜法測(cè)定維生素Cn3.1 HYPERSILC83.1 HYPERSILC8色譜柱色譜柱法法n3.2 VenusilXBPC183.2 VenusilXBPC18柱法柱法n3.3 3.3 其他方法其他方法 系統(tǒng)采用VenusilXBPC18柱(46x250 mm，5g)，用02的偏磷酸的水溶液作為流動(dòng)相，流速1 mlmin，檢測(cè)波長(zhǎng)240 nm；維生素C濃度在01-10 mgmL范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。該方法回收率9989，標(biāo)準(zhǔn)偏差091，操作簡(jiǎn)便、靈敏、可靠 .39薄層掃描法薄層掃描法操作方法與結(jié)果操作方法與結(jié)果（1）試紙的制備 2,6-二氯靛酚鈉 (DCP

11、-Na)溶于無(wú)水乙醇配成0.05%的DCP-Na乙醇溶液，濾紙?jiān)谑⒂蠨CP-Na乙醇溶液的展開(kāi)缸中浸漬3min，邊浸邊搖展開(kāi)缸，使濾紙均勻著色，充分被染料溶液所飽和。取出懸掛于暗處，晾干后，立即放入干燥器中避光保存，備用。 .40薄層掃描法薄層掃描法（2）緩沖溶液的配制 稱取檸檬酸水合物10g，放入1000ml容量瓶中，加入1M 氫氧化鈉 420ml，并用蒸餾水稀釋至刻度，此溶液的pH應(yīng)為3.5。否則，用酸或堿調(diào)整 pH值，保存于冰箱中。 .41薄層掃描法薄層掃描法3）掃描條件確定 在制備的染料試紙上定量點(diǎn)上維生素C對(duì)照品進(jìn)行掃描 ，維 生素 C在 290nm 處有最大吸收，420nm處無(wú)吸收

12、，故選擇1=290nm， 2=420nm雙波長(zhǎng)反射式鋸齒掃描。原理原理方法方法結(jié)果結(jié)果討論討論與與.424）線性實(shí)驗(yàn)）線性實(shí)驗(yàn) 4.1）對(duì)照品溶液的配制）對(duì)照品溶液的配制 精密稱取維生素精密稱取維生素C標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品100mg，用緩沖溶液配，用緩沖溶液配成成lmg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密稱取維生素的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密稱取維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)溶液1、2、3、4、5ml，分，分別置于別置于10ml容量瓶中，用緩沖溶液稀釋至刻度。容量瓶中，用緩沖溶液稀釋至刻度。4.2）測(cè)定）測(cè)定 用用5 l定量毛細(xì)管，分別吸取上述溶液各定量毛細(xì)管，分別吸取上述溶液各5 l，點(diǎn)于試紙上，點(diǎn)于試紙上 。點(diǎn)樣后晾干，并將試紙點(diǎn)樣

13、后晾干，并將試紙 固定在固定在20cm20cm玻璃板上，放入薄層掃描儀。玻璃板上，放入薄層掃描儀。測(cè)定測(cè)定A 的積分值的積分值 (峰面積峰面積)作為縱坐標(biāo)作為縱坐標(biāo)Y ，點(diǎn)樣量為橫，點(diǎn)樣量為橫 坐標(biāo)坐標(biāo)X，得一直線，得一直線方程方程 Y=15692X+130225，r= 09991 原理原理方法方法結(jié)果結(jié)果討論討論與與方法方法TEXT5）樣品的含量測(cè)定 取維生素 C片10片，研細(xì)，精密稱取平均片重一片的粉末，放入100ml容量瓶中，加入緩沖液至刻度，振搖，使維生 素 C溶解，放置、澄清，用吸液管取3ml 移至10ml容量瓶中，用緩沖液稀釋至刻度。用 5 l定量毛細(xì)管點(diǎn)樣品溶液與不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液于同一試紙上 ，然后掃描 測(cè)定峰面積，由工作曲線法計(jì)算維生素C片中的維生素C含量。TEXT原理原理方法方法結(jié)果結(jié)果討論討論與與6）回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取維生素C對(duì)照品20mg，其它原輔料適量，置