常用免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的基本原理

1、WORD格式常用免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的根本原理免疫學(xué)檢測(cè)即是根據(jù)抗原、抗體反響的原理，利用的抗原檢測(cè)未知的抗體或利用的抗體檢測(cè)未知的抗原。由于外源性和內(nèi)源性抗原均可通過(guò)不同的抗原遞呈途徑誘導(dǎo)生物機(jī)體的免疫應(yīng)答，在生物體內(nèi)產(chǎn)生特異性和非特異性T細(xì)胞的克隆擴(kuò)增，并分泌特異性的免疫球蛋白抗體。由于抗體抗原的結(jié)合具有特異性和專一性的特點(diǎn)，這種檢測(cè)可以定性、定位和定量地檢測(cè)某一特異的蛋白抗原或抗體。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的用途非常廣泛，它們可用于各種疾病的診斷、療效評(píng)價(jià)及發(fā)病機(jī)制的研究。最初的免疫檢測(cè)方法是將抗原或抗體的一方或雙方在某種介質(zhì)中進(jìn)展擴(kuò)散，通過(guò)觀察抗原抗體相遇時(shí)產(chǎn)生的沉淀反響，檢測(cè)抗原或抗體，最終到達(dá)診斷

2、的目的。這種擴(kuò)散可以是蛋白的自然擴(kuò)散，例如環(huán)狀沉淀試驗(yàn)、單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、雙向免疫擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)。單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)就是在凝膠中混入抗體，制成含有抗體的凝膠板，而將抗原參加凝膠板預(yù)先打好的小孔內(nèi)，讓抗原從小孔向四周的凝膠自然擴(kuò)散，當(dāng)一定濃度的抗原和凝膠中的抗體相遇時(shí)便能形成免疫復(fù)合物，出現(xiàn)以小孔為中心的圓形沉淀圈，沉淀圈的直徑與參加的抗原濃度成正比。利用蛋白在不同酸堿度下帶不同電荷的特性，可以利用人為的電場(chǎng)將抗原、抗體擴(kuò)散，例如免疫電泳試驗(yàn)和雙向免疫電泳。免疫電泳首先將抗原參加凝膠中電泳，將抗原各成分依次分散開(kāi)。然后沿電泳方向平行挖一直線形槽，于槽內(nèi)加入含有針對(duì)各種抗原的混合抗體，讓各抗原成分與相應(yīng)抗

3、體進(jìn)展自然擴(kuò)散，形成專業(yè)資料整理WORD格式沉淀線。然后利用標(biāo)準(zhǔn)的抗原抗體沉淀線進(jìn)展抗原蛋白或抗體的鑒別。上述的方法都是利用肉眼觀察抗原抗體反響產(chǎn)生的沉淀，因此靈敏度有很大的局限。比濁法引入沉淀檢測(cè)產(chǎn)生的免疫比濁法就是利用濁度計(jì)測(cè)量液體中抗原抗體反響產(chǎn)生的濁度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)計(jì)算抗原或抗體的含量。該方法不但大大提高了檢測(cè)的靈敏度，且可對(duì)抗原、抗體進(jìn)展定量的檢測(cè)。免疫印跡法那么首先通過(guò)電泳別離標(biāo)準(zhǔn)的抗原，然后將電泳別離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜上，浸于待測(cè)血清中。如果血清中含有與一種或幾種抗原相對(duì)應(yīng)的抗體的話，那么在該抗原印跡部位形成免疫復(fù)合物沉淀。在洗去未結(jié)合的抗原和抗體后，在膜上加標(biāo)記的抗人免

4、疫球蛋白的抗體，此抗體可以和病毒抗原與人抗體形成的免疫復(fù)合物發(fā)生反響，最后參加顯色底物可以是普通顯色劑，化學(xué)發(fā)光劑或放射性同位素等進(jìn)展顯色。由于利用了第二種抗體進(jìn)展了信號(hào)放大，并且可以利用高靈敏的顯色方式，靈敏度也得到了很大的提高。目前該方法已經(jīng)利用凝集反響檢測(cè)抗原抗體反響也是較傳統(tǒng)的手段之一。利用帶有抗原的乳膠顆粒等不溶性的顆?？乖c相應(yīng)抗體結(jié)合形成凝集團(tuán)塊，通過(guò)凝集現(xiàn)象，就可以到達(dá)檢測(cè)的目的。無(wú)論是直接凝集法還是間接凝集法都可對(duì)抗原或抗體進(jìn)展檢測(cè)。還可以利用二抗對(duì)信號(hào)進(jìn)展放大，從而提高檢測(cè)的靈敏度。利用補(bǔ)體介導(dǎo)的反響例如溶血反響，檢測(cè)抗原抗體反響也是過(guò)去常用的方法?？贵w與細(xì)胞外表抗原相遇，

5、形成紅細(xì)胞- 抗體復(fù)合物即可使參加反響中的補(bǔ)體活化，導(dǎo)致細(xì)胞的溶解，此方法可用于紅細(xì)胞的各種抗原或相應(yīng)抗體的專業(yè)資料整理WORD格式檢測(cè)，此外利用補(bǔ)體反響的競(jìng)爭(zhēng)效應(yīng)，也可對(duì)抗原抗體反響進(jìn)展定量的檢測(cè)利用帶有標(biāo)記熒光素、同位素、膠體金或酶的抗體抗原檢測(cè)抗原抗體反響是目前應(yīng)用最廣泛、最靈敏的方法，使用放射性同位素標(biāo)記法可使檢測(cè)的靈敏度到達(dá)pg 級(jí)。由于帶標(biāo)記的抗體能準(zhǔn)確而可靠地反映出抗原的位置和數(shù)量，且利用二抗可對(duì)信號(hào)進(jìn)展放大，因此該方法可用于抗原定性、定量或定位檢測(cè)。以下是幾種常用的免疫學(xué)技術(shù)：1免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)是利用熒光素標(biāo)記的抗體或抗原檢測(cè)組織、細(xì)胞或血清中的相應(yīng)抗原或抗體的方法。由

6、于熒光抗體具有平安、靈敏的特點(diǎn)，因此已廣泛應(yīng)用在免疫熒光檢測(cè)和流式細(xì)胞計(jì)數(shù)領(lǐng)域。根據(jù)熒光素標(biāo)記的方式不同，可分為直標(biāo)熒光抗體和間標(biāo)熒光抗體。間標(biāo)熒光抗體中一抗并不直接連接熒光素，而是先將一抗結(jié)合到蛋白，然后帶有熒光素的二抗再結(jié)合至一抗。通過(guò)二抗的結(jié)合，能將信號(hào)進(jìn)展放大，因此能在一定程度上提高檢測(cè)的靈敏度，但是隨之帶來(lái)的高背景也降低了檢測(cè)的特異性。近年來(lái)，隨著熒光素和熒光檢測(cè)技術(shù)的不斷進(jìn)步，熒光檢測(cè)的靈敏度已經(jīng)接近同位素檢測(cè)的水平，直接標(biāo)記的熒光抗體逐漸取代間接標(biāo)記抗體。這些標(biāo)記了熒光素的抗體直接結(jié)合至抗原，大大提高了檢測(cè)的特異性，使檢測(cè)的結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。熒光檢測(cè)技術(shù)的開(kāi)展，使得免疫熒光技術(shù)在

7、傳染病診斷上有廣泛的用途，如在細(xì)菌、病毒、螺旋體感染的疾病，檢查IgM抗體，做為近期接觸抗原的標(biāo)志。利用單克隆熒光直接標(biāo)記抗體鑒定淋巴細(xì)胞的亞類。通過(guò)流式細(xì)胞儀，針對(duì)細(xì)胞外表不同抗原，可以同時(shí)使用多種不同的熒光抗體，對(duì)同一細(xì)胞進(jìn)展多標(biāo)記染色。2放射免疫檢測(cè)專業(yè)資料整理WORD格式放射免疫檢測(cè)技術(shù)是目前靈敏度最高的檢測(cè)技術(shù)，利用放射性同素標(biāo)記抗原或抗體，與相應(yīng)抗體或抗原結(jié)合后，通過(guò)測(cè)定抗原抗體結(jié)合物的放射性檢測(cè)結(jié)果。放射性同位素具有pg 級(jí)的靈敏度，且利用反復(fù)曝光的方法可對(duì)痕量物質(zhì)進(jìn)展定量檢測(cè)。但放射性同位素對(duì)人體的損傷也限制了該方法的使用。733酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) ELISA 酶聯(lián)免疫檢測(cè)是目前

8、應(yīng)用最廣泛的免疫檢測(cè)方法。該方法是將二抗標(biāo)記上酶，抗原抗體反響的特異性與酶催化底物的作用結(jié)合起來(lái)，根據(jù)酶作用底物后的顯色顏色變化來(lái)判斷試驗(yàn)結(jié)果，其敏感度可達(dá)ng 水平。常見(jiàn)用于標(biāo)記的酶有辣根過(guò)氧化物酶 (HRP) 、堿性磷酸酶 AP 等。由于酶聯(lián)免疫法無(wú)需特殊的儀器，檢測(cè)簡(jiǎn)單，因此被廣泛應(yīng)用于疾病檢測(cè)。常用的方法有間接法、夾心法以及BAS ELISA 。間接法是先將待測(cè)的蛋白抱被在孔板內(nèi)，然后依次參加一抗、標(biāo)記了酶的二抗和底物顯色，通過(guò)儀器例如酶標(biāo)儀定量檢測(cè)抗原。這種方法操作簡(jiǎn)單但由于高背景而特異性較差。目前已逐漸被夾心法取代。夾心法利用二種一抗對(duì)目標(biāo)抗原進(jìn)展捕獲和固定，在確保靈敏度的同時(shí)大大提高了反響的特異性。近年來(lái)，抗原的定量檢測(cè)技術(shù)也不斷推陳出新。近年來(lái)，在夾心法 ELISA 的根底上，開(kāi)發(fā)了多抗原檢測(cè)試劑盒，能同時(shí)檢測(cè)微量液相樣本中多個(gè)抗原含量。這項(xiàng)技術(shù)的應(yīng)用大大縮短了診斷的時(shí)間，提高診斷的可靠性和及時(shí)