生物材料檢驗(yàn)復(fù)習(xí)資料

1、生物材料檢驗(yàn)：分析檢驗(yàn)生物材料中化學(xué)物質(zhì)及其代謝物得含量或因化學(xué)物質(zhì)引起得得生物效應(yīng)指標(biāo)變化。生物材料：就是人體體液（如血液）、排泄物（如呼吸氣、尿液 卜毛發(fā)，指甲以及組織臟器等得總稱。生物標(biāo)志物：指生物系統(tǒng)接觸外源性物質(zhì)后出現(xiàn)得一種變化。分為三類：接觸性生物標(biāo)志物、效應(yīng)性生物標(biāo)志物，敏感性生物標(biāo)志物。接觸性標(biāo)志物：生物體內(nèi)可分析測(cè)定得有害物質(zhì)，代謝產(chǎn)物，以及她們同生物體內(nèi)分子或細(xì)胞相互作用形成得中間物效應(yīng)性標(biāo)志物：那些同健康危害或疾病有關(guān)得可測(cè)定性得生化，生理行為以及其她生物學(xué)變化敏感性標(biāo)志物：生物體內(nèi)先天固有或后天獲得得對(duì)外界有害因素所引起得有害效應(yīng)得反應(yīng)能力生物車t化：外源性化合物在體內(nèi)

2、經(jīng)過一系列化學(xué)變化并形成其衍生物以及分解產(chǎn)物得過程生物接觸限值（BEL）:大體相當(dāng)于健康人吸入接觸最高允許濃度得毒物時(shí)生物材料中被測(cè)物得水平。尿液可分為全日尿，晨尿，定時(shí)尿與隨時(shí)尿。生物半減期：指進(jìn)入生物體內(nèi)得化學(xué)物質(zhì)得里量通過各種途徑消除一半所需要得時(shí)間，又代謝半減期。一、檢驗(yàn)方法彳#一般要求：1、方法得一般要求1）靈敏度選擇符合生物監(jiān)測(cè)得基本要求國情易推行、推廣2.選擇與建立生物檢測(cè)方法必須考慮得因素、方法研制準(zhǔn)則得基本內(nèi)容1.取樣、運(yùn)輸、保存得原則1）取樣：（1）容器工具材質(zhì)不干擾測(cè)定（3）取樣時(shí)間根據(jù)半減期判斷決定2）操作簡(jiǎn)便3）試劑易得、價(jià)廉 4）效率高5）符合2）保存時(shí)間：一天，三

3、天，一周，兩周一般只要求a溶解性，穩(wěn)定性 含量水平高g/L水平染尿液=50ml 靜脈血=5ml末梢血500ul低 ug/L3）運(yùn)輸過程：保證分析物穩(wěn)定，必要時(shí)要冷藏與冷凍運(yùn)輸4）防腐劑（尿）與抗凝劑（血）2、樣品預(yù)處理原則1）尿液濃度按比重校正尿標(biāo)準(zhǔn)比重1、020,1、030及1、010得尿液應(yīng)棄去2）樣品預(yù)處理得目得就是消除干擾（1）測(cè)定無機(jī)物時(shí)用稀釋液稀釋后測(cè)定混合酸消化（2）測(cè)定有機(jī)物成分：先水解，再分離（3）回收率=75%3、制定分析方法得程序1）分析條件選擇、優(yōu)化2）確定檢出限（1）影響檢出限得因素：試劑得純度，儀器得工作狀態(tài)，電源穩(wěn)定性光源得溫度變化、污染等不可控制得因素。（2）檢

4、出限得確定一般用統(tǒng)計(jì)法，一般用空白值得3倍標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算；色譜法用3倍噪音水平，檢出限應(yīng)小于0、3倍生物接觸限值。（3）檢出限得表示方法濃度或絕對(duì)量表示，用濃度表示時(shí)要說明方法取樣體積。3）精密度：同一個(gè)人用同一方法重復(fù)測(cè)定同一均勻樣品測(cè)定結(jié)果得符合程度通常在線性范圍內(nèi)取高、中、低三個(gè)濃度水平分另1J重復(fù)測(cè)定35次。用RSD表示或用變異系數(shù)表示復(fù)雜方法RSD=20簡(jiǎn)單方法=10、4）準(zhǔn)確度（1）分析高低濃度水平與國家級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)各一組，測(cè)定值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)值得不確定范圍內(nèi)。（2）用接觸表樣品得加標(biāo)回收率表示回收率=75%若105%表明存在明顯得系統(tǒng)誤差。（3）用標(biāo)準(zhǔn)方法或權(quán)威方法比較：兩個(gè)方法均值相對(duì)誤差

5、應(yīng)小于10% t檢驗(yàn) 在確定一個(gè)置信水平條件，兩方法測(cè)定無明顯差異5）干擾試驗(yàn)：如果有干擾，要找出消除干擾得方法6）樣品得穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：時(shí)間：當(dāng)天,3天,1周,2周溫度:室溫,普通冰箱冷藏（4C）,冷凍保存（-8C）,低溫冰箱（-20 C）4、方法得驗(yàn)證1）新方法得驗(yàn)證：必須就是另一單位研制方提供方法所有技術(shù)材料驗(yàn)證內(nèi)容：四項(xiàng) 線性范圍精密度，準(zhǔn)確度，樣品得穩(wěn)定性。2）引進(jìn)國外標(biāo)準(zhǔn)方法或權(quán)威方法，引進(jìn)方就就是驗(yàn)證方。5、現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用首先要觀察檢出率觀察檢測(cè)結(jié)果與環(huán)境污染得符合程度同時(shí)取非接觸樣品進(jìn)行對(duì)照三、確定生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)得依據(jù)（一）化學(xué)物質(zhì)在體內(nèi)得動(dòng)力學(xué)過程1、吸收1）呼吸道吸收氣體物質(zhì)通過肺泡壁

6、及周圍毛細(xì)血管吸收固體物質(zhì)，溶解時(shí)吸收得前提2）皮膚 有些有機(jī)物很容易被皮膚吸收F=C/15 *（0、038-0、153p）exp（-0、016MN） F 皮膚吸收量mg/cm 2/hC化學(xué)物質(zhì)在水中得飽與度mg/ml P辛醇-水得分配系數(shù)MN相對(duì)分子質(zhì)量 許多農(nóng)藥易被皮膚吸收如有機(jī)磷2 、體內(nèi)分壓與貯存1） 起始主要分布于血液中最終分布取決親與力 2） 血液側(cè)得量就是反映新近吸收量或機(jī)體組織得水平3） 血液中毒物或其她被測(cè)物并非均勻分布4） 一般脂溶性溶劑及鹵代烴會(huì)分布在脂肪組織中 , 乳汁就是檢測(cè)有機(jī)氯農(nóng)藥最好得樣品 5） 體內(nèi)儲(chǔ)存毒物得形式大多為結(jié)合狀態(tài), 測(cè)定尿液中得代謝物需要先水解3

7、 、 生物轉(zhuǎn)化 1） 概念 : 外源性化合物在體內(nèi)經(jīng)過一系列化學(xué)變化并形成其衍生物以及分解產(chǎn)物得過程。2） 有關(guān)生物轉(zhuǎn)化得討論就是毒物發(fā)生質(zhì)得變化 生物轉(zhuǎn)化得數(shù)量關(guān)系 , 個(gè)體差異很大就是一種動(dòng)態(tài)過程 , 對(duì)時(shí)間得了解就是確定采樣時(shí)間得基礎(chǔ), 生物半衰期。4、 排出 易揮發(fā)性有機(jī)溶劑從呼吸氣中排出較多。 長期蓄積得有機(jī)氯農(nóng)藥可從乳汁中排出及耵聹（耳屎 ） 中排出 ,易代謝得有機(jī)毒物大多以結(jié)合態(tài)從尿中排出。（二）、個(gè)體差異1、毒物在生物體內(nèi)得動(dòng)力學(xué)過程有種屬家族與個(gè)體得差異,其中生物轉(zhuǎn)化過程變異極大;2、生物監(jiān)測(cè)得個(gè)體差異可用監(jiān)測(cè)結(jié)果得變異系數(shù)表示;3、個(gè)體差異降低了生物監(jiān)測(cè)得精確性,卻可幫助檢

8、出特殊敏感人群或耐受人群。（三） 、接觸水平（劑量）效應(yīng)（反應(yīng)）關(guān)系1、 就是確定一次生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)得關(guān)鍵依據(jù);2、 生物監(jiān)測(cè)結(jié)果與空氣毒物濃度之間得相關(guān)資料,可作為選擇生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)得替代依據(jù)。四、檢驗(yàn)指標(biāo)得選擇與分類（一）、選擇得基本要求1 、特異性好;2、具有良好得劑量效應(yīng)關(guān)系;3、穩(wěn)定性好;4、有準(zhǔn)確可靠得檢驗(yàn)方法。（二）、生物材料檢驗(yàn)指標(biāo)得分類1、化學(xué)物質(zhì)原形：化學(xué)物質(zhì)在生物體內(nèi)不進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)化速度很慢；缺乏毒物代謝動(dòng)力學(xué)資料：代謝產(chǎn)物在體內(nèi)沒有特異性2、化學(xué)物質(zhì)代謝產(chǎn)物 3 、生物效應(yīng)指標(biāo)。五、樣品得采集與保存一 ）、生物材料樣品得選擇（一 ）、種類及特點(diǎn)尿液 : 最常用得1）特點(diǎn)

9、 :采集方便、無損傷性、采集量大2）適用性 :水溶性化學(xué)物質(zhì)、代謝產(chǎn)物、金屬等3）尿樣得種類:（1）全日尿 （24h 尿）收集24h 內(nèi)得全部尿液,通常只用于住院病人 （2）晨尿 起床后、早餐前第一次排出得尿 （3）定時(shí)尿 : 生物半減期 班前尿 :第 2 個(gè)工作日上班前以內(nèi)排出得尿 班中尿 :上班 23h 以后排出得尿 班末尿 : 下班前 1h 內(nèi)排得尿 班后尿: 下班以后1h 以內(nèi)排出得尿周末尿 :連續(xù)工作第五個(gè)工作日得班末尿。血液 1）特點(diǎn) :成分較恒定個(gè)體差異小 取樣污染機(jī)會(huì)小 損傷性采集樣品 血樣貯存條件要求較高 ;2）種類 :血清 :不抗凝離心分離出得上層清夜血漿:加抗凝劑離心分離

10、得上層清夜全血 紅細(xì)胞。呼出氣1）特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn):操作方便、干擾物少 ,非損傷性 缺點(diǎn) :a、 被測(cè)物得含量比較低b、 肺泡氣中水分對(duì)某些測(cè)定有影響c、肺部“死腔”中環(huán)境空氣對(duì)肺泡氣稀釋不穩(wěn)定，影響測(cè)定結(jié)果得解釋；2）適用性 監(jiān)測(cè)僅限于揮發(fā)性物質(zhì)主要用于測(cè)定化學(xué)物質(zhì)原形呼出氣監(jiān)測(cè)結(jié)果能反映采樣期間車間空氣得平均濃度;3）呼出氣得分類混合呼出氣、終末呼出氣（肺泡氣） 第一階段呼出得就是空氣,第二階段混合呼出氣,第三階段肺泡氣。（二）、生物材料樣品得選擇1、 同一毒物或代謝產(chǎn)物在不同生物材料其生物學(xué)意義不一樣,血鎘代表近期接觸水平、尿鎘反映長期接觸得濃度;2、 選擇生物材料樣品種類得要求:被測(cè)物有特異性

11、與外劑量有相關(guān)性有足夠得穩(wěn)定測(cè)定結(jié)果重復(fù)性好個(gè)體差異在允許范圍內(nèi) 采樣能被受試者接受 ;3、尿、血、呼出氣就是目前較理想得生物材料樣品,美國 BEI55 個(gè)尿58%、血27%、呼出氣 14%。二 ）、樣品采集、運(yùn)輸及保存 （一）、一般要求1、采樣時(shí)間 :依據(jù)生物半減期 ; 2、采樣環(huán)境:無污染;3、采樣容器：測(cè)無機(jī)成分、塑料、高壓聚合玻璃：硬質(zhì)、石英不銹鋼含 Cr、Ni、Mn（不能用于測(cè)此三種元素）使用前要求用酸液（稀HNO3）浸泡24h洗滌;測(cè)有機(jī)物玻璃、塑料（不能用橡膠與添加染料得橡膠）冷凍保存不能用玻璃儀器 ;4、樣品得運(yùn)輸與保存;5、采樣記錄編號(hào)檢驗(yàn)項(xiàng)目受試者信息采樣信息：時(shí)間、地點(diǎn)、

12、環(huán)境、過程。采樣人及記錄人信息（二）樣品采集與保存1 、尿樣1）尿樣得校正：（1）比重校正法 標(biāo)準(zhǔn)比重1、020 校正公式 C校正=（1、020-1、000）/（d-1 、000）*c=kc d 得使用范圍1、0101、030 （2）肌酊校正法、尿中被測(cè)物濃度 （mg/g肌酊尸實(shí)測(cè)濃度（mg/L）/肌酊濃度（g/L）,肌酊含 量2） 采樣、 采集尿液不少于 50ml, 用頂空分析法測(cè)定揮發(fā)性物質(zhì)時(shí)、收集尿樣得容器要充滿尿樣并知道體積,記錄 2 人上次排空膀胱得時(shí)間及采集樣得終點(diǎn)時(shí)間。3） 儲(chǔ)存、貯存一般 2 周、 反腐 加酸、氯仿、冷藏 測(cè)尿中汞或揮發(fā)性有機(jī)物要盡快測(cè)定 要保存 5 天以上得

13、, 最好冷凍2、血樣1）采集 （1） 、全血 ; 要抗凝 （2） 、血清 （血漿 ）或紅細(xì)胞2） 注意事項(xiàng) 采集過程避免污染、毛細(xì)管血 防止溶血、金屬針頭（ 取下 ） 再擠出針管時(shí)不能太快取末梢血要避免擠壓采集部位 , 自然流出棄去第一滴血有三種情況不宜采集毛細(xì)管血a 血液量超過5ml 、 b 采集環(huán)境有外源性化學(xué)物質(zhì)存在 c 測(cè)定揮發(fā)性成分3） 血樣得運(yùn)輸與保存避免振動(dòng)與溫度得改變血樣冷凍肯定溶血采集血清或血漿時(shí), 應(yīng)分離再保存臨時(shí)存放 4 過夜 , 長時(shí)間保存要冷凍測(cè)酶活性要采集后盡快分析3、 呼出氣 、1） 采集方法 ： 先深呼吸 23 次,再恢復(fù)正常呼吸時(shí)采集呼出氣采集肺泡氣只收集末端

14、呼出氣2） 注意事項(xiàng) ： 受檢者必須時(shí)肺功能正常者要選擇對(duì)被測(cè)物吸附小得容器 要在正常呼吸狀態(tài)下收集樣品呼出過程不能有阻力 采樣得時(shí)機(jī)要依被測(cè)物代謝速度決定三、生物材料樣品得預(yù)處理原則（一） 無機(jī)物分析得樣品處理1、稀釋法、1）、常用得稀釋劑；1）稀硝酸液（尿）,2）TntonX 100表面活性劑3）基體改進(jìn)劑溶液2）、常用機(jī)體改進(jìn)劑：硝酸鹽（NH+ Ni2+ Ca2+）磷酸鹽（Na+ NH+）3） 、應(yīng)用實(shí)例： 磷酸銨 , 硝酸銨與 TritonX-100 可改善血清中銅鋅得測(cè)定磷酸氫胺 , 硝酸銨測(cè)定血鉛可提高灰化溫度至1000 c硝酸饃可使測(cè)定神與Se得灰化溫度到1000 c磷酸鏤可使測(cè)

15、定Cd得灰化溫度增至800 c2、酸提取法1 、硝酸提取,測(cè)定血鉛、6mol/L 硝酸離心取上清液。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)被測(cè)成分得含量就是已知得 2,鹽酸提取 3, 三氯乙酸（固體） 。鐵 （有效 ）提取 +2 價(jià)鐵3 、 礦物化法 （無機(jī)法處理）（二）有機(jī)物分析得樣品處理（p11）第五節(jié) 鉛一、接觸途徑： 鉛礦 ,開采,冶煉二、代謝物與生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)（一）動(dòng)力學(xué)過程、1 、吸收 1）呼吸道 ：鉛塵煙蒸汽2）消化道 ：鉛塵 3）皮膚,無機(jī)物不吸收有機(jī)鉛化合物可被吸收（四乙基鉛 ）2、分析 ：起始分布在血中有95%與紅細(xì)胞結(jié)合最終主要以磷酸鹽沉積于血管中 ,其次就是肝腎腦等3、生物效應(yīng)：抑制血紅蛋白得合成1）

16、抑制5氨基乙酰丙酸脫水酶，導(dǎo)致血尿中8 -ALA增加2）抑制糞川啉元氧化酶3）抑制亞鐵螯合酶4、排除 ：吸收得鉛主要經(jīng)尿排出 ,尿鉛生物半減期較長。（二）鉛接觸得生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)1、血鉛： 直接反映近期接觸鉛得情況2、尿鉛：反應(yīng)機(jī)體中鉛得負(fù)荷量,就是鉛中毒得輔助診斷指標(biāo)3、生物效應(yīng)指標(biāo)：1）尿中（T -ALA2）血中鉛原嚇咻三、樣品得采集與保存 用于尿鉛血鉛得測(cè)定1、 尿樣、 采樣時(shí)間得限定 隨即采集一次尿樣按 1% 比例加HNO 3,4可保存兩周。2、 血樣、1）末梢血40 dL2）靜脈血四、尿鉛與血鉛得測(cè)定石墨爐原子吸收法（一）尿鉛得測(cè)定1、原理：尿樣用基體改進(jìn)劑液稀釋后直接進(jìn)行測(cè)定，基體改進(jìn)

17、劑液 NH4H2PO4+抗壞血酸2、石墨爐升溫程序一一適用涂鋁石墨管干燥70c ,40S灰化450c ,30S原子化2000c 5s（停氣）清除2200 3S3、石墨管涂鋁處理，向石墨管中加20 dL鋁酸鏤液，石墨爐升溫程序 并重復(fù)10次升溫，石墨管內(nèi)壁呈灰白色4、標(biāo)準(zhǔn)系列液配置鉛標(biāo)準(zhǔn)系列液基體改進(jìn)劑液（混合液 ） 正常人混合尿 ： 沒有接觸鉛得健康人得尿,取 2 份 ,一份比重小于1、 020,一份比重大于 1、 020,混合成比重為1、 020 得尿液5、說明 ： 1）基體改進(jìn)劑液得作用 ：本法選用4%磷酸二氫銨-6%抗壞血酸作為基體改進(jìn)劑,能有效地克服基體干擾2）背景吸收得扣除背景校正器

18、扣除背景吸收,氘燈背景校正石墨管涂鉬可降低背景吸收（二）血鉛得測(cè)定1、樣品處理：全血用TritonX-100液稀釋，稀HNO3酸化，進(jìn)樣測(cè)定2、石墨爐升溫程序： 干燥：75C-100 c ,10S（斜坡升溫）灰化 450 C -500 C 30S保才I 10S（斜坡）原子化2400 c7S 清除2500 c 3S3、標(biāo)準(zhǔn)系列液： 鉛標(biāo)準(zhǔn)液TritonX-100 液正常人血五、生化指標(biāo)得測(cè)定（一）尿中b ALA 得測(cè)定1、原理：b - ALA可與乙酰乙酸乙酯縮合生成口比咯化合物用乙酸乙酯萃取口比咯化合物顯色，加對(duì)一二甲氨基苯甲酸生成紅色化合物入max=554nm2 、操作要點(diǎn) ： 兩份經(jīng)稀釋尿樣

19、加 PH=6 緩沖液樣品管加乙酰乙酸乙酯尿樣空白管補(bǔ)充緩沖液各沸水浴10min 各加4mL乙酸乙酯萃取離心、靜置、分層取清夜顯色10min后測(cè)定（二）全血中游離原卟啉得測(cè)定1 、原理 ： 用乙酸-乙酸乙酯破壞紅細(xì)胞鹽酸萃取原卟啉,測(cè)定熒光強(qiáng)度2、樣品處理：1）樣品：20L血+0、1mL生理鹽水2）加硅藻土懸浮液，乙酸乙酯一乙酸液、振搖、破壞紅細(xì)胞3）離心 ,取上清液加鹽酸萃取第三節(jié)、鎘一、接觸途徑：鋅礦得開采及冶煉工業(yè)上含鎘材料得生產(chǎn)農(nóng)業(yè)上也有鎘化合物得應(yīng)用二、代謝與生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)（一）代謝1、吸收、呼吸道與消化道2、生物效應(yīng)急性中毒靶器官：肺 慢性中毒靶器官 ：肺、腎、骨3、排出少量由尿排出

20、,屬于蓄積性元素（二）生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)1、尿鎘：只反映長期接觸情況2 血鎘 ：只反映近期接觸情況三、鎘接觸指標(biāo)得測(cè)定石墨爐原子吸收法（一）尿鎘得測(cè)定1 、原理 ：用磷乙氫二銨液稀釋,直接標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量2、石墨爐升溫順序1）干燥0700c30S（斜坡）2）灰化100200c20S（斜坡）400c10S（階梯）3）原子化1800 5s 4）清除20003s3、標(biāo)準(zhǔn)系列液：鎘標(biāo)準(zhǔn)液空白尿液基體改進(jìn)劑液1%NH3（二）血鎘測(cè)定1 、原理 ：血樣加稀 HNO 3離心 ,取上清液測(cè)定,標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量2、標(biāo)準(zhǔn)系列液鎘血標(biāo)準(zhǔn)液：抗凝小牛全血+鎘標(biāo)準(zhǔn)液4%HNO3第七節(jié) ：汞一、接觸機(jī)會(huì) 礦得開采與冶煉電器與儀表制

21、造化學(xué)工業(yè)二、代謝與生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)（1） 動(dòng)力學(xué)過程1、吸收主要就是呼吸道2、分布無機(jī)汞主要就是腎、其次肝、腦有機(jī)汞主要就是腦其次肝、胃 3 、排出 尿汞 生物半減期 23 個(gè)月（2） 生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)1、血汞：反映近期接觸無機(jī)汞得量2、尿汞：用于診斷汞中毒觀察驅(qū)汞療效三、樣品采集、保存 1、尿樣：隨機(jī)取一次尿樣加堿NaOH使?jié)舛冗_(dá)到40g/L,4 c可保存2周 2、血樣周末血 抗凝 4 可以保存數(shù)天四、尿汞得測(cè)定冷原子吸收法（一 ）堿性氯化亞錫還原法1、原理：在堿性條件及有 Cd+存在條件下，高濃度得SnCl2將有機(jī)汞及無機(jī)汞還原成元素，用測(cè)汞儀測(cè)定2、標(biāo)準(zhǔn)系列液得配置汞標(biāo)準(zhǔn)液 基體尿液 正常人混

22、合尿 NaOH液DL-半胱氨酸3、測(cè)定 將上述標(biāo)準(zhǔn)系列液加 1滴磷酸三丁酯，加SnCl2-CdSO4液立即通入空氣測(cè)定（載氣）4、說明：磷酸三酯 消泡Cd2+催化作用DL-半胱氨酸起穩(wěn)定劑得作用，防止無機(jī)汞吸附揮發(fā)；還可使有機(jī)汞不分解測(cè)定讀數(shù)：讀取最大吸光度值（二）酸性SnCl2 還原法1、原理：用KMnO4與濃H2SO4分解尿樣，使汞都車t化成 Hg2+,用SnCl2還原成Hg,吹空氣導(dǎo)入測(cè)汞儀2、測(cè)定：尿液與標(biāo)準(zhǔn)系列液同樣用KMnO4與濃H2SO4分解3、說明：1）KMnO 4與濃H2SO4加入得順序：先加KMnO4液再加濃H2SO4 2）測(cè)定前先對(duì)氣路系統(tǒng)進(jìn)行凈化加SnCl2（酸性 ）測(cè)

23、定空白水、吹氣觀察到儀器得響應(yīng)值為零為止每次測(cè)定都使響應(yīng)值為 0 再測(cè)第二份第三章：非金屬化合物及其代謝產(chǎn)物第一節(jié)：CO一、代謝及生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)1、吸收： 呼吸道2、生物效應(yīng)：進(jìn)入機(jī)體與血紅蛋白結(jié)合形成碳氧血紅蛋白（HbCO） 形式導(dǎo)致機(jī)體組織缺O(jiān)23、分布： 血液中HbCO 形式4、排出呼出氣 約有1%被氧化成CO25、生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)1）血中碳氧血紅蛋白 2） 呼出氣中 CO三、樣品得采集與保存1. 呼出氣 ：1）采集班中 （3h 后）或班末呼出氣2）收集終末呼出氣2. 血液 ：1）采集班中 （3h 后）或接觸最高濃度時(shí)得血2）抗凝3）密閉保存4 11 周 4）最好取靜脈血5）受試者不抽煙四、血

24、中碳氧血紅蛋白得測(cè)定分光光度法1、原理 ：1）血中血紅蛋白得四種成分 ：Hb 、 HbO 2、 HbCO、 MetHb2）HbCO,HbMetHb3）測(cè)定Hb 與 HbCO 吸光度,最大吸收波長分別為432nm 與 420nm 注 ：上面應(yīng)該就是Na2s204（連二亞硫酸鈉）不就是Na2s203（硫代硫酸鈉）2、測(cè)定方法：1）摩爾吸光系數(shù)得測(cè)定：用吸光系數(shù)代替（1）過飽與 Hb02 液得制備,血樣用水與Tris 液適量稀釋通入02 30min（2）飽與HbO2液得制備：?。?）中2份通入N2（3）飽與 HbC0 液制備 取 （1）中 2 份,通入 C0 10min（4）HbC0 與 Hb 液制

25、備在（2）與（3）得溶液中加Na2s204 固體（5）分別測(cè)定420nm 與 430nm 吸光度作為吸光常數(shù)（有四個(gè)值）2）血樣測(cè)定分別測(cè)420nm 與 430nm 得吸光度3.計(jì)算：A 420：血樣在420nm 吸光度;A430 血樣在430nm 吸光度K 1、 K2 就是HbC0 在 420nm 、 430nm 得吸光常數(shù)K 3、 K4 就是Hb 在 420nm、 430nm 得吸光常數(shù)4、注意事項(xiàng)：（1）所用氮?dú)馀c氧氣應(yīng)為高Z度氮與高純度氧，不純氮與氧氣中含微量得CO,能干擾測(cè)定結(jié)果（2）連二亞硫酸鈉遇水易分解,在空氣中容易被氧化失效,應(yīng)以小瓶分裝使用,避免接觸空氣與水分（3） 測(cè)定吸光

26、系數(shù)必須采用新鮮血液,一次測(cè)定值在儀器波長穩(wěn)定得情況下可以使用一段時(shí)間 ,但還應(yīng)定期核檢。（4）測(cè)試液應(yīng)盡量避免接觸空氣,及時(shí)測(cè)定,否則會(huì)造成結(jié)果偏低第二節(jié) Cs2二、代謝及生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)（一）代謝1 、吸收 ： 呼吸道、皮膚2 、生物轉(zhuǎn)化1）吸收后約7090%轉(zhuǎn)化為多種代謝產(chǎn)物2）目前，接觸者中尿中已確認(rèn)得有3種:TTCA、2-疏基-2-醺坐咻酮-5,硫月尿（其中TTCA研究較少，生物半減期為2h）3）排出:a、代謝產(chǎn)物隨尿排出b、約2030%以原形從呼吸道排出c、約1%以原形從尿中排出（二）生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)1、尿中 TTCA: 班末尿2、呼出氣中CS2, 目前研究較少三、樣品采集與保存四、尿中T

27、TCA 得測(cè)定HPLC 法1、樣品得處理：A、取離心后得尿樣B、稀HCL酸化：乙醛提取C、離心分層，去上層醛液于試管中D、40c用N2 吹干加20ul 甲醇定容2、說明：A、尿樣經(jīng)離心后取上層尿液，易于分離B、此法從國外引進(jìn)，將原來得梯度洗脫改為等度洗脫。國外得梯度洗脫就是用兩種配比得流動(dòng)相切換洗脫C 、 TTCA 純品需自己純化五、呼出氣中CS2 測(cè)定（一）GC 法1、樣品處理：（1）、呼出氣中CS2濃度在測(cè)定范圍內(nèi)不需要處理，直接進(jìn)樣（2）、呼出氣中CS2低于測(cè)定濃度范圍需富集 ,用 Tenron GC 管富集2、色譜條件：固定相：OV-17；檢測(cè)器：火焰光度檢測(cè)器3、說明：（1）采集終末

28、呼出氣,最后呼出得100ml （2）TenronGC 管：2,6-二苯基對(duì)苯醚得多孔聚合物,用于捕集/熱解吸（3）富集測(cè)定要求做富集空白測(cè)定：用 180ml 氣體 （沖洗氣）注入空白Tenron GC 管中 ,熱解吸后測(cè)定（二）檢氣管法：快速檢測(cè)法1、根據(jù)檢氣管中形成色帶長度,粗略估計(jì)濃度2、特點(diǎn) ：操作簡(jiǎn)單、快速、成本低、精度差,相對(duì)偏差達(dá)20%-30% 以上第四章芳香烴及其代謝產(chǎn)物第一節(jié)苯一、代謝及生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)1 、吸收 ： 主要就是呼吸道,其次就是皮膚2、代謝與排泄1）吸入得苯約50%以上以原形從肺中排出,約10%以原形儲(chǔ)存在有機(jī)組織中2）約 40%進(jìn)入血液循環(huán),在肝中代謝 ,代謝產(chǎn)物

29、50%-70%得苯酚,6%為間苯二酚,2%為對(duì)苯二酚,還有極少量得粘糖酸等都以結(jié)合態(tài)從尿中排出3）有極少量得苯以原形從尿中排出3 、生物檢測(cè)指標(biāo)：1）尿酚 A、因正常人尿中很有酚且個(gè)體差異大B、尿酚不就是特異性指標(biāo)C、僅用于群檢2）呼出氣中得苯：在測(cè)定尿酚以后,測(cè)定呼出氣中苯作為確認(rèn)試驗(yàn)3）尿苯 ：1993 年有人提出用尿苯作苯接觸得生物接觸指標(biāo),目前,還沒納入生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)二、呼出氣中苯得測(cè)定 GC 法（一）原理：用塑料袋或采樣管收集呼出氣，呼出氣用 N2吹入活性炭管吸附（-78C）280c熱解吸，用載氣（N2）導(dǎo)入色譜儀 ,FID 檢驗(yàn) , 通過六通閥切換完成（二 ）苯標(biāo)準(zhǔn)氣得配制 ：注入

30、20ul 苯于 100ml 玻璃配氣瓶中,臨用時(shí)從中抽取一定體積注入另一配氣瓶中稀釋成20ng/ml得苯標(biāo)準(zhǔn)氣（三）測(cè)定：1）取苯標(biāo)準(zhǔn)氣（0、5、1、0、2、0ml）與樣品分別注入呼吸氣得采樣管中2）將采集管37攝氏度恒溫2h3）一端與六通閥連接,一端接N24）吹入冷阱（-78）中得活性炭管5）熱解吸導(dǎo)入色譜儀三、尿酚得測(cè)定 GC 法1、原理：尿樣加鹽酸加熱（90 水浴 ）水解 ,再用乙醚萃取苯酚2、尿樣采集與保存：班末尿 50ml 42周3、樣品處理與測(cè)定： 1）5、 0ml 尿樣 ,1ml 濃鹽酸于具塞試管中,90水浴1h 2）、用 3、 0ml 乙醚振搖萃取3）取上層醚液注入 GC 儀4

31、、標(biāo)準(zhǔn)曲線：苯酚標(biāo)準(zhǔn)系列液用3ml 乙醚提取4、色譜條件（1）液晶柱分離分離苯酚與鄰間對(duì)甲酚。（2）FFAP 柱 ,分離苯酚與對(duì)甲酚5、說明：3ml乙醴萃取要避免乙醴揮發(fā)，分層后不就是3ml,加乙醴補(bǔ)至3ml(2)可用內(nèi)標(biāo)志法定量四、甲苯、二甲苯(一) 代謝及生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)1)代謝(1)甲苯約15%25%以原型呼出約1%從尿中排出約80%代謝甲苯-O苯甲酸-馬尿酸 馬尿酸排出得半減期為 23 人。(2)二甲苯 約5%原形從肺中呼出60%80%生物轉(zhuǎn)化主要終產(chǎn)物就是甲基馬尿酸2)生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)(1) 甲苯尿中馬尿酸非特異性對(duì)群體判斷有一定得定義呼出氣體中甲苯作為確認(rèn)(2)二甲苯:尿中馬尿酸正常人尿中

32、無甲基馬尿酸特異性指標(biāo)(二)、尿中馬尿酸得測(cè)定比色法( 喹啉 苯磺酰氯比色法)(1)原理(2)樣品采集兩天后班末尿,按 100+1 體積比加氯仿(3)樣品處理與測(cè)定(4)注意事項(xiàng): 1、試劑加入順序不能顛倒2、日光對(duì)顯色有破壞作用要避光放置(加入苯磺酰氯后 )第四節(jié) 乙苯一、代謝及生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)(一)代謝與排泄1 、只有少部分以原形從呼吸道排出。2、 70%以上代謝后隨尿排出,主要代謝產(chǎn)物為扁桃酸60%苯酰甲酸 25%(二)監(jiān)測(cè)指標(biāo):1、呼出氣體中乙苯2、尿中扁桃酸(非特異性)二、生物監(jiān)測(cè)方法:1、呼出氣體中乙苯得測(cè)定 GC 法與呼出氣中笨得測(cè)定類似2、尿中扁桃酸得測(cè)定HPLC 法 內(nèi)標(biāo)法定量

33、內(nèi)標(biāo)物 4-羥基苯甲酸第五章 芳香族硝基與氨基化合物第一節(jié) 苯胺一、代謝與生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)1、吸收:主要通過呼吸道吸收,很容易經(jīng)皮膚吸收2、代謝主要代謝途徑:苯胺苯基羥胺對(duì)氨基酚接觸24h后，有1560%轉(zhuǎn)化為對(duì)氨基酚、以結(jié)合態(tài)隨尿排出3、生物監(jiān)測(cè)指標(biāo):尿中對(duì)氨基酚 正常人尿中含微量對(duì)氨基酚平均3、 7mg/L二、尿中對(duì)氨基酚得測(cè)定(一)鹽酸萘乙二胺分光光度法1、原理:尿中對(duì)氨基酚經(jīng)水解。萃取分離重氮化偶合顯色。重氮化試劑：亞硝酸鹽偶與顯色劑：鹽酸蔡乙二胺2、操作要點(diǎn)(1)樣品處理:鹽酸酸化沸水浴水解約1 人 萃取先用 NaOH 調(diào)中性 ,用乙酸乙酯萃取,再用鹽酸溶液反萃取。(2)重氮化偶合反映重

34、氮化,酸性條件下加過量得亞硝酸鹽、反應(yīng)10min除過量得NaNO2 液加氨基磺酸胺溶液至無色氣泡產(chǎn)生止放10min偶合反應(yīng)顯色:加鹽酸萘乙二胺生成紫紅色(3) 比色定量580nm 尿空白管作參比 ,標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量3、說明 :(1)尿樣應(yīng)采集班末或班后尿,采樣前要詢問受檢者就是否服用藥物(2)重氮化反應(yīng)，NaNO2過量才能完全重氮化但NaNO2對(duì)偶與顯色有干擾(3)重氮化反應(yīng)應(yīng)在盡量低溫條件下進(jìn)行,而偶合反應(yīng)在60為宜,水浴加熱前 ,偶合劑加入后充分混合(二)HPLC 法1 樣品處理 :(1)水解 ,同上法(2)萃取先在酸性條件下用乙酸乙酯萃取再在中性條件下用乙酸乙酯萃取對(duì)氨基酚(兩次萃取除雜質(zhì)

35、)2 、說明:P96 用磷酸氫二鉀 (弱堿 )調(diào)節(jié)PH 值第二節(jié)：硝基苯一、代謝產(chǎn)物與生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)1、吸收：很容易從皮膚吸收，主要從呼吸道吸收。2、代謝：代謝產(chǎn)物有硝基酚與氨基酚還有少量苯胺，對(duì)硝基酚1316%,對(duì)氨基酚10%。3、排出：代謝產(chǎn)物與葡萄糖醛酸與硫酸結(jié)合，隨尿排出。少量以原形級(jí)微量本案隨呼出氣排出。4、生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)尿中對(duì)硝基酚（特異性）二、尿中對(duì)硝基苯酚得測(cè)定P98（一）、鄰甲酚分光光度法1、原理：尿樣經(jīng)酸水解。苯取先用混合有機(jī)溶劑取，再用氫氧化錢溶液反萃取。還原用三氯化鈦將其還原成對(duì)氨基酚。鄰甲酚顯色藍(lán)色600nm比色定量。2、樣品處理：1）水解鹽酸酸化沸水浴1h。2）萃取先用

36、異戊醇一石油醛一乙醛萃取，再用3mol/L氯水反萃取。3、顯色測(cè)定 先加鄰甲酚，再加三氯化鈦溶液。立即振搖至黃色沉淀變成淡黃色沉淀，過濾30min后600nm測(cè)定吸光度。（二）HPLC 法1、樣品處理1）水解同上法。2）萃取 二氯甲烷萃取3次定容至20ml。2、說明1）尿液采集后，盡快加鹽酸，10o c以下運(yùn)輸。2）流動(dòng)相配比與流速可根據(jù)儀器性能調(diào)整。第三節(jié)：三硝基甲苯TNT 2,4,6一三硝基甲苯一、代謝1）經(jīng)氧化還原化合等途徑代謝。2）以還原代謝途徑為主，主要代謝物4 氨基一2,6一二硝基甲苯。3）各種代謝產(chǎn)物以結(jié)合態(tài)隨尿排出。二、生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)（4A）三、GC法測(cè)定尿中4-A1、樣品處理:

37、1）鹽酸酸化沸水浴1h。2）萃取代謝 加固體碳酸氫鈉調(diào) PH78用甲苯萃?。蛐?1ml,甲苯1ml）2、色譜條件：1）檢測(cè)器 ECD 2）固定相：OV 17（固定液）3）柱溫220c 程序升溫效果更好200c （0、4min）10 C/min 220 c 5 C /min 240 c第六章：鹵代煌化合物及其代謝產(chǎn)物得測(cè)定第一節(jié)：氯乙烯一、代謝1）經(jīng)呼吸道吸入大部分以原形從呼吸道中排出2）少部分在肝臟轉(zhuǎn)化先轉(zhuǎn)化成一種致癌活性物環(huán)氧氯乙烷在谷光甘肽或半胱氨酸參與下最終代謝物為亞硫基二乙酸（硫代二乙酸）3）少量得氯乙烯以原形隨尿液排出二、生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)：尿中硫代氯乙酸，呼出氣中氯乙烯很少作為檢測(cè)指標(biāo)三.GC法測(cè)定尿中硫代氯乙酸（一）原理 尿樣經(jīng)酯化后水蒸氣蒸至近干甲醇一乙醛溶解其中得硫代二乙酸酯化 重氮甲烷酯化火焰光度計(jì)監(jiān)測(cè)（二）樣品處理：1）1ml尿液加0、1