浙大微生物大實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、摘要 ： 本實(shí)驗(yàn)以土壤中的微生物作為原材料， 根據(jù)微生物各自的生長(zhǎng)特點(diǎn)， 配制不同成分的微生物培養(yǎng)基。將微生物培養(yǎng)物或含有微生物的樣品在無(wú)菌條件下移植到培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在分離出相應(yīng)微生物后， 對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的純化， 然后觀察其形態(tài)特征， 并通過(guò)微生物的生理生化反應(yīng)對(duì)其種類進(jìn)行鑒定， 最后研究環(huán)境條件對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響。關(guān)鍵字 ：培養(yǎng)基，分離，純化，鑒定，環(huán)境條件 養(yǎng)基, 分離，純化，鑒定，環(huán)境條件一、實(shí)驗(yàn)材料1、分離細(xì)菌、真菌、放線菌的材料： 牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、馬鈴薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4 KNO3 MgSO4 7H2O FeSO4-7H2O等。新鮮土壤；培養(yǎng)基：滅菌的牛肉

2、膏蛋白月東瓊脂培養(yǎng)基、淀粉瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基（10mL裝）；試劑：5000U/mL鏈霉素液、0.5 %重鉛酸鉀液。2、細(xì)菌、真菌、放線菌純化與鑒定的材料：菌種：大腸桿菌、枯草桿菌、熒光假單胞菌、金黃色葡萄球菌， 前實(shí)驗(yàn)分離的未知菌； 培養(yǎng)基： 淀粉培養(yǎng)基、 硫化氫實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基、 石蕊牛乳培養(yǎng)基、 油脂培養(yǎng)基；試劑：碘液。菌種：枯草桿菌斜面；靈桿菌菌液；黑曲霉斜面。培養(yǎng)基采用：牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基牛肉膏蛋白月東瓊脂培養(yǎng)基（10mD、馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基（10mL）、淀粉瓊脂培養(yǎng)基（10mD;供試藥劑：2.5 碘酒， 75酒精， 0.1 HgCl2， 5石炭酸。二、實(shí)驗(yàn)步驟1、分離細(xì)菌、真菌

3、、放線菌的步驟（一） 、培養(yǎng)基配制1. 培養(yǎng)基配制的一般方法和步驟（ 1） 量：按照培養(yǎng)基配方，正確稱取各種原料放于搪瓷杯中。（ 2） 化：在搪瓷杯中加入所需水量（根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要加入蒸餾水或自來(lái)水），用玻棒攪勻，加熱溶解。（ 3） H值（調(diào)pH也可以在加瓊脂后再調(diào)），用1N NaOH 1N HCl調(diào)pH,用pH試紙對(duì)照。（ 4） 瓊脂溶化，在瓊脂溶化過(guò)程中，需不斷攪拌，并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦，待完全溶化后，補(bǔ)足所失水分，一般數(shù)量少，時(shí)間短不必補(bǔ)水。（ 5） 裝：在漏斗架上分裝。根據(jù)不同的需要進(jìn)行分裝，一般制斜面的裝置為管高的1 5 特別注意不要使培養(yǎng)基粘污在管（瓶）口上以免浸濕棉塞，引

4、起污染。（ 6） 扎成捆、掛上標(biāo)簽。培養(yǎng)基分裝好后，塞上棉塞，用防水紙包扎成捆掛上所配培養(yǎng)基名稱的標(biāo)簽。（ 7） 菌備用。滅菌后如需制成斜面的，應(yīng)在下磅后取出，擺成斜面（見(jiàn)圖6-1 ） 。培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，必須放在37 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h ，如確無(wú)菌生長(zhǎng)、方可使用。2三種培養(yǎng)基的配方及具體配制方法（ 8） . 牛肉膏蛋白陳瓊脂培養(yǎng)基（用于分離和培養(yǎng)細(xì)菌，是一種天然培養(yǎng)基）配方：牛肉膏 3g蛋白胨 5g氯化鈉 3g瓊脂 20g1 000mLpH7.2 7.4滅菌 l.05kg cm2， 2530min本實(shí)驗(yàn)將原配方配成各種濃縮液。各種濃度如下：30 牛肉膏、50 蛋白胨、30 氯化鈉。以配制2

5、00mL培養(yǎng)基為例。吸取30%牛肉膏2ml; 50%蛋白月東2mL 30%氯化鈉2mL加入有刻度的搪瓷燒杯中，然后用自來(lái)水補(bǔ)足到200mL用玻棒攪勻，在電爐上稍加熱，調(diào) pH至7.4 ,加瓊脂4g,加熱熔化，用玻棒不斷攪拌，至瓊脂完全溶解為止，趁熱在漏斗架上裝試管， （見(jiàn)圖6 2） 。裝帶有棉塞的無(wú)菌試管，裝置1 5的試管高度共12支，作斜面培養(yǎng)基、用鋁殼試管帽的里裝10mL約試管高度的1 /2以上，用作分離時(shí)倒平板用。分裝完畢，以12 支為一捆，用防水紙包扎成捆（圖6-3 ） ，掛上標(biāo)簽，滅菌備用。（ 9） . 馬鈴薯（或豆芽汁）蔗糖（或葡萄糖）瓊脂培養(yǎng)基（用于分離和培養(yǎng)真菌之用，是一種半合

6、成培養(yǎng)基） 。配方：去皮馬鈴薯（或鮮豆芽） 200g 蔗糖（或葡萄糖） 20g 自來(lái)水 1000mL瓊脂 20gpH 天然滅菌（含蔗糖） 1.05kg/cm220min （含葡萄糖） 0.1kg/cm2 30min制備方法配制200mL培養(yǎng)基為例取上皮馬鈴薯40g,切成小塊、放入無(wú)刻度的搪瓷杯中，加水200mL,置電爐上加熱煮沸10min,用4層紗布過(guò)濾至具刻度的搪瓷杯中，濾液加水補(bǔ)足至200mL=然后加蔗糖4g,加瓊脂4g,加熱熔化并用玻棒不斷攪拌直至瓊脂完全溶化分裝試管，下面一系例步驟同配細(xì)菌培養(yǎng)基相同。（ 10） . 淀粉瓊脂培養(yǎng)基（高氏一號(hào)Gause I ） ，用干分離和培養(yǎng)放線菌，是

7、一種合成培養(yǎng)基。配方：可溶性淀粉 20.0gKNO31.0gK2HPO4 0.5gMgSO- 7H2O 0.5gNaCl 0.5gFeSQ - 7H2。0.01g瓊脂 20g1 000mL滅菌 1.05kg/cm230min制備方法配制（以配制 200mD培養(yǎng)基為例：吸取配方液：1%KNO320mL1%K2 HPO410mL 1 % MgSO4 7H2 010mL l%NaCl10mL; 1% FeSO47H200.02mL加水補(bǔ)足至200mL,置電爐上加熱.用另一只搪瓷杯稱取可溶性淀粉4g,從200mL中取出少量加入淀粉中，用玻棒調(diào)成糊狀，待液體沸騰后將淀粉糊洗入培養(yǎng)液中，攪勻，調(diào) pH 至

8、 7.4 ，加瓊脂 4g ，加熱至瓊脂完全溶化為止，趁熱分裝試管，以下一系例步驟同于配制細(xì)菌培養(yǎng)基的操作方法。3. 無(wú)菌水的制備無(wú)菌水，為下一次微生物分離實(shí)驗(yàn)中所需用而準(zhǔn)備。100mL三角瓶（裝有玻璃珠），裝自來(lái)水45mLi試管中裝9mL自來(lái)水，塞上棉塞，包扎滅菌備用。三角瓶和試管須預(yù)先塞好棉塞，并經(jīng)干熱滅菌。（二）分離培養(yǎng)微生物常用器皿的準(zhǔn)備1. 清洗一些玻璃儀器：如三角瓶試管，培養(yǎng)皿、吸管等。2. 棉塞的制作：裝培養(yǎng)基和分離培養(yǎng)需用的部分玻璃器皿，需加棉花塞梯塞的作用為過(guò)濾空氣，使試管內(nèi)外空氣可以流通，但外界空氣中雜菌不能進(jìn)入，避免污染、試管、三角瓶都要做棉塞。吸管上部也要塞入棉花，在管口

9、約1-2mm處，用解剖針塞入少許棉花，（約1-1.5cm長(zhǎng)）以防止細(xì)菌吸入口中，井避免將口中細(xì)菌吹入管內(nèi)。棉花要塞得松緊適宜。吹時(shí)以能通氣但不使棉花塞下滑為準(zhǔn)。3. 包裝培養(yǎng)皿和吸管等。為了使培養(yǎng)皿、吸管、三角玻棒等洗凈，干熱滅菌后，不讓表面暴露，以保證無(wú)菌狀態(tài)，為此干熱滅菌前先用舊報(bào)紙包裝妥當(dāng)（見(jiàn)示范） ，每組同學(xué)包培養(yǎng)皿6只（一包） 。吸管的包裝，將塞好棉花的吸管尖端，放在45cm寬的長(zhǎng)紙條的一端，約成45。角左右，折疊紙條，包住吸管尖部，用左手握住移液管身，右手將移液管壓緊，在桌面上向前搓轉(zhuǎn)，以螺旋式包扎起來(lái)。上端剩余紙條，折疊打結(jié)，準(zhǔn)備滅菌。（三）微生物的分離1. 用稀釋平板法（又名混

10、菌法）從土壤中分離真菌。（ 1 ）制備土壤稀釋液無(wú)菌操作過(guò)程見(jiàn)教師示范。A.取土壤5g,放入裝有45mL無(wú)菌水的三角瓶中，振蕩 10min,即為稀釋10-1的土壤懸液。B.另取裝有9mL無(wú)菌水試管5支，用記號(hào)筆編上10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。取已稀釋成10-1 土壤液，振蕩后靜止0.5min ，用無(wú)菌吸管吸取 1mL 土壤懸液加入 10 的無(wú)菌水的試管中，并在試管內(nèi)輕輕反復(fù)吹吸數(shù)次，使之充分混勻，即成10-2 土壤稀釋液。同法由10-2的試管中吸取1mL稀釋液加入編號(hào)為10-3的無(wú)菌水試管中，混勻后即為 10-3土壤稀釋液，依次連續(xù)稀釋至10-4、10-5、10-6土壤稀

11、釋液。在土壤稀釋過(guò)程中，以用一支吸管由濃到稀，稀釋到底，稀釋方法見(jiàn)圖 7-1。圖71檢樣的稀釋方法（2）每組取無(wú)菌培養(yǎng)皿2付，即每個(gè)同學(xué)做一只。學(xué)號(hào)單號(hào)學(xué)生用10-5稀釋度液，雙號(hào)學(xué)生用10-4稀釋度液。先在無(wú)菌培養(yǎng)皿底部貼上標(biāo)簽，注明分離菌名、稀釋度、組別、班級(jí)。取另一吸管，以無(wú)菌操作法吸取10-4或10-5 土壤稀釋液1mL,加在無(wú)菌培養(yǎng)皿的一邊，在皿的另一邊加入2滴5 000U/mL的鏈霉素液。此時(shí)嚴(yán)防兩液相混。取已融化在水浴鍋中保溫 50oC左右的馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基 2管（10mL裝，一管倒一皿），以不燙手 為準(zhǔn)，倒入上述培養(yǎng)皿中（見(jiàn)圖7-2）,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使菌液、鏈霉素液、培養(yǎng)

12、基充分混勻鋪平皿底， 放在平坦的桌面上，凝固后，翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)血，置2830oC恒溫培養(yǎng)養(yǎng)56d。觀察真菌菌落形態(tài)以及計(jì)數(shù)菌落數(shù)。并計(jì)算出每1g 土壤中真菌的數(shù)量。即用某一培養(yǎng)皿內(nèi)真菌的菌落數(shù)乘以該培養(yǎng)皿接種液的稀 釋倍數(shù)即得。（3）挑取單個(gè)菌落接種到外面培養(yǎng)基上作純化和性能測(cè)定，若不純，需要繼續(xù)分離。2 .用平板涂抹法分離土壤中的放線菌（土壤稀釋液制備同上）。每組取無(wú)菌培養(yǎng)皿2付（每個(gè)同學(xué)各做一只）。各在培養(yǎng)皿底部貼上標(biāo)簽，注明分離菌名、稀釋度、組 別、班級(jí)。以無(wú)菌操作法先在培養(yǎng)皿中加入0.5 %重鉛酸鉀溶液2滴，取已融化的淀粉瓊脂培養(yǎng)基 2管，分別倒入2付培養(yǎng)皿中，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基與重鉛

13、酸鉀充分混勻，鋪平，制成平板。待平板凝固后，另取一支吸管吸取10-3 （單學(xué)號(hào)學(xué)生）或10-4 （雙學(xué)號(hào)學(xué)生）稀釋液 0.2mL 土壤稀釋液放在平板上。取無(wú)菌三角玻棒，把上述稀釋液在平板表面涂抹均勻（見(jiàn)圖 7-4）。在涂抹時(shí)不要弄破平板，以免影響 菌落的生長(zhǎng)。翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，置28C30c條件下培養(yǎng)67d,觀察放線菌菌落形態(tài)及計(jì)數(shù)菌落，并算出每g 土壤中放線菌的數(shù)量（方法同上）。挑取單個(gè)菌落，接種于相應(yīng)的斜面培養(yǎng)基上，如果不純?cè)僖浦不蚣兓?，直至得到純培養(yǎng)為止。3 .用平板劃線法分離土壤中的細(xì)菌（土壤稀釋液的制備同上）。（1）每組取無(wú)菌培養(yǎng)皿兩付，同上法在培養(yǎng)皿底部貼上標(biāo)簽。取已融化的牛肉膏蛋白月東

14、培養(yǎng)基，倒入無(wú)菌培養(yǎng)血中，制成平板。（2）平板凝固后，用接種環(huán)取相應(yīng)的菌液一環(huán)（10-5或10-6）在平板上劃線（教師作示范）連續(xù)劃線法：將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面作連續(xù)劃法（圖7-5）,勿劃破培養(yǎng)基。劃線完畢后，倒置28oC30oC溫室培養(yǎng)。分區(qū)劃線法：用接種環(huán)以無(wú)菌操作挑取土壤稀釋液1環(huán)，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第 1次平行劃線3- 4條，再轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約60”角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉， 待冷卻后通過(guò)第1次劃線部分作第2次平行劃線， 再用同法通過(guò)第2次平行劃線部分作第 3次平行劃線和通過(guò)第 3次平行劃線部分作第4次平行劃線（見(jiàn)圖 7-5）劃線完畢，蓋上皿蓋，倒置于 28C-30 c

15、溫室中培養(yǎng)。（3）挑取單個(gè)菌落接種子斜面培養(yǎng)基上，如果不純?cè)僖浦渤杉兓詈蟮玫郊兣囵B(yǎng)。用上述分離土壤中真菌、放線菌和細(xì)菌的方法，也可用于分離病蟲、病蠶或果蔬上的病原菌。以劃線法從病蠶分離黑胸?cái)⊙〔≡鸀槔?，先?5%酒精棉球進(jìn)行表面消毒（注意病蟲、病蠶、果蔬等分離的樣品不要過(guò)份腐爛，便于進(jìn)行材料的處理。取滅菌手術(shù)剪剪去病蠶的一只腹足，流出體液作為劃線分離的材料，若是分離蘋果炭疽病病原菌，則用無(wú)菌鐐子揭下有炭疽病蘋果的果皮，再?gòu)拇颂幥腥∶琢４笮」?塊，放入盛有1mL無(wú)菌水的試管中，用無(wú)菌玻棒搗碎制成懸浮液，劃線法分離病原菌。圖75平板分離劃線的方法A.連續(xù)劃線法B.分區(qū)劃線法2、細(xì)菌、真菌

16、、放線菌純化與鑒定的步驟（一）淀粉水解試驗(yàn)50 c左右，即傾入培養(yǎng)某些細(xì)菌可以產(chǎn)生淀粉酶（胞外酶），使淀粉水解為麥芽糖和葡萄糖，再被細(xì)菌吸收利用。淀粉水 解后遇碘不再變藍(lán)色。試驗(yàn)時(shí)將裝有淀粉培養(yǎng)基的三角瓶置于洗水浴中融化，然后取出冷卻至約皿中，待凝固后制成平板。每個(gè)同學(xué)用接種環(huán)取少量菌涂在平板上，每個(gè)菌種涂片0.30.5cm大小的圓（見(jiàn)圖9-1 ）、其中一種應(yīng)以枯草桿菌（Bacillus subtilis ）作為對(duì)照菌。圖9-1淀粉水解試驗(yàn)接種示意圖1 .枯草芽抱桿菌 2. 試驗(yàn)菌1 3.大腸桿菌 4. 試驗(yàn)菌2將培養(yǎng)皿倒置于37 c恒溫箱中培養(yǎng)24h,觀察時(shí)打開(kāi)皿蓋滴加少量碘液于平板上，輕輕

17、旋轉(zhuǎn)，使碘液均勻鋪滿整個(gè)平板。如菌體周圍出現(xiàn)無(wú)色透明圈，則說(shuō)明淀粉已被水解。透明圈的大小，說(shuō)明該菌水解淀粉能力的強(qiáng)弱。（二）硫化氫的產(chǎn)生試驗(yàn)許多細(xì)菌能從培養(yǎng)基中的含硫有機(jī)化合物產(chǎn)生硫化氫。硫化氫遇鉛鹽（或鐵鹽）則形成黑色硫化鉛（或黑色硫化鐵）。試驗(yàn)常用胱氨酸或半胱氨酸作為含硫有機(jī)物。1 .方法接種與觀察：用新鮮斜面培養(yǎng)物（菌種）接種到硫化氫試驗(yàn)培養(yǎng)基中。接種后，用無(wú)菌鐐子夾取醋酸鉛濾紙條用棉塞塞緊，使懸掛于管中，下端接進(jìn)培養(yǎng)基表面，不接觸液面，適溫培養(yǎng)。于接種后3、7、14天觀察，紙條變黑者為陽(yáng)性，不變者為陰性。2 .注意事項(xiàng)a.此方法比較敏感，本培養(yǎng)基不適用于腸桿菌科。b.紙條高度應(yīng)放置適當(dāng)

18、，離液面太遠(yuǎn)影響靈敏度，太近容易被濺濕。同時(shí)移動(dòng)試管時(shí)也要平穩(wěn)。c.除空白對(duì)照外，應(yīng)放陰性對(duì)照。（三）石蕊牛奶試驗(yàn)牛乳中通常含有蔗糖、乳糖、蛋白質(zhì)、酪蛋白等成分。細(xì)菌對(duì)牛乳的利用主要是指對(duì)乳糖及酪蛋白的分解和利用。牛乳中常加入石蕊作為酸堿指示劑和氧化還原指示劑。中性時(shí)石蕊呈淡紫色， 酸性時(shí)呈紅色，堿性時(shí)呈藍(lán)色，還原時(shí)則部分或全部脫色。細(xì)菌對(duì)牛乳的利用可分三種情況：1. 酸凝固作用細(xì)菌發(fā)酵乳糖后，產(chǎn)生許多酸，使石蕊牛乳變紅，當(dāng)酸度很高時(shí)，可使牛乳凝固，此稱為酸凝固。2. 凝乳酸凝固作用某些細(xì)菌能分泌凝乳酶，使牛乳中的酪蛋白凝固，這種凝固在中性環(huán)境中發(fā)生。通常這種細(xì)菌還具有水解蛋白質(zhì)的能力，因而產(chǎn)

19、生一些堿性物質(zhì)，使石蕊變藍(lán)。3. 胨化作用酪蛋白被水解，使牛乳變成清亮透明的液體。胨化作用可以在酸性條件下或堿性條件下進(jìn)行，一般石蕊色素被還原脫色。接種大腸桿菌或熒光假單胞菌于石蕊牛乳培養(yǎng)基中，置于 37 c恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)7d。另外保留1支不接種的石蕊牛乳培養(yǎng)基作為對(duì)照。（四）溫度對(duì)微生物的影響微生物生長(zhǎng)需要一定的溫度條件，不同的微生物，各有其不同的生長(zhǎng)溫度范圍。在生長(zhǎng)溫度范圍內(nèi)有最高、最適、最低三種生長(zhǎng)溫度。如果超過(guò)最低和最高生長(zhǎng)溫度時(shí)，微生物均不能生長(zhǎng)，或處于休眠狀態(tài)，甚至死亡。每組取牛肉膏蛋白胨細(xì)菌外面培養(yǎng)基6支，貼上標(biāo)簽，注明班級(jí)、組號(hào)、培養(yǎng)溫度等，在無(wú)菌操作下，用枯草桿菌斜面菌種進(jìn)行斜

20、面接種。備取2 支標(biāo)記28、60、4（冰箱）分別放入相應(yīng)溫度下培養(yǎng)， 48h 后觀察記錄并做實(shí)驗(yàn)報(bào)告。（五）紫外線對(duì)微生物的影響紫外線對(duì)微生物有明顯的致死作用，波長(zhǎng)260nm左右紫外線具有最高的殺菌效應(yīng)。紫外線對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響是隨著紫外線對(duì)微生物照射劑量、 照射時(shí)間及照射距離的不同， 對(duì)微生物的生理活動(dòng)也相應(yīng)地產(chǎn)生不同的效果。劑量高、時(shí)間長(zhǎng)、距離短時(shí)就易殺死它們，劑量低時(shí)間短、距離長(zhǎng)時(shí)就會(huì)有少量個(gè)體殘存下來(lái)。其中一些個(gè)體的遺傳特性發(fā)生變異?？梢岳眠@種特性來(lái)進(jìn)行滅菌和菌種選育工作。細(xì)胞中核酸等物質(zhì)對(duì)紫外線的吸收能力特強(qiáng)，吸收的能量能破壞DNA的結(jié)構(gòu)，抑制了DNA的復(fù)制。輕則誘使細(xì)胞發(fā)生變異，重

21、則導(dǎo)致死亡。經(jīng)紫外線照射后受損害的細(xì)胞，如立即暴露在可見(jiàn)光下，則有一部分仍可恢復(fù)正?；盍ΓQ為光復(fù)活現(xiàn)象。紫外線雖有較強(qiáng)的殺菌力，但穿透力弱，即使一薄層黑紙，就能將大部分紫外線濾除。本實(shí)驗(yàn)即證明紫外線的殺菌作用及穿透能力。方法將牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基按無(wú)菌操作制成平板1付， 用無(wú)菌移液管吸取0.1mL 靈桿菌 （或培養(yǎng)8h的金黃色葡萄球菌）菌液于平板上，用無(wú)菌三角玻棒涂均勻。在皿底部貼上標(biāo)簽，注明組號(hào)、班級(jí)、處理，再移至無(wú)菌室內(nèi)，打開(kāi)皿蓋，將無(wú)菌五角星黑紙放 置于平板，在距離紫外燈的 30cm處照射20min,去除黑紙，加上皿蓋（圖 20-1）。于28C30c溫箱中倒置培養(yǎng)48h后記錄結(jié)果。圖

22、20-1紫外線對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響試驗(yàn)1 .擋紫外線照射的黑紙2.紫外線直接照射處3.培養(yǎng)后細(xì)菌生長(zhǎng)4.培養(yǎng)后細(xì)菌不生長(zhǎng) （六）化學(xué)藥劑對(duì)微生物的影響一些化學(xué)藥劑對(duì)微生物生長(zhǎng)有抑制效殺死作用，因此在實(shí)驗(yàn)室中及生產(chǎn)上常利用某些化學(xué)藥劑進(jìn)行滅菌或消毒。不同化學(xué)藥劑對(duì)不同微生物的殺菌能力并不相同。而一種化學(xué)藥劑對(duì)不同微生物的殺菌效果也不一致。因此，使用化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒或滅菌時(shí)， 應(yīng)注意藥品的濃度及使用時(shí)其它因素的干擾和 影響。每組的無(wú)菌培養(yǎng)皿兩付在皿底注明處理方法及菌種名稱。取枯草桿菌和金黃色葡萄球菌各1支，各注入4mL無(wú)菌水，以無(wú)菌操作用接種環(huán)將菌苔括下，制成菌懸液。用無(wú)菌吸管各吸取枯草桿菌和金黃色

23、葡萄球菌0.2mL相應(yīng)的培養(yǎng)皿中。將已融化冷卻至 50 c左右的細(xì)菌培養(yǎng)基（不燙手為宜）分別倒入上述的培養(yǎng)皿中、混勻后凝固成 平板。用鐐子將備滴有兩滴 0.1 %HgCI2、2.5 %碘酒，75%酒精，5%石炭酸的小圓形濾紙片，放于每一 平板上，蓋上皿蓋于 28 c30 c的溫箱中培養(yǎng)48h后記錄結(jié)果。如果有抑制作用，則濾紙片四周出現(xiàn)無(wú)菌生長(zhǎng)的抑菌圈，圈的大小可表示消毒劑抑菌的強(qiáng)弱（如 圖 20-2 ）。圖202園濾紙片法檢測(cè)藥物的殺菌作用1 .濾紙片2.有菌區(qū)3.抑菌區(qū)（七）抗生素對(duì)微生物的影響某些微生物，特別是放線菌，在生命活動(dòng)過(guò)程中產(chǎn)生了一些對(duì)其本身無(wú)害而能抑制或殺死另外一 些微生物的特

24、異性的代謝產(chǎn)物，這些特異性的代謝產(chǎn)物稱為抗生素。產(chǎn)生抗生素的微生物稱為抗生菌?？股卦跇O低濃度下即能抑制或殺死某些微生物。在抗生菌的篩選中常以其對(duì)某些微生物產(chǎn)生的 拮抗作用所形成的抑菌圈的大小來(lái)衡量抗生菌作用的強(qiáng)弱和抗生素的有效濃度。方法與步驟：將枯草桿菌斜面和黑曲霉斜面各用4mL無(wú)茵水，以無(wú)菌操作法制成菌懸液備用。取兩付無(wú)菌培養(yǎng)皿，皿底貼上標(biāo)簽，注明組別及處理，各自用無(wú)菌吸管吸取上述菌懸液各1mL,分別加入相應(yīng)培養(yǎng)皿內(nèi)。取已融化并已保持在50c左右的細(xì)菌和真菌培養(yǎng)基各 1管，倒入相應(yīng)的培養(yǎng)皿中，輕輕搖勻，制成 含菌平板用無(wú)菌打孔器在長(zhǎng)有5406'放線菌的培養(yǎng)皿中無(wú)菌操作垂直鉆取連有培

25、養(yǎng)基的菌塊。用滅菌鐐子將“ 5406”菌塊移至平板上、每個(gè)平板放四塊。培養(yǎng)皿正放在28C30c溫箱中培養(yǎng)2-3d觀察菌塊周圍的透明圈（抑菌圈）大小、并寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、細(xì)菌、真菌和放線菌菌落的形態(tài)特征 細(xì)菌菌落特征：一般呈現(xiàn)較濕潤(rùn)、較光滑、較透明、較粘稠、易挑取、質(zhì)地均勻、小而突起或大而平坦、菌落正反面 或邊緣與中央部位的顏色一致、一般有臭味或酸敗味等。放線菌菌落特征：干燥、不透明，小而緊密，呈放射狀；菌落初期表面光滑或呈致密的絲絨狀，當(dāng)產(chǎn)生抱子之后，其 菌落表面呈粉狀、顆粒狀；菌落和培養(yǎng)基連接緊密，難以挑取，或者整個(gè)菌落被挑起而不致破碎；菌落 顏色多樣，菌落正反面顏色常不一致，在菌

26、落邊緣的瓊脂平面有變形的現(xiàn)象；帶有泥腥味。霉菌菌落特征：由于霉菌的菌絲較粗而長(zhǎng)，因而霉菌的菌落較大，有的霉菌的菌絲蔓延，沒(méi)有局限性，其菌落可擴(kuò)展到整個(gè)培養(yǎng)皿，有的種則有一定的局限性，直徑1-2厘米或更小。菌落質(zhì)地一般比放線菌疏松，外觀干燥，不透明，呈現(xiàn)或緊或松的蛛網(wǎng)狀、絨毛狀或棉絮狀；菌落與培養(yǎng)基的連接緊密，不易挑??；菌落正反面的顏色和邊緣與中心的顏色常不一致。2、細(xì)菌、真菌和放線菌個(gè)體的形態(tài)特征細(xì)菌個(gè)體特征：個(gè)體較??；形狀有桿狀，螺旋狀，球狀；沒(méi)有細(xì)胞核，但有DNA!中區(qū)域，有的細(xì)菌還有鞭毛，作用是運(yùn)動(dòng)；細(xì)菌的個(gè)體非常小，目前已知最小的細(xì)菌只有0.2微米長(zhǎng)，因此大多只能在顯微鏡下看到它們。細(xì)

27、菌一般是單細(xì)胞，細(xì)胞結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，缺乏細(xì)胞核、細(xì)胞骨架以及膜狀胞器，例如粒線體和葉綠體?？筛鶕?jù)形狀分為三類，即：球菌、桿菌和螺旋菌（包括弧菌、螺菌、螺桿菌）。放線菌個(gè)體特征：放線菌是原核生物的一個(gè)類群。因在固體培養(yǎng)基上呈輻射狀生長(zhǎng)而得名。大多數(shù)有發(fā)達(dá)的分枝菌絲。菌絲纖細(xì)，寬度近于桿狀細(xì)菌，約 0.51微米?？煞譃椋籂I(yíng)養(yǎng)菌絲，又稱基質(zhì)菌絲，主要功能是吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，有的可產(chǎn)生不同的色素，是菌種鑒定的重要依據(jù)；氣生菌絲，疊生于營(yíng)養(yǎng)菌絲上，又稱二級(jí)菌絲。放線菌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與細(xì)菌相似，都具備細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、擬核等基本結(jié)構(gòu)。個(gè)別種類的放線菌也具有細(xì)菌鞭毛樣的絲狀體，但一般不形成莢膜、菌毛等特殊結(jié)構(gòu)。放線

28、菌的抱子在某些方面與細(xì)菌的芽抱有相似之處，都屬于內(nèi)源性抱子，但細(xì)菌的芽抱僅是休眠體，不具有繁殖作用，而放線菌產(chǎn)生抱子則是一種繁殖方式。真菌個(gè)體特征：真菌都有明顯的細(xì)胞壁，通常不能運(yùn)動(dòng)，以抱子的方式進(jìn)行繁殖。真菌通常又分為三類，即酵母菌、霉菌和蕈菌(大型真菌)，它們歸屬于不同的亞門。真菌的細(xì)胞既不含葉綠體，也沒(méi)有質(zhì)體，是典型異養(yǎng)生物。它們從動(dòng)物、植物的活體、死體和它們的排泄物，以及斷枝、落葉和土壤腐殖質(zhì)中、來(lái)吸收和分解其中的有機(jī)物，作為自己的營(yíng)養(yǎng)。真菌的異養(yǎng)方式有寄生和腐生。真菌常為絲狀和多細(xì)胞的有機(jī)體,其營(yíng)養(yǎng)體除大型菌外，分化很小。高等大型菌大都有定型的子實(shí)體。3、細(xì)菌、真菌、放線菌個(gè)體生理生

29、化反應(yīng)(1)淀粉水解實(shí)驗(yàn)結(jié)果從圖中可以看出，試驗(yàn)菌周圍的無(wú)色透明圈最大，其次是枯草桿菌，最小的是大腸桿菌。說(shuō)明細(xì)菌產(chǎn)生淀粉酶的能力較強(qiáng)，水解淀粉的能力也較強(qiáng)，其次是枯草桿菌，水解能力最弱的是大腸桿菌。(2)硫化氫的產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)由圖中可以看出，只有接種有枯草桿菌的培養(yǎng)基中的紙條變黑，表明枯草桿菌為陽(yáng)性，細(xì)菌和金黃色葡萄球菌為陰性。(3)石蕊牛奶實(shí)驗(yàn)根據(jù)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，可以看出大腸桿菌的試管沒(méi)有變色，說(shuō)明沒(méi)有產(chǎn)生酸性或堿性的物質(zhì)?？莶輻U菌發(fā)生酸凝固現(xiàn)象，且變紅，兩支細(xì)菌所在的試管已脫色，也出現(xiàn)月東化現(xiàn)象，有分層，下面的為灰黑色。4、環(huán)境條件對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響(1)溫度對(duì)微生物的影響溫度菌名、4oC28oC6

30、0oC枯草桿菌+大腸桿菌+注：一：不生長(zhǎng) + :生長(zhǎng)一般 + :生長(zhǎng)良好以上結(jié)果看出，大腸桿菌的最適溫度(30度左右)比枯草桿菌的最適溫度(60度左右)。高溫和低溫對(duì)微生物生長(zhǎng)均有抑制作用，只有最適溫度才適合微生物的生長(zhǎng)和繁殖。(2)紫外線對(duì)微生物的影響1 .在加黑紙的培養(yǎng)皿中，黑紙區(qū)域內(nèi)的菌落分布比較均勻，而且菌種長(zhǎng)勢(shì)較好，但是黑紙區(qū)域外 的幾乎沒(méi)有菌落，說(shuō)明在有六角星黑紙下的細(xì)菌沒(méi)有被紫外線照射抑制和殺死。2 .在有光照射的培養(yǎng)皿中，菌落在一部分區(qū)域較集中，在另一部分區(qū)域均勻分布，而且長(zhǎng)勢(shì)較好。 說(shuō)明光下因?yàn)橛行迯?fù)作用，多數(shù)細(xì)菌未被紫外線殺死。3 .在無(wú)光照射的培養(yǎng)皿中，菌落在邊緣分布較集

31、中，在中心處數(shù)量明顯較少，而且部分菌落發(fā)黃, 說(shuō)明長(zhǎng)勢(shì)較差，基本上被紫外線殺死。說(shuō)明暗處多數(shù)細(xì)菌因?yàn)闆](méi)有修復(fù)作用被紫外線殺死。(3)化學(xué)藥劑對(duì)微生物的影響“、處理ABCD菌名0.1 %HgCI22.5 %碘酒75 %酒精5%石炭酸靈桿菌+一枯草桿菌+一一注：一：沒(méi)有 + :較小 + :較大 + :抑制圈最大從總體上看，靈桿菌的抑制圈均大于枯草桿菌，說(shuō)明化學(xué)藥劑對(duì)靈桿菌的抑制作用大于枯草桿菌。(4)抗生素對(duì)微生物的影響、.、被抑制菌名稱抑制效果后尢f、黑曲霉枯草芽抱桿菌細(xì)黃鏈霉菌“ 5406”一+注：一：無(wú)抑制菌+ :有抑制菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，抗生素對(duì)黑曲霉沒(méi)有抑制作用，對(duì)枯草芽抱桿菌有抑制作用。四、實(shí)驗(yàn)總結(jié)與實(shí)驗(yàn)心得1、 對(duì)細(xì)菌、真菌、放線菌的簡(jiǎn)單總結(jié)（ 1 ）細(xì)菌細(xì)菌是所有生物中數(shù)量最多的一類，據(jù)估計(jì)，其總數(shù)約有5 X 1030個(gè)。細(xì)菌的個(gè)體非常小，目前已知最小的細(xì)菌只有0.2 微米長(zhǎng)， 因此大多只能在顯微鏡下看到它們。 細(xì)菌是生物的主要類群之一， 屬于細(xì)菌域。細(xì)菌一般是單細(xì)胞，細(xì)胞結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，缺乏細(xì)胞核、細(xì)胞骨架以及膜狀胞器，例如線粒體和葉綠體?；谶@些特征，細(xì)菌屬于原核生物。原核生物中還有另一類生物叫做古細(xì)菌，是科學(xué)家依據(jù)演化關(guān)系而另辟