注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證

1、注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證方案文件編碼:項(xiàng)目姓名簽名日期起草審核審核批準(zhǔn)生效日期年份注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證目錄1、注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證計(jì)劃2、注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證小組名單3、注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證方案4、注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證培訓(xùn)記錄5、注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證附屬記錄6、注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證報(bào)告7、注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證合格證書注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證計(jì)劃根據(jù)我公司認(rèn)證領(lǐng)導(dǎo)小組的要求及驗(yàn)證委員會(huì)的安排，對(duì)注射用水微生物限度檢查方法進(jìn)行驗(yàn)證，具體安排如下：一、年月日一年月日，制定驗(yàn)證方案，由注射用水微生物限度檢查方法

2、驗(yàn)證小組組長負(fù)責(zé)起草。二、年月日一年月日，驗(yàn)證方案討論、修改、審批和培訓(xùn)。三、年月日一年月日，驗(yàn)證工作實(shí)施。四、年月日一年月日，根據(jù)驗(yàn)證情況與記錄，書寫驗(yàn)證報(bào)告。五、年月日一年月日，驗(yàn)證報(bào)告審核批準(zhǔn)，合格證發(fā)放。組長:成員：注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證方案頁碼：1/3r*/_'_,一'vv,_,vv一'一'v'一'一'一，一、目的中華人民共和國藥典2010版二部規(guī)定注射用水微生物限度檢查采用薄膜過濾法，確認(rèn)該方法適合于本公司注射用水中細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)測定。二、適用范圍本公司注射用水中細(xì)菌、霉菌及酵母菌的測定。三、內(nèi)容1 .概述當(dāng)建立

3、微生物限度檢查法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌的計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證，已確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌的測定。若產(chǎn)品的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生改變可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，計(jì)數(shù)方法應(yīng)重新驗(yàn)證。2 .驗(yàn)證項(xiàng)目及認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各試驗(yàn)菌的回收率逐一進(jìn)行驗(yàn)證，試驗(yàn)組的菌回收率不得低于70%（試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù)的值占菌液組的平均菌落數(shù)的白分率）。3 .驗(yàn)證依據(jù)中華人民共和國藥典2010版二部附錄XIJ微生物限度檢查法。4 .驗(yàn)證方法與內(nèi)容4.1. 驗(yàn)證方法采用薄膜過濾法進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌的測定。4.2.驗(yàn)證試驗(yàn)分3組，至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算供試品組和對(duì)照組試驗(yàn)

4、的菌回收率。4.3.儀器設(shè)備4.3.1.TMQ.R-3870型臺(tái)式滅菌器4.3.2.HPX-9272MBE型電熱恒溫培養(yǎng)箱（3035C）4.3.3.單人凈化工作臺(tái)4. 3.4.MJ-160霉菌培養(yǎng)箱（2328）4.4. 培養(yǎng)基4. 4.1.營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基5. 4.2.營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基5.4. 3.玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基5.4.4. 酵母浸出粉陳葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基4.4.5.改良馬丁培養(yǎng)基注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證方案頁碼："34.5.驗(yàn)證過程與方法4.5.1.取樣：由質(zhì)量部生測室檢驗(yàn)人員負(fù)責(zé)取樣。用滅菌好的錐形瓶取注射用水（注A-0、注A-7、注B-8、注B-0）取樣點(diǎn)水樣各1500ml

5、,立即送質(zhì)量部生測室檢驗(yàn)。1. 5.2.菌液制備a.取經(jīng)3536培養(yǎng)1824小時(shí)的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、與枯草芽胞桿菌營養(yǎng)肉湯新鮮培養(yǎng)物1ml加入到9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-6i（）-7約50100cfiyml的菌懸液備用。b.取經(jīng)2425培養(yǎng)24-48小時(shí)的白色念珠菌改良馬丁液體培養(yǎng)物1ml加入到9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-5約為50lOOcfbdl的菌懸液備用。c.取經(jīng)2425培養(yǎng)一周的黑曲霉菌斜面培養(yǎng)物，加35ml含0.05%（inlinl）聚山梨脂80的0.9%無菌氯化鈉溶液將抱子洗脫，然后吸出抱子懸液，用墊有脫脂棉的漏斗（濕熱滅菌）

6、過濾，除去菌絲，收集胞子懸液至另一無菌試管內(nèi)作為菌原液，取此抱子懸液1ml加至I9ml含0.05%（mknl）聚山梨脂80的0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至IO"約為50lOOcfb仇1的菌懸液備用。4. 5.3.菌液計(jì)數(shù)（每種菌液至少接種2個(gè)平皿）a.取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌與枯草芽抱桿菌各1ml分別接種至營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,置3035c培養(yǎng)48小時(shí)計(jì)數(shù)；b.取白色念珠菌、黑曲霉各1ml分別接種至玖瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，置2328c培養(yǎng)72小時(shí)計(jì)數(shù)；c.取白色念珠菌1ml接種至酵母浸出粉陳葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基置2328培養(yǎng)72小時(shí)計(jì)數(shù)。d.計(jì)數(shù)結(jié)果見驗(yàn)證記錄5. 5.4.驗(yàn)證方法a.

7、試驗(yàn)組取注射用水100ml和50100cfu試驗(yàn)菌，過濾，取出濾膜，菌面朝上貼于瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)。每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，按薄膜過濾法測定其菌數(shù),每片濾膜上的菌落數(shù)應(yīng)不超過lOOcfu。b.菌液組取50lOOcfu試驗(yàn)菌，分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，按平皿菌落計(jì)數(shù)法測定其菌數(shù)。c.供試品對(duì)照組取注射用水100mL過濾，取出濾膜，菌面朝上貼于瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)。同法，細(xì)菌、霉菌及酵母菌各制備2個(gè)平皿，測定供試品本底菌數(shù)。d.驗(yàn)證結(jié)果見驗(yàn)證記錄。注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證方案頁碼：1/36. 組織實(shí)施6.1. 驗(yàn)證機(jī)構(gòu)的組成6.1.1. 公司驗(yàn)證委

8、員會(huì)，負(fù)責(zé)所有驗(yàn)證工作的領(lǐng)導(dǎo)和組織、審批驗(yàn)證方案和驗(yàn)證報(bào)告、發(fā)放驗(yàn)證證書。6.1.2. 注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證工作小組，負(fù)責(zé)該驗(yàn)證項(xiàng)目的驗(yàn)證方案起草、實(shí)施、組織與協(xié)調(diào)實(shí)施，負(fù)責(zé)驗(yàn)證樣品檢測，完成各項(xiàng)記錄，根據(jù)檢驗(yàn)和確認(rèn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)定、完成驗(yàn)證報(bào)告。部門部門職責(zé)責(zé)任人工作劃分質(zhì)量部方案起草、實(shí)施、書寫報(bào)告操作實(shí)施質(zhì)量部取樣、檢驗(yàn)、出報(bào)告操作實(shí)施驗(yàn)證委員會(huì)方案審定、批準(zhǔn)、實(shí)施、發(fā)放驗(yàn)證合格證方案審核方案批準(zhǔn)5.2.實(shí)施時(shí)間為：年月日一年月日。四、附件及相關(guān)表格文件注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證報(bào)告文件編碼:項(xiàng)目姓名簽名日期起草審核審核批準(zhǔn)生效日期年份注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證報(bào)告頁碼：2

9、/5一、驗(yàn)證概述為保證藥品質(zhì)量，根據(jù)本公司驗(yàn)證工作領(lǐng)導(dǎo)小組的要求及驗(yàn)證委員會(huì)的安排,對(duì)C/D生產(chǎn)線注射用水系統(tǒng)進(jìn)行微生物限度檢查方法驗(yàn)證。1 .驗(yàn)證組織與實(shí)施1.1.驗(yàn)證小組成員及職責(zé)分工部門部門職責(zé)責(zé)任人工作劃分質(zhì)量部方案起草、實(shí)施、書寫報(bào)告操作實(shí)施質(zhì)量部取樣、檢驗(yàn)、出報(bào)告操作實(shí)施驗(yàn)證委員會(huì)方案審定、批準(zhǔn)、實(shí)施、發(fā)放驗(yàn)證合格證方案審核方案批準(zhǔn)1. 2.本驗(yàn)證由質(zhì)量部負(fù)責(zé)并由相關(guān)人員根據(jù)注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證方案所規(guī)定的方法與步驟實(shí)施。二、各項(xiàng)目驗(yàn)證結(jié)論1.驗(yàn)證用培養(yǎng)基名稱生產(chǎn)廠家批號(hào)配制批號(hào)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基改良馬丁培養(yǎng)基酵母浸出粉陳葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基2.驗(yàn)

10、證用菌株：來源于貴州省藥品檢驗(yàn)所驗(yàn)證菌株菌株代數(shù)增菌培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時(shí)間（小時(shí)）大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽泡桿菌白色念珠菌黑曲霉菌3.各取樣點(diǎn)菌落計(jì)數(shù)回收率驗(yàn)證結(jié)果見下表獨(dú)立試驗(yàn)一：各試驗(yàn)組菌落計(jì)數(shù)（回收率）取樣點(diǎn)試驗(yàn)日期年月日?qǐng)?bào)告日期年月日驗(yàn)證菌株平皿號(hào)試驗(yàn)組CFlPlOOml菌液組CFU/ml供試品對(duì)照組CFlPlOOml試驗(yàn)組菌回收率（）大腸埃希菌（營養(yǎng)瓊脂）12平均值金黃色葡萄球菌（營養(yǎng)瓊脂）12平均值枯草芽泡桿菌（營養(yǎng)瓊脂）12平均值白色念珠菌（玖瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基）12平均值黑曲霉（玖瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基）12平均值白色念珠菌（酵母浸出粉豚葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）12平均值結(jié)論：試驗(yàn)人復(fù)

11、核人獨(dú)立試驗(yàn)二：各試驗(yàn)組菌落計(jì)數(shù)（回收率）取樣點(diǎn)試驗(yàn)日期年月日?qǐng)?bào)告日期年月日驗(yàn)證菌株平皿號(hào)試驗(yàn)組CFlPlOOml菌液組CFU/ml供試品對(duì)照組CFWOOml試驗(yàn)組菌回收率（）大腸埃希菌（營養(yǎng)瓊脂）12注射用水微生物限度檢查方法驗(yàn)證報(bào)告頁碼:2/5平均值金黃色葡萄球菌（營養(yǎng)瓊脂）12平均值枯草芽的桿菌（營養(yǎng)瓊脂）12平均值白色念珠菌（玖瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基）12平均值黑曲霉（玖瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基）12平均值白色念珠菌（酵母浸出粉豚葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）12平均值結(jié)論:試驗(yàn)人復(fù)核人獨(dú)立試驗(yàn)三：各試驗(yàn)組菌落計(jì)數(shù)（回收率）取樣點(diǎn)試驗(yàn)日期年月日?qǐng)?bào)告日期年月日驗(yàn)證菌株平皿號(hào)試驗(yàn)組CFUlOOml菌液組CFU/ml

12、供試品對(duì)照組CFLPlOOml試驗(yàn)組菌回收率（）大腸埃希菌（營養(yǎng)瓊脂）12平均值金黃色葡萄球菌（營養(yǎng)瓊脂）12平均值枯草芽的桿菌（營養(yǎng)瓊脂）12平均值白色念珠菌（玖瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基）12平均值黑曲霉（玖瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基）12平均值白色念珠菌（酵母浸出粉膝葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）12平均值結(jié)論：試驗(yàn)人復(fù)核人獨(dú)立試驗(yàn)四：各試驗(yàn)組菌落計(jì)數(shù)（回收率）取樣點(diǎn)試驗(yàn)日期年月日?qǐng)?bào)告日期年月日驗(yàn)證菌株平皿號(hào)試驗(yàn)組CFU400ml菌液組CFU/ml供試品對(duì)照組CFUlOOnil試驗(yàn)組菌回收率（）大腸埃希菌（營養(yǎng)瓊脂）12平均值金黃色葡萄球菌（營養(yǎng)瓊脂）12平均值枯草芽抱桿菌（營養(yǎng)瓊脂）12平均值白色念珠菌（玖瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基）12平均值黑曲霉（玖瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基）12平均值白色念珠菌（酵母浸出粉豚葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）12平均值結(jié)論：試驗(yàn)人復(fù)核人三、建議、結(jié)果分析和驗(yàn)證總結(jié)1 .建議1.1. 加強(qiáng)生測室檢驗(yàn)人員的操作技能培訓(xùn)，使檢驗(yàn)過程標(biāo)準(zhǔn)化，程序化。1.2. 當(dāng)注射用水系統(tǒng)在日常微生物限度檢測時(shí)出現(xiàn)異常的檢測結(jié)果時(shí)，應(yīng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室偏差處理或應(yīng)再次進(jìn)行注射用水微生物限度檢查方法的再驗(yàn)證。2 .結(jié)果分析及驗(yàn)證總