純化水、注射用水微生物檢驗方法確認

1、純化水、注射用水微生物檢驗方法學驗證方案(VB文件編號：VP-JY-0026-01項目名稱：純化水、注射用水微生物檢驗方法學驗證項目部門職務(wù)簽名日期起草人質(zhì)量管理部化驗員年 月日審核人質(zhì)量管理部中心化驗室主任年 月日審核人質(zhì)量管理部質(zhì)量管理部經(jīng)理年 月日批準人驗證領(lǐng)導(dǎo)小組質(zhì)量副總經(jīng)理年 月日目錄1 引言 41.1 驗證實施進度計劃 41.2 概述 42 驗證所需設(shè)備清單 43 驗證人員、職責 43.1 項目驗證小組成員 43.2 驗證變更 43.3 驗證培訓(xùn) 44 驗證目的 55 驗證內(nèi)容 55.1 培養(yǎng)基配制 55.2 菌種 55.3 菌液的制備 55.4 薄膜過濾法檢測微生物 65.5 結(jié)

2、果評價 76 驗證過程中的偏差及處理 77 驗證結(jié)果的評定與結(jié)論 78 附件 81 引言1.1 驗證實施進度計劃實施時間計劃安排在年 月 日至年 月 日。1.2 概述通過驗證以確認R2As用于薄膜過濾法檢驗純化水、注射用水微生物根據(jù)培養(yǎng)基及驗證菌的特性制訂檢驗方法和檢驗條件，按制定的方法進行試驗,根據(jù)驗證結(jié)果判斷是否符合驗證標準。若符合，則R2A可用于薄膜過濾法檢驗純化水、注射用水微生物。2驗證所需設(shè)備清單2.1. XG1.D脈動真空滅菌器2.2. MJ-250-I 型霉菌培養(yǎng)箱（2025C）2.3. LPH-250生化培養(yǎng)箱（3035C）2.4. WG11-230BE電熱鼓風干燥箱2.5.

3、微波爐3驗證人員、變更及培訓(xùn)3.1 項目驗證小組成員項目驗證小組由中心化驗室微生物檢驗員、質(zhì)檢員、化驗室主任、質(zhì)量管理部經(jīng)理等組成，由化驗室主任任項目驗證組組長，驗證小組成員見附表1,具體分工、職責如下：人員職務(wù)職責QC室主任負責組織驗證小組成員起草驗證方案，組織驗證工作的實施，并根據(jù)驗證結(jié)果起草驗證報告QA人員負責驗證實施過程監(jiān)督。微生物檢驗員負責驗證的實施，對樣品進行檢驗。3.2 驗證變更驗證過程應(yīng)嚴格按照本方案規(guī)定的內(nèi)容進行， 若因特殊原因確需變更時， 應(yīng)填寫驗證方案變更申請及批準書（附件2）,報驗證領(lǐng)導(dǎo)小組批準后執(zhí)行。 3.3 驗證培訓(xùn)驗證過程中，確認方案以及驗證中應(yīng)該掌握的技能應(yīng)該進

4、行培訓(xùn)，培訓(xùn)應(yīng)遵循員工培訓(xùn)管理規(guī)程。培訓(xùn)情況記錄于附件3。4驗證目的與適用范圍4.1 驗證目的根據(jù)中國藥典2015版四部1105項下微生物檢查法的規(guī)定，驗證純化 水、注射用水微生物檢查方法的適用性，即確認檢品、所設(shè)定的檢驗條件及檢 驗程序?qū)┰嚻分锌赡艽嬖诘母黝愇⑸餆o抑制作用，其方法可行有效。4.2 適用范圍適用于純化水、注射用水微生物檢驗方法學驗證。5 驗證內(nèi)容培養(yǎng)基在使用前應(yīng)進行適用性的檢查，合格后方可進行，通過R2A瓊脂培養(yǎng)基上的菌落與營養(yǎng)瓊脂對照培養(yǎng)基和TSA對照培養(yǎng)基上的菌落比較，以確認所采用方法的可行性。5.1 培養(yǎng)基的制備取適用性檢查合格的R2A瓊脂培養(yǎng)基按照15.2g加入10

5、00ml純化水的 比例進行配制， 加熱使其完全溶解，分裝于的錐形瓶中 , 裝量不得超過容器的三分之二，蓋塞，用無菌布包扎好后進行濕熱滅菌121 C、15min,滅菌后PH值7.2 0.2。冷卻后放入28 c冰箱備用。5.2 菌種銅綠假單胞菌CMC（C B） 10104 金黃色葡萄球菌CMC（CB） 26 003 枯草芽孢桿菌CMC（CB） 63 501 白色念珠菌CMC（C F） 98001黑曲霉CMC（C F） 98003使用以上各種菌株傳代次數(shù)均不得超過5 代5.3 菌液的制備：接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆陳液體培養(yǎng)基上，3035c培養(yǎng)1824小時；

6、接種白色念珠菌的新鮮培 養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基上，2025c培養(yǎng)23天，上述培養(yǎng)物用0.9% 無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)10100CFU（菌落形成單位）的菌懸液。接 種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上，2025c培養(yǎng)57 天,加入35ml含0.05% （v/v ）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將抱 子洗脫。 然后， 采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)， 用含 0.05（v/v ） 聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉?液制成每1ml含抱子數(shù)10100CFU的抱子 懸液。菌懸液在室溫下放置應(yīng)在2小時內(nèi)使用，若保存在28c可在24小時內(nèi) 使用。5.4 菌液的計數(shù)：

7、（每種菌液每種培養(yǎng)基接種 2 個平皿）5.2.2.1 分別接種銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌至培養(yǎng)皿，每皿接種1ml菌液（10100cfu）,傾注TSA對照培養(yǎng)基，凝固后于 3035C 倒置培養(yǎng)不超過5天。營養(yǎng)瓊脂對照培養(yǎng)基、R2A瓊脂培養(yǎng)基方法同TSA對照 培養(yǎng)基。5.2.2.2 分別接種白色念珠菌2皿，每皿接種1ml菌液（10100cfu ）,傾注胰 酪大豆陳瓊脂對照培養(yǎng)基，凝固后于3035c倒置培養(yǎng)不超過5天。5.2.2.3 用含 0.05%（ ml/ml ）聚山梨酯80 的 0.9%無菌氯化鈉溶液將黑曲霉制成每1ml含抱子數(shù)10100cfu的抱子懸液。取1ml菌液至胰酪大豆

8、陳瓊脂對照 培養(yǎng)基3035c培養(yǎng)不超過5天。5.4 薄膜過濾法檢測微生物5.4.1 制備平皿取在28c冰箱中保存的培養(yǎng)基，微波爐溶化后按標準操作程序傳至微 生物限度檢查室，待培養(yǎng)基冷卻至 50 c左右澆注平皿（每皿 30 2ml,注意培 養(yǎng)皿不得破裂，裝量應(yīng)相同，盡量避免形成氣泡） 。5.4.2 水樣的檢測取純化水 5ml 加入滅菌純化水50ml 薄膜過濾， 按照標準操作規(guī)程進行水樣微生物的檢測后，取膜置于 R2A脂培養(yǎng)基，在3035。叵溫培養(yǎng)箱進行培 養(yǎng) 5 天。取注射用水100ml 薄膜過濾，按照標準操作規(guī)程進行水樣微生物的檢測后，取膜置于R2A瓊脂培養(yǎng)基，在3035。叵溫培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)5

9、天。5.4.3 對照樣品另取含菌數(shù)10100CFU勺銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌、白色念珠菌、黑曲霉1ml 加入濾杯內(nèi)， 分別取純化水、注射用水同上操作過膜后，取膜置于R2A瓊脂培養(yǎng)基，在3035。叵溫培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)5天。TSA 對照培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂對照培養(yǎng)基上方法同R2A瓊脂培養(yǎng)基。5.4.4 陰性對照另取滅菌純化水50ml薄膜過濾后置于R2A瓊脂培養(yǎng)基、TSAM照培養(yǎng)基 和營養(yǎng)瓊脂對照培養(yǎng)基上，作為陰性對照。在 3035。叵溫培養(yǎng)多!進行培養(yǎng)5 天。5.4.5 空白對照另取滅菌的濾膜置于R2A瓊脂培養(yǎng)基、TSA對照培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂對照 培養(yǎng)基上，作為空白對照。在 上，作為空白

10、對照。在3035。叵溫培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)5天。5.5 結(jié)果評價逐日觀察培養(yǎng)皿微生物生長情況，被檢培養(yǎng)皿與營養(yǎng)瓊脂和TSA對照培養(yǎng)皿比較菌落形態(tài)大小應(yīng)一致，菌落平均數(shù)的比值在0.5-2 （50-200 ）范圍內(nèi)，則可確定R2A瓊脂培養(yǎng)基適用于薄膜過濾法進行制藥用水微生物檢測。 6 驗證過程中的偏差及處理在執(zhí)行驗證過程中，檢測人員需要及時記錄出現(xiàn)的任何偏差，并按照偏差處理管理規(guī)程進行處理。7驗證結(jié)果的評定與結(jié)論驗證各項驗證工作結(jié)束后，驗證項目小組負責收集、匯總各項驗證、試驗 結(jié)果記錄，依據(jù)各項驗證結(jié)果起草驗證報告，對驗證結(jié)果進行評定與結(jié)論，報 驗證領(lǐng)導(dǎo)小組。評定與結(jié)論至少包括以下內(nèi)容：1）驗證項目是否

11、有遺漏？2）驗證實施過程中對驗證方案有無修改？修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過批 準？3）驗證記錄是否完整？4）驗證結(jié)果是否符合標準要求？5）如有異常情況、偏差處理是否合理？是否需要進一步補充驗證？6）驗證項目是否通過驗證，可否投入使用？7）日常監(jiān)測（使用）的建議。8）再驗證周期。8附件附件1驗證小組成員名單驗證方案名稱驗證方案編號姓名所在部門崗位及驗證中負責工作附件2驗證方案修改申請及批準書驗證方案名稱驗證方案編號修改內(nèi)容修改原因及依據(jù)修改后方案審批起草人：日期：項目驗證組組長：日期：驗證領(lǐng)導(dǎo)小組組長：日期：附件3驗證培訓(xùn)記錄（一）培訓(xùn)時間培訓(xùn)對象培訓(xùn)講師培訓(xùn)內(nèi)容：被培訓(xùn)人員簽名序號姓名考核結(jié)果考

12、核人合格口不合格合格口不合格合格口不合格合格口不合格合格口不合格合格口不合格合格口不合格合格口不合格合格口不合格合格口不合格合格口不合格附件4驗證所需文件序號文件名稱編R存放地點結(jié)論：檢查人:年月日復(fù)核人：年月日附件5純化水菌落回收率記錄菌種_ R2A瓊脂/口加小（5ml 供 試品 +50ml 滅 菌水薄 膜過濾）R2A瓊 脂培養(yǎng) 基（1ml 菌液 +50ml 火菌水 薄膜過 濾）營養(yǎng)瓊 脂對照/口加?。?ml 供 試品+50ml 滅 菌水薄 膜過濾）營養(yǎng)瓊脂 對照培養(yǎng) 基（1ml 菌液 +50ml 滅 菌水薄膜 過濾）TSA對照/口加小（5ml 供 試品 +50ml 滅 菌水薄 膜過濾）TS

13、A對 照培培 養(yǎng)（1ml 菌液 +50ml 火菌水 薄膜過 濾）R2A 瓊脂 培養(yǎng) 基 （陰 性對 昭） 八、）瓊脂 對照 培養(yǎng) 基（陰 性對 昭）TSA 對照 培養(yǎng) 基（陰 性對 昭） 八、）回收率與TSA 對照 培養(yǎng) 基比較亦 養(yǎng)瓊 脂對 照培 加丕 比較枯草芽抱 桿菌銅綠假單 胞菌金黃色葡 萄球菌白色念珠菌黑曲霉菌與對照培養(yǎng) 形態(tài)是否T走比較，菌落大小、 文標準規(guī)定與對照培養(yǎng)基比較，菌數(shù)比值應(yīng)在0.5-2 （50%-200 %）范圍內(nèi)。結(jié)果確認：檢驗人/日期：復(fù)核人/日期：附件6注射用水菌落回收率記錄培關(guān)其菌種R2A瓊 脂培養(yǎng) 基（100m l供試 品薄膜 過濾）R2A瓊脂/口加?。?m

14、l 菌 +100ml 供試品 薄膜過 濾）營養(yǎng)瓊 脂對照/口加小（100ml 供試品 薄膜過 濾）營養(yǎng)瓊脂 對照培養(yǎng) 基（1ml 菌液+100ml 供 試品薄膜 過濾）TSA對 照培養(yǎng) 基（100m l供試 品薄膜 過濾）TSA寸照 培培養(yǎng)（1ml 菌 液+100ml 供試品 薄膜過 濾）R2A 瓊脂 培養(yǎng) 基（空 白對 昭）營養(yǎng) 瓊脂 對照 培養(yǎng) 基（空 白對 昭） 八、）TSA 對照 培養(yǎng) 基（空 白對 昭） 八、）回收率與TSA 對照 培養(yǎng)基比 較不 養(yǎng)瓊 脂對 照培 加丕 比較枯草芽 抱桿菌銅綠假 單胞菌金原/色 葡萄球 菌白色念 珠菌黑曲霉菌與對照培養(yǎng)基比 較，菌落大小、形 態(tài)是否一致標準規(guī)士7E與對照培養(yǎng)基比較，菌數(shù)比值應(yīng)在0.5-2 (50%-200 %)范圍內(nèi)。結(jié)果確 認檢驗人/日期：復(fù)核人/日期：附件7驗證過程的偏差及處理驗證方某名稱/編號偏差描述處理力式偏差報告人報告人：日期：評價驗證項目組長：日期：批準