葉酸檢測(cè)方法研究進(jìn)展 醫(yī)學(xué)論文

1、    葉酸檢測(cè)方法研究進(jìn)展 醫(yī)學(xué)論文              本文由中國(guó)論文范文收集整理。1942年，Stokstad首次成功地合成了葉酸，并闡明了葉酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)。半個(gè)世紀(jì)過去了，葉酸一直是學(xué)術(shù)界的 研究 熱點(diǎn)。 目前 的研究證實(shí)，婦女孕前或妊娠早期缺乏葉酸是神經(jīng)管畸形發(fā)生的重要病因之一1。葉酸與同型半胱氨酸代謝關(guān)系密切，對(duì)預(yù)防心血管疾病的發(fā)生具有重要的生物學(xué)意義2。 葉酸是一組化學(xué)結(jié)構(gòu)相似，生化特性相近的化合物統(tǒng)稱，是由喋啶、對(duì)氨

2、基苯甲酸和1個(gè)或多個(gè)谷氨酸結(jié)合而成。食物中的葉酸絕大多數(shù)是以喋酰多谷氨酸(或稱多谷氨酸葉酸)的形式存在的。食物葉酸經(jīng)小腸粘膜細(xì)胞內(nèi)特異葉酰多谷氨酸水解酶的作用，水解為喋酰單谷氨酸(或稱單谷氨酸葉酸，PteGlu)后吸收。吸收后的單谷氨酸葉酸一部分又轉(zhuǎn)變?yōu)槎喙劝彼崛~酸，在肝臟、紅細(xì)胞及其他組織細(xì)胞內(nèi)貯存，其余部分則以單谷氨酸葉酸的形式分布于血漿、組織液、膽汁及尿液中。肝臟的葉酸濃度是血漿的幾百倍，但其單谷氨酸葉酸濃度與血漿相近。 葉酸以8種輔酶形式存在于生物體內(nèi)，為一碳單位的載體參與嘌呤、嘧啶等重要物質(zhì)的合成。用于評(píng)價(jià)人體葉酸營(yíng)養(yǎng)狀況最常用的檢測(cè)指標(biāo)是紅細(xì)胞葉酸及血清或血漿葉酸。目前，葉酸的檢測(cè)

3、 方法 已有多種，其中微生物法、同位素放射免疫法的使用最為廣泛。 一、微生物法 微生物法是檢測(cè)生物體內(nèi)葉酸的經(jīng)典方法，通常所用的微生物有干酪樣乳酸桿菌（L.casei)、糞鏈球菌和啤酒小球菌屬。此3種微生物對(duì)不同形式葉酸的敏感度不同。糞鏈球菌只對(duì)非甲基化葉酸敏感，如PteGlu、二氫葉酸(DHF)和四氫葉酸(THF)，可用于鑒別 分析 各種形式葉酸在不同檢測(cè)物的分布。L.casei對(duì)單谷氨酸葉酸、含2或3個(gè)谷氨酸葉酸(PteGlu2、PteGlu3)及其還原型衍生物均敏感，是3種微生物中反應(yīng)譜帶最寬的一種，也是最為常用的菌種。它對(duì)含7個(gè)谷氨酸葉酸(PteGlu7)的敏感度很小，約為對(duì)PteGl

4、u敏感度的1，故有人認(rèn)為L(zhǎng).casei對(duì)超過3個(gè)谷氨酸基團(tuán)的多谷氨酸葉酸無響應(yīng)。但有研究發(fā)現(xiàn)，L.casei對(duì)PteGlu4、PteGlu5、PteGlu6和PteGlu7的敏感度分別為對(duì)PteGlu的 65.6、19.9、3.5 及2.4，同時(shí)對(duì)某些形式的多谷氨酸葉酸的敏感度隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，其機(jī)理有兩種可能：其一，微生物在培養(yǎng)過程中合成水解酶，隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，水解酶產(chǎn)量增加，促使部分長(zhǎng)鏈谷氨酸水解斷裂；其二，細(xì)菌在培養(yǎng)過程中細(xì)胞壁對(duì)多谷氨酸葉酸的通透性增加。所以，盡管L.casei對(duì)葉酸的反應(yīng)譜帶較寬，但如檢測(cè)物中含有多谷氨酸葉酸須將樣品在檢測(cè)前加入多谷氨酸葉酸水解酶進(jìn)行水解，使各種

5、形式葉酸均轉(zhuǎn)變成單谷氨酸葉酸，否則檢測(cè)結(jié)果不能代表其葉酸總含量。 盡管微生物法靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，但也有許多局限性，如整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)，批間檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性差，檢測(cè)結(jié)果受樣品中所含抗葉酸藥物或抗生素成分的 影響 等。用-乳酰胺酶處理樣品后，可消除青霉素和先鋒霉素等抗生素對(duì)葉酸檢測(cè)結(jié)果的干擾5。 微生物法除可用于檢測(cè)血清和全血葉酸外，還可用于檢測(cè)紙血片葉酸6，檢測(cè)結(jié)果為葉酸與血紅蛋白的比值。由于紙血片標(biāo)本制備技術(shù)簡(jiǎn)單，紙血片葉酸穩(wěn)定性較好，故該法對(duì)大規(guī)模人群葉酸營(yíng)養(yǎng)狀況的流行病學(xué)調(diào)查具有重要的意義。 二、同位素放射免疫法 盡管微生物法得到各種改進(jìn)，但仍因耗時(shí)大，操作復(fù)雜而不能得到廣泛使用。70年代初

6、，有學(xué)者提出 同位素放射免疫法檢測(cè)血清葉酸。該方法具有快速、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，同時(shí)由于葉酸放射免疫試劑盒的出現(xiàn)，很快得到普及，尤其廣泛 應(yīng)用 于臨床實(shí)驗(yàn)室。 放射免疫法與微生物法檢測(cè)葉酸，除原理不同外，檢測(cè)結(jié)果的意義也有所不同。對(duì)大量標(biāo)本總體而言，兩種方法結(jié)果相關(guān)性較好，但對(duì)個(gè)體標(biāo)本，兩種方法結(jié)果的差異較大。微生物法對(duì)多谷氨酸葉酸響應(yīng)值低，不能直接用于檢測(cè)葉酸含量。但微生物法對(duì)所有單谷氨酸葉酸及其衍生物的反應(yīng)靈敏度相同，故在用葉酸水解酶處理樣品使所有葉酸形式轉(zhuǎn)變?yōu)閱喂劝彼崛~酸后進(jìn)行檢測(cè)，可得到準(zhǔn)確的葉酸值。同位素放射免疫法對(duì)多谷氨酸葉酸反應(yīng)的相對(duì)靈敏度有較大的差別，隨著葉酸濃度增加，反應(yīng)的相對(duì)靈敏度增加，但多谷氨酸葉酸的反應(yīng)曲線不可能與單谷氨酸葉酸的反應(yīng)曲線重合；另一方面，多谷氨酸葉酸與結(jié)合蛋白的親合性與單谷氨酸葉酸相比較高，不同的單谷氨酸葉酸衍生物反應(yīng)靈敏度不同，放射免疫法也不適用于檢測(cè)單谷氨酸葉酸衍生混合物。由于上述原因，盡管放射免疫法可用于檢測(cè)和評(píng)價(jià)葉酸的營(yíng)養(yǎng)狀況，但從定量檢測(cè)的角度來講，難以得到準(zhǔn)確的葉酸含量值。 關(guān)鍵詞:進(jìn)展,研究,方法,檢測(cè),葉酸,結(jié)果,醫(yī)學(xué)論文,葉酸檢測(cè)方法研究進(jìn)展 內(nèi)容摘要:本文由中國(guó)論文范文收集整理。 1942年，Stokstad首次成功地合成了葉酸，并闡明了