“胃屏復(fù)”對(duì)大鼠應(yīng)激性胃黏膜損傷保護(hù)作用的形態(tài)觀察

1、“胃屏復(fù)”對(duì)大鼠應(yīng)激性胃黏膜損傷保護(hù)作用的形態(tài)觀察         【摘要】  目的  以透明質(zhì)酸為基質(zhì)，研制對(duì)胃黏膜屏障更具保護(hù)作用的新制劑，探索透明質(zhì)酸對(duì)黏膜的保護(hù)作用，拓展透明質(zhì)酸新的應(yīng)用范圍。方法  復(fù)制大鼠應(yīng)激性胃黏膜急性出血性糜爛損傷的動(dòng)物模型，制定胃黏膜損傷程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)和研究制劑有效性判定標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)前對(duì)實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物灌飼研究制劑3ml，對(duì)照組以等量生理鹽水灌胃。同時(shí)設(shè)立模型對(duì)照組驗(yàn)證模型。24h后處死動(dòng)物觀察胃黏膜外觀形態(tài)變化；切片觀察胃黏膜病理組織學(xué)改變。結(jié)果 

2、實(shí)驗(yàn)組胃黏膜外觀良好，未見(jiàn)明顯黏膜糜爛和出血灶；對(duì)照組則可見(jiàn)散在出血點(diǎn)和黏膜完整性的破壞；模型對(duì)照組出現(xiàn)全胃廣泛出血，黏膜表面覆蓋大量凝血塊。實(shí)驗(yàn)組有效率為90%；對(duì)照組有效率為22%。統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，P0.05。結(jié)論  實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示“胃屏復(fù)”對(duì)應(yīng)激性胃黏膜損傷具有明顯的保護(hù)作用。由此表明，透明質(zhì)酸可替代胃黏膜屏障的糖蛋白基質(zhì)而具有重要的應(yīng)用開(kāi)發(fā)價(jià)值。      【關(guān)鍵詞】  透明質(zhì)酸；制劑；形態(tài)學(xué)觀察；動(dòng)物模型      Preparation of protecting gastromucosa

3、  and observation  its effect on protecting of acute stress gastromucosa damage in rats     【Abstract】  Objective  Used hyaluronic acid as matrix， WEIPINGFU， a new preparation of protecting gastromucosa，was studied.Methods  The animal model of acute stres

4、s gastromucosa damage was reconstructed. The standards of  the gastromucosa damage and the protecting effect was worked out. The animals of experimental group were poured the WEIPINGFU 3ml into the stomach，and NS 3ml were poured into it in contrast group before the experiment. The animals were

5、treated after 24 hours，then the changes of the gastromucosal morphology and pathologic histology were observed.Results  The appearance of gastromucosa was fine and intact；there werent obvious gastromucosal erosion and bleeding points in the experimental group. It was seen a lot of spread bleedi

6、ng points and destroy of gastromucosa in the contrast group. The effective rate of the former is 90%；but the latter is 22%(P0.05).Conclusion  The test preparation has clearly the protecting effect to the gastromucosa damage.      【Key words】  hyaluronic acid；preparation

7、；morphologic observation；animal model      胃炎、胃黏膜糜爛、出血、胃潰瘍等疾病是危害人類健康的常見(jiàn)病、多發(fā)病。而不同病因?qū)е挛覆∽兙哂泄残缘奶卣魇俏葛つて琳系氖軗p。目前市售的許多藥品也正是基于保護(hù)和修復(fù)受損胃黏膜屏障而發(fā)揮治療作用。因此，人們從未停息對(duì)胃黏膜屏障更具保護(hù)作用的新型材料和制劑的研究和探索。本項(xiàng)研究就是以透明質(zhì)酸為基質(zhì)，佐以胃黏膜細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)劑等物質(zhì)而研制的類似天然胃黏膜屏障理化性質(zhì)的一種新型制劑（關(guān)于制劑的理化特征和藥劑學(xué)資料另文發(fā)表）。為了便于表述，暫將該制劑定名為“胃屏復(fù)”。眾所周知，正常胃黏膜屏

8、障是由胃上皮細(xì)胞、泌酸腺的黏液頸細(xì)胞和賁門(mén)、幽門(mén)腺共同分泌的以糖蛋白和碳酸氫鹽為主要成分的凝膠構(gòu)成。它在胃表面形成厚度約500m的凝膠層，一方面減少粗糙食物對(duì)胃黏膜的機(jī)械性損傷；另一方面有效地保護(hù)胃黏膜免受胃酸和胃蛋白酶的損害。本研究制劑的基質(zhì)透明質(zhì)酸是廣泛存在于動(dòng)物體內(nèi)的一類大分子粘多糖，在溶液中，因其分子存在眾多交聯(lián)鍵而形成分子網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，這就使透明質(zhì)酸溶液同時(shí)具有凝膠彈性和溶液粘性的雙重特性1。這種特征與正常胃黏膜屏障的糖蛋白基質(zhì)十分類似。因此，探索和研究透明質(zhì)酸治療胃疾病是對(duì)此類大分子粘多糖應(yīng)用領(lǐng)域的新的拓展。目前也尚未查見(jiàn)類似報(bào)道。      1

9、  材料與方法      1.1  動(dòng)物  SD大鼠，雌雄不限，平均體重120g（購(gòu)自四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)中心）。      1.2  研究制劑  本研究制劑基質(zhì)為人臍帶透明質(zhì)酸，本室提取，理化特性達(dá)到制劑標(biāo)準(zhǔn)2。其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。      1.3  動(dòng)物模型復(fù)制及標(biāo)本處理3  大鼠于實(shí)驗(yàn)前禁食48h，仰縛于鼠板，浸入20左右水中，水面高度平劍突。24h后麻醉處死。剖開(kāi)腹腔，在幽門(mén)和十二指腸連接處穿線結(jié)

10、扎。然后通過(guò)食道注入0.4%中性福爾馬林8ml到胃內(nèi)，結(jié)扎食道。切斷食道和十二指腸摘出全胃。30min后，沿胃大彎將胃切開(kāi)，平鋪觀察胃黏膜變化。最后將標(biāo)本固定于5%福爾馬林待切片鏡下觀察。      1.4  動(dòng)物胃黏膜損傷程度評(píng)級(jí)標(biāo)準(zhǔn)有效性判斷  0級(jí)：胃液清晰，黏膜表面無(wú)明顯變化，偶可見(jiàn)部分區(qū)域呈斑片狀發(fā)紅，與周圍黏膜境界不明顯，無(wú)出血點(diǎn)。級(jí)：胃黏液淡黃，黏膜腫脹，反光增強(qiáng)，多處不規(guī)則片狀和線狀充血發(fā)紅區(qū)，但無(wú)明顯出血和黏膜糜爛。級(jí)：胃液顏色棕紅，內(nèi)可見(jiàn)小片狀凝血塊。黏膜上皮完整性受損，可見(jiàn)多處散在出血灶，出血點(diǎn)呈咖啡色，直徑多在

11、1mm以下。級(jí)：胃液呈黑褐色，內(nèi)有大量凝血塊。表層黏膜剝脫，黏膜面覆蓋片狀新鮮和陳舊出血凝塊，用水沖洗后可見(jiàn)黏膜糜爛面。      實(shí)驗(yàn)組黏膜損傷在級(jí)以下為有效；級(jí)以上為無(wú)效。      1.5  實(shí)驗(yàn)分組  取動(dòng)物30只，隨機(jī)分成3組，每組10只。即：實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組和模型對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組在48h禁食后每只用研究制劑3ml灌胃；對(duì)照組采用生理鹽水3ml灌胃；模型對(duì)照組不做灌胃處理。      1.6  切片方法  石蠟切片，HE染色。&#

12、160;     1.7  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理  對(duì)實(shí)驗(yàn)資料收集整理后采用2檢驗(yàn)。      2  結(jié)果      2.1  實(shí)驗(yàn)后不同組別胃黏膜受損程度  實(shí)驗(yàn)后3組動(dòng)物胃黏膜損傷外觀形態(tài)變化情況見(jiàn)圖1。圖1“胃屏復(fù)”對(duì)應(yīng)激性胃黏膜損傷保護(hù)作用的形態(tài)變化比較   從實(shí)驗(yàn)標(biāo)本可見(jiàn)，實(shí)驗(yàn)組大鼠胃黏膜表面外觀良好，無(wú)明顯黏膜糜爛和出血灶，僅在部分新鮮標(biāo)本可觀察到幽門(mén)部黏膜腫脹和斑狀充血發(fā)紅區(qū)。而對(duì)照組則可見(jiàn)散在出血點(diǎn)和黏膜完整性

13、的破壞。模型對(duì)照組大多出現(xiàn)全胃廣泛出血，黏膜表面覆蓋大量凝血塊。根據(jù)上述黏膜損傷評(píng)級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，3組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃黏膜受損的評(píng)級(jí)情況見(jiàn)表1。表1  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物細(xì)黏膜受損的評(píng)級(jí)  (只) 注：與對(duì)照組比較P0.05   3組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃黏膜損傷評(píng)級(jí)分布表明，實(shí)驗(yàn)組大多為0級(jí)和級(jí)，對(duì)照組多為級(jí)，模型對(duì)照組多數(shù)為損傷嚴(yán)重的3級(jí)變化。另外，對(duì)照組有1只、模型對(duì)照組2只動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中死亡。      2.2  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃黏膜的病理組織學(xué)變化  將上述3組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃標(biāo)本分別進(jìn)行病理組織學(xué)觀察，結(jié)果見(jiàn)圖2、3、

14、4。      實(shí)驗(yàn)組大鼠全胃切片觀察可見(jiàn)黏膜完整性良好，未見(jiàn)明顯的糜爛出血灶，部分區(qū)域可見(jiàn)血管擴(kuò)張充血 （圖2）。 圖2實(shí)驗(yàn)組大鼠胃黏膜病理組織學(xué)變化 圖3對(duì)照組大鼠胃黏膜病理組織學(xué)變化   圖3顯示，對(duì)照組大鼠胃黏膜層糜爛出血，完整性破壞，黏膜下層充血，全胃切片可見(jiàn)多發(fā)出血灶。      模型對(duì)照組胃切片可見(jiàn)胃黏膜廣泛出血，部分區(qū)域出血深達(dá)黏膜下層（圖4），胃黏膜完整性嚴(yán)重破壞。全胃切片可見(jiàn)以幽門(mén)竇區(qū)域受損最重。圖4模型對(duì)照組大鼠胃黏膜病理組織學(xué)變化3  討論&

15、#160;     無(wú)論原發(fā)性胃疾病還是繼發(fā)性胃損傷，黏膜屏障的受損和完整性破壞往往是最常見(jiàn)的病理形態(tài)學(xué)變化。因此，探索更為有效的胃黏膜屏障保護(hù)方法和制劑不僅可應(yīng)用于胃疾病治療；而且對(duì)于預(yù)防嚴(yán)重創(chuàng)傷、休克、心衰、重癥感染等危重疾病向多系統(tǒng)器官功能衰竭（MSOF）轉(zhuǎn)化也具有十分重要的意義。如前所述，本研究旨在利用透明質(zhì)酸形成分子凝膠而構(gòu)成細(xì)胞周基質(zhì)的特性4，模擬和替代受損的胃黏膜糖蛋白基質(zhì)，以達(dá)到保護(hù)胃黏膜屏障的目的。從結(jié)果可見(jiàn)，實(shí)驗(yàn)前灌飼“胃屏復(fù)”研究制劑的實(shí)         驗(yàn)組胃黏

16、膜得到了有效保護(hù)。10只動(dòng)物中有9只黏膜損傷程度處于較輕微的0級(jí)或級(jí)。而對(duì)照組和模型對(duì)照組黏膜受損程度均為級(jí)和級(jí)。以實(shí)驗(yàn)有效性標(biāo)準(zhǔn)判斷，那么“胃屏復(fù)”對(duì)胃黏膜損傷保護(hù)的有效率達(dá)到90%。由此表明，以透明質(zhì)酸作為基質(zhì)的研究制劑對(duì)胃黏膜損傷的保護(hù)作用十分明顯。這不僅拓寬了透明質(zhì)酸的研究領(lǐng)域，而且還具有重要的開(kāi)發(fā)應(yīng)用價(jià)值。      本項(xiàng)研究所采用的動(dòng)物模型為應(yīng)激性胃黏膜急性出血性糜爛損傷模型，這是復(fù)制胃黏膜損傷較經(jīng)典實(shí)驗(yàn)方法。其特點(diǎn)是能較好地反映人類應(yīng)激性胃黏膜損傷的病理形態(tài)特征。同時(shí)方法簡(jiǎn)單，成功率高，資料顯示該方法成功率達(dá)90%以上3。在本項(xiàng)研究中，如果以大鼠胃黏膜損傷級(jí)和級(jí)為成功，那么模型對(duì)照組的成功率為100%。因此該模型不失為研究胃黏膜屏障保護(hù)極具實(shí)用價(jià)值的較好方法。&#