實驗九差示分光光度法測定維生素B1片的含量

1、實驗九差示分光光度法測定維生素Bi片的含量0H0H雉生*B(VitaminB,)CUHC!一、實驗?zāi)康? 掌握差示分光光度法的基本原理。2 熟悉標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的操作方法。二、實驗原理（一）差示分光光度法（簡稱A法）,它保留了通常的分光光度法簡便、快捷、直接讀數(shù)的優(yōu)點，又無需事先分離，并能消除干擾。方法：取兩份相等的供試液，分別制成兩種不同的化學(xué)環(huán)境（如在其一中加酸或堿，改變pH或在其一中加能與供試品發(fā)生某種化學(xué)反應(yīng)的試劑），然后將它們稀釋至同樣濃度后，分置于樣品池和參比池中，于適當(dāng)波長處，測定吸光度的差值（A）。應(yīng)用條件：供試品在不同的化學(xué)環(huán)境中以不同的分子形式存在，它們的吸收光譜有顯著的差異；

2、干擾物的吸收不受測定時化學(xué)環(huán)境的影響，光譜行為不變。定量依據(jù)：設(shè)x、y分別代表在兩種不同的化學(xué)環(huán)境中供試品的存在形式，它們在測定波長處的吸光度以Ax、Ay表示，背景和干擾的吸收度以Az表示，Az不受測定時化學(xué)環(huán)境改變的影響。根據(jù)吸光度加和性原則：=A樣品-百舉比=（4岸+-（+At）AxAyECL-EyCL坊）CLA4ocC即在供試液的一定濃度范圍內(nèi)厶A值與其濃度C呈線性關(guān)系，并消除了Az的干擾，可用標(biāo)準(zhǔn)曲線法或?qū)φ辗ǘ?。（二）維生素Bi片的測定維生素Bi分子中具有共軛雙鍵結(jié)構(gòu)，在紫外區(qū)有吸收，其紫外吸收隨溶液pH的變化1%而變化。在pH7的磷酸鹽緩沖液中具有兩個吸收峰，在232233nm處

3、，E1cm=345;在266nmEX=425o可用于維生素EX=425o可用于維生素B1片的差示1%處，Ei%n=255。在pH2時，最大吸收在246nm處,分光光度法的測定。三、實驗方法（一）測定波長的選擇精密稱取維生素B1100mg，用水溶解并稀釋成100ml，精密量取2ml二份，分別用緩沖液（pH7.0）和鹽酸液（pH2.0）稀釋成100ml,以相應(yīng)溶劑為空白，測定紫外吸收光譜。再將前者放于參比池，后者放于樣品池，繪制差示吸收光譜（見圖11）。差示光譜圖表明在247nm處有最大差示吸收值（A），確定247nm為測定波長。（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密稱取干燥至恒重的維生素BilOOmg，置100

4、ml量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。精密量取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml貯備液各二份，分別置100ml量瓶中，一份用緩沖液稀釋至刻度；另一份用鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻。取上述五組濃度相同，pH不同的溶液，在247nm處分別測定差示吸收值（A）。以濃度C為橫坐標(biāo)，以差示吸收值厶A為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或進行回歸，求得回歸方程和相關(guān)系數(shù)。（三）樣品測定取本品20片，精密稱定，研細。精密稱取適量粉末（約相當(dāng)于維生素B150mg），置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液2ml二份，分別置100ml量瓶中，分別用緩沖液和鹽酸液稀釋至刻度，搖勻。將前者置參比池中，后者置樣品池中，在247nm波長處測定差示吸收值。由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得維生素B1，濃度，計算維生素Bi片的標(biāo)示量。220260300圖維生章比吸收光譜«.廈沖潦b.扶融權(quán)ipHkO"c.墓示罡豪本品含維生素BKC12H17CIN4OSHCl）應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%110.0%。計算方法：r100_xW標(biāo)示蚩x100%=x100%四、注意事項1由于儀器波長可能存在差異，所給測定波長僅供參考，可照“測定波長的選擇”項下自行測定。2測